Диссертация (Сравнительный анализ клинического течения и микробного пейзажа у больных с различными формами рожи), страница 8

Среди осложнений наблюдались абсцессы, гнойно-некротические раны,инфильтраты и острые флебиты. Распределение осложнений в зависимости от формызаболевания представлено в таблице (Таблица 6).Комплексная терапия рожи осуществлялась у всех пациентов в полномсоответствии с общепринятыми стандартами лечения рожи. Для лечения больных рожейиспользовали моно- (80,4%) и комбинированную терапию (19,6%) в зависимости отпоказаний и противопоказаний. При монотерапии препаратом выбора являлся34Таблица 6. Осложнения при разных формах рожи у обследованных больных.Форма рожиОсложненияЭритем.(n = 29)абс.(%)Абсцесс - 801 (14,3%)Гн.-некр.

раны - 50Инфильтрат - 4Эрит.-булл. Эрит.-гемор.(n = 7)(n = 5)абс.(%)абс.(%)Бул.-гемор.(n = 75)абс.(%)Всего(n = 168)абс.(%)2 (3,5%)5 (6,7%)4,76 %005 (6,7%)2,98 %004 (7%)02,4 %Острый флебит -1001 (14,3%)4 (7%)5 (6,7%)5,95 %Всего - 2702 (28,6%)10 (17,5%)15 (20,1%)16,1 %пенициллин (51,2%), цефалоспорины I и III поколения (24,4%), а также в отдельныхслучаях – фторхинолоны и макролиды. При комбинированной терапии использовалисочетания пенициллина с цефалоспоринами и фторхинолонами.Среднее количество койко-дней составило 11,1.

В исходе заболевания полноевыздоровление отмечено у 47,6% человек, улучшение состояния - у 46,4% и перевод вхирургическое отделение - 6% больных.35ГЛАВА 4. Материалы и методы исследований4.1. Бактериологическое исследование биопроб от больных рожей.Всегобактериологическое исследование было проведеноу50 больных сдокументированным диагнозом рожи нижних конечностей, давших информированноесогласие на обследование. Всего бактериологическим методом исследовано 50 пробвенозной крови, 49 пробвоспалительногоочагасмывови32споверхностипробы содержимогокожи в областиместногобулл (суммарно - 131 пробабиоматериала).4.1.1. Методики взятия и обработки биопроб для проведения бактериологическогоисследования.Материалами для исследования служили кровь, мазки с кожи в области очагазаболевания и пунктаты булл.

Взятие биологического материала осуществляли у больныхпри поступлении больного в стационар до начала применения антибиотикотерапии. Сбори транспортировка биоматериалов в лабораторию проводили в соответствии сметодическими указаниями [69].Кровь для исследования отбирали во время подъема температуры путем пункциикубитальной вены.

Участок кожи над выбранным сосудом дезинфицировали тампоном,смоченным 70% этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 5% растворомйода, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 сек. После высыханияобработанного участка кожи стерильным шприцем отбирали кровь в объеме 10-15 мл.После венопункции для предотвращения возможного раздражения (ожога) участка кожипациента снимали остатки йода с помощью тампона, смоченного 70% этиловым спиртом.Отделяемое с раневой поверхности отбирали с помощью 2 ватных стерильныхтампонов, извлеченных из одноразовых тупферов с транспортной средой Amies (Sarstedt,Германия).

Один тампон использовался для микроскопии, а другой - для посева. Передотбором материала кожу вокруг раны предварительно обрабатывали 70% этиловымспиртом, затем сухой стерильной салфеткой удаляли с поверхности раны некротическиемассы, детрит, гной, затем проводили забор материала 2 тампонами круговымивращательными движениями от центра к периферии, плотно прижимая тампоны кповерхности раны, стараясь добиться максимальной нагрузки тампонов материалом,вплоть до полного его насыщения. Далее тампоны помещались в емкости со средойAmies, из которых они были извлечены.36Пункцию булл и аспирацию их содержимого проводили после предварительнойдезинфекции поверхности кожи 70% этиловым спиртом и 5% раствором перманганатакалия.

Аспирировали самую глубокую область очага, стараясь не загрязнить пробуповерхностной микрофлорой. После пункции кожу повторно обрабатывали 5% растворомперманганата калия. Аспирированную жидкость доставляли в лабораторию в шприце,плотно закрытом стерильной силиконовой пробкой.Отобранные биоматериалы не позднее 1-2 ч. с соблюдением температурного режима(в термоконтейнерах) доставлялись в бактериологическую лабораторию.4.1.2. Методика проведения микробиологических исследований.Микробиологические исследования выполняли в соответствии с приказами иметодическими указаниями [71, 83] на базе бактериологической лаборатории 2 КИБ ДЗг.Москвы (зав.лаб. – к.м.н.

Свистунова Т.С).4.1.2.1. Посевы крови. Для посевов крови использовали флаконы с двухфазнойсредой для аэробных - Haemoline Performance Diphasic и анаэробных - HaemolinePerformance Anaerobic микроорганизмов (bioMerieux, Франция). Посев крови проводилиследующим образом: над пламенем спиртовки открывали защитный колпачок флакона,обрабатывали резиновую пробку 70% спиртом, вносили кровь из шприца во флакон,предварительно поменяв иглу, вновь обрабатывали 70% спиртом пробку флакона изащитный колпачок, закрывали последним флакон и осторожно, чтобы не замочитьпробку, перемешивали круговыми движениями содержимое флакона.Флаконы с засеянной кровью инкубировали в течение 6 недель в термостате при 370С.

Посевы просматривали ежедневно в течение первых 8 дней. При выявлении видимогороста делали мазки с окраской по Граму, и в соответствии с данными микроскопииидентифицировали выделенные микроорганизмы.При отсутствии роста на 3, 5, 8 день проводили высевы на чашки Петри с 5%кровяным агаром и мазки на стеклах с последующей окраской по Граму. Посевы начашках инкубировали в термостате при 37 С. В случае выделения культур проводили ихидентификацию по вышеописанной схеме.При отсутствии роста на 9-10 день давали отрицательный ответ. Однако, флаконы спосевами крови не утилизировали, а продолжали выдерживать в термостате при 37 С втечение 4-6 недель, проверяя наличие роста 2-3 раза в неделю. Это проводили с цельювыявления медленнорастущих видов микроорганизмов и микрофлоры в L-форме.4.1.2.2. Посевы мазков с кожи и аспиратов из булл проводили параллельно натриптиказо-соевый агар с 5% дефибринированной кровью барана и селективнодифференциальные среды: маннит-солевой агар, среду Эндо и агар Сабуро (все среды37производства bioMerieux, Франция) методом "истощающего" посева для полученияизолированных колоний.

Посевы инкубировали в термостате при 37о С в течение 18-24 ч.При отсутствии роста в первые сутки посевы оставляли для дальнейшего подращивания втермостате до 5 сут. с ежедневным визуальным просмотром посевов. Отрицательныйрезультат выдавался после 5 сут. безрезультатной инкубации.При обнаружении "подозрительных" колоний проводили их идентификацию спомощью коммерческих тест-систем производства фирмы bioMerieux (Франция). Дляидентификации стрептококков и родственных им микроорганизмов использовали тестсистемуRapidID32Strep,стафилококков,микрококковиродственныхиммикроорганизмов - ID 32Staph, Enterobacteriaceae и других грамотрицательных палочек ID 32E, неферментирующих микроорганизмов - ID 32 GN. Идентификацию грибовпроводили с помощью тест-системы ID 32C.Оценкуполученныхрезультатовпроводилинаполуавтоматическомбактериологическом анализаторе ATB Expression (bioMerieux, Франция).4.1.2.3.Иммунологическаяидентификациякультурстрептококковистафилококков.

Иммунологическая идентификация выделенных культур осуществляласьс помощью метода латекс-агглютинации. Для идентификации стрептококков групп A, B,C, D, F, G по Lancefield использовали Pastorex Strep, стафилококков - Pastorex Staph Plus(Bio-Rad, Франция) по инструкциям к тест-системам.4.1.2.4. Определение чувствительности культур к антибиотикам. Все выделенныекультурыпроверялиначувствительностькантибактериальнымпрепаратам.Антибиотикограммы cчитывали на полуавтоматическом бактериологическом анализатореATB Expressionсо стрипов АТВ (bioMerieux, Франция), предназначенных дляполуколичественного определения чувствительности к антибиотикам.

Определениеантибиотикочувствительностистафилококков - ATBстрептококков проводили на стрипахStaph 5,ATB Strep 5,Enterobacteriaceae - ATB G-5, неферментирующихмикроорганизмов - ATB PSE 5.4.2. Методика проведения ПЦР с гибридизационно-флюоресцентной детекцией вреальном времени.4.2.1. Методики исследования при постановке ПЦР.4.2.1.1. Тестированные в ПЦР микроорганизмы.Методом ПЦР в различных биоматериалах больных рожей (кровь, пунктат из очагаместного воспаления, пунктат вне очага, пунктат булл) исследовали присутствие ДНКмикроорганизмов: Staphylococcus ssp., Streptococcus spp., Streptococcus pyogenes,Streptococcus pneumonia, Streptococcus dysgalactiae ssp. Equisimilis, Staphylococcus aureus38(MSSA, MRSA), Staphylococcus capitis, Staphylococcus hominis, MRCoNS, Klebsiella spp.,Enterococcusspp.,Haemophilusinfluenza,Proteusspp.,Pseudomonasaeruginosa,Corynebacterium mucifaciens, Cloacibacterium normanense, Escherichia coli.4.2.1.2.

Порядок взятия биологического материала для постановки ПЦР.Участок раневой поверхности (у больных с буллезно-геморрагической формой),область местного воспалительного очага (у пациентовс другими формами рожи)размером 2х2 см2 обрабатывали 3% раствором перекиси водорода и 60% спиртом.Шприцем с иглой 8 мм осуществляли пункцию подкожной клетчатки на глубину 1-2 см саспирацией содержимого (жировая клетчатка) в объеме 0,5-1,0 мл.

Затем данная областькожи обрабатывали 5% раствором перманганата калия. Пункцию подкожной клетчатки запределами воспалительного очага (на расстоянии 0,5-1,0 см) проводилиподобнымобразом. Также отбирали содержимое неповрежденных булл (0,2-1,0 мл) в областиместного очага. Венозную кровь для исследования в объеме 10,0-12,0 мл получали путемпункции кубитальной вены.Полученный биологический материал в объеме 0,5 мл переносили в стерильныепробирки и отправляли для исследования в отдел молекулярной диагностики иэпидемиологии ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (зав.

отделом - к.м.н.Г.А.Шипулин).Сбор,хранениеитранспортировкуклиническогоматериалаосуществляли согласно МУ 1.3.2569-09 [70].4.2.1.3. Экстракция ДНК из материала проводилась с использованием наборареагентов ДНК-Сорб-С (ФБУНЦНИИЭ Роспотребнадзора), а из образца крови – спомощьюнаборареагентовMolYsisComplete5(Molzym)пометодике,предусматривающей избирательный лизис человеческих клеток и гидролиз ДНК человекас последующим выделением нуклеиновых кислот микроорганизмов.