Диссертация (Сравнительный анализ клинического течения и микробного пейзажа у больных с различными формами рожи), страница 9

Полученные послеэкстракции образцы ДНК анализировались методом полимеразной цепной реакции сгибридизационно-флуоресцентнойдетекциейпродуктовамплификацииврежимереального времени с использованием зарегистрированных наборов реагентов.4.2.1.4. Постановку и анализ результатов амплификации выполняли на приборе ссистемой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени» «RotorGeneQ» («Qiagen», ФРГ) в соответствии с инструкцией производителя с соблюдениемусловий работы согласно правилам работы с материалом, содержащим микроорганизмыI–IV групп патогенности» (2010) [70].

Качество взятия биологического материала и егохранения, контроль выполнения анализа оценивался при помощи использованияэкзогенных и/или эндогенных внутренних контролей [ 22, 23, 58].394.3. Электронно-микроскопическое исследование биоматериалов при различныхформах рожи.4.3.1.Исследованныебиопробы иматериалы:мазки-отпечаткиизочагавоспаления, пунктаты ткани из очага воспаления, содержимое булл, колонии клиническихизолятов микроорганизмов, полученные из очага воспаления и из содержимого булл,препараты циркулирующих иммунных комплексов.4.3.2.

Методы электронной микроскопии.4.3.2.1. Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ).Для анализа методом сканирующей электронной микроскопии фиксированные в10% нейтральном формалине образцы помещались на специальный столик на которыйпредварительно был наклеен карбоновый скотч. Далее образцы напылялись золотомтолщиной 5нм в напылительной установке SPI-MODULE Sputter Coater (SPI Supplies,США), после чего исследовались в сканирующем электронном микроскопе Quanta 200 3D(FEI Company, США) в режиме высокого вакуума при ускоряющем напряжении 30 kV.4.3.2.2.

Трансмиссионная (просвечивающая) электронная микроскопияАнализ субмикроскопической организации циркулирующих иммунных комплексов(ЦИК),культурклиническихизолятовбактерийпроводилсяспомощьютрансмиссионного электронного микроскопа (ТЭМ). Предварительно проводиласьфиксация образцов по методу Ito-Karnovsky с дополнительной фиксацией 1% воднымраствором четырехокиси осмия и 1% водным раствором уранилацетата. Дальнейшаяподготовка образцов включала в себя обезвоживание в спиртах (этаноле) восходящейконцентрации (от 50о до 100оС), и заливку в метакрилатную смолу LR White постандартной общепринятой методике.

Полимеризация смолы проводилась при +56° С втечение 24 час. С помощью ультратома LKB-3 получали ультратонкие срезы, которыеконтрастировали1%растворомцитратасвинца.Срезыанализировалисьвтрансмиссионном электронном микроскопе Jeol 100B (Japan).Энергодисперсионный анализ микроэлементного состава содержимого буллы.Анализ химического состава образцов был проведен с помощью приставки ксканирующему электронному микроскопу Quanta 200 3D - EDAX (EDAX, USA) [34, 167].4.4. Статистическая обработка.Полученные результаты подвергались обработке методами вариационнойстатистики с использованием программ «Biostat», «Statistica for Windows», версия 6.0(StatSoft), «Microsoft Excel» [16, 27, 28, 76].40ГЛАВА 5.

Подробная клинико-лабораторная характеристика заболевания угоспитализированных больных рожей.5.1. Клинико-лабораторнаяхарактеристика ритематозных и геморрагических формрожи.Под нашим наблюдением находились 168 больных, госпитализированных в КИБ№ 2 г.Москвы: с эритематозной формой рожи (эритематозная и эритематозно-буллезная)под наблюдением находилось 36 пациентов вгеморрагическимиформамироживозрасте от 24до 83(эритематозно-геморрагическаяилет; сбуллезно-геморрагическая) под наблюдением находилось 132 пациента в возрасте от 21 до 86 лет(Таблица 7).Большинство обследованных больных эритематозными формами рожи были моложе65 лет -77,8% , лица старше 65 лет составляли 22,2%.

Средний возраст - 56,1 года.Преобладали лица женского пола (58,3%). Степень тяжести заболевания былаверифицирована как средняя у всех пациентов.Большинство пациентов (61,1%)поступали на лечение в первые дни болезни, в лихорадочном периоде, длительностькоторого на фоне лечения в отделении составляла 1,8±0,5 дня. Эритема возникала на1,25±0,11 день от начала заболевания, длительность ее 6,3±0,35 суток. Лимфангоитнаблюдалсяу 7 пациентов (19,4%). Сопутствующимизаболеваниямиявлялисьзаболевания сердечно-сосудистой системы (58,33%), сахарный диабет (22,22%), ожирение(27,78%), хроническая лимфатическая (41,67%) и венозная недостаточность (52,77%),Таблица 7.

Клиническая характеристика заболевания у больных эритематозными игеморрагическими формами рожи (n = 168)Эритематозная рожаПоказательВозраст:n = 36Моложе 65(%)Геморрагическая рожаn = 13277,867,4м38,8938,6ж38,8928,822,232,6м2,788,3ж19,4224,5Всего41,674758,3353Старше 65(%)41Итого100100(Продолжение таблицы)Сроки госпитализации:1-2 д.б.61,125,83-4 б.д.30,6 *39,4≥5 день болезни8,3 *34,8Всего10010080,61-9,4-Эритематозно-геморрагическая-43,2Буллезно-геморрагическая-56,8Формы рожи:ЭритематознаяЭритематозно.-буллезнаяКратностьПервичная2561,4 #заболевания:Повторная16,725,8Рецидивирующая58,312,9 #15.6%12%Верхние конечности27,8%%18,9%Нижние конечности5,6%68,2% #Иное13,4%2,3% #СопутствующиеCCЗ58,3362,9заболеванияХВН52,7752,3ХНЛС41,678,9СД22,2227,3Ожирение27,7825Микоз22,2231,8Абсцессы2,78-Флебиты9,5--Инфильтраты-3,8Гн.-некротич.

раны-3,822,254,5 #Улучшение7538,6 #Перевод в хир.отделение2,86,8Локализация:Осложнения:Исходы:ЛицоВыздоровлениеПримечание: * - достоверность различий в сравнении с 1-2 д.б.; # - то же –с эритематозной рожей.42грибковые заболевания стоп и ногтей (22,22%). 77,78% пациентов имели более одногосопутствующего заболевания.Прианализепрофессиональнойпринадлежностипациентоввыявлено,чтоработники умственной сферы составляи 25%, люди, занятые физическим трудом – 19,4%,пенсионеры – 33,3%, лица, имеющие инвалидность – 22,2%. Таким образом, непрослеживалась четкая связь рода деятельности человека, его профессиональнойпринадлежности с риском развития заболевания.Осложнения возникли у двух пациентов (5,6%): в одном случае – абсцесс (2,8%), вдругом – острый флебит (2,8%).Все больные эритематозной формой рожи получали антибактериальную терапию: 94,4%- монотерапию, 5,6% - комбинированную терапию из 2-х препаратов.Распределение больныхгеморрагической рожей по полу было приблизительноравным: мужчин - 47%, женщин - 53%.

Большинство обследованных больных былимоложе 65 лет – 67,4%,группа старше 65 лет составила 32,6%. Средний возрастобследованных больных геморрагической рожей - 57,6 лет. Преобладали пациенты сосреднетяжелым течением рожи (93,9%), тяжелое течение рожи отмечено в 6,1% случаев.Большинство пациентов (39,4%) поступали на лечение на 3-4 день болезни, влихорадочном периоде, длительность которого на фоне лечения в отделении составляла2,9±0,27дня. Эритема возникала на 1,5±0,06 день от начала заболевания, длительность ее 6±0,18 суток. Лимфангоит наблюдался в 28% случаев.Сопутствующей патологией являлись заболевания сердечно-сосудистой системы(62.87%), сахарный диабет (27,27%), ожирение (25%), хроническая лимфатическая(9,84%) и венозная недостаточность (52,27%), грибковые заболевания стоп и ногтей(31,81%); 86,67% больных имели более 1 сопутствующего заболевания.Распределение по профессиональному признаку больных геморрагической рожейвыглядело следующим образом: работники интеллектуального труда - 27,3%, физическоготруда – 25%, пенсионеры – 31%, лица, имеющие инвалидность, – 16,7%.

Осложнениявозникли у 18,9%.больных.Все больные геморрагической рожей получали антибактериальную терапию: 40,5%человек - монотерапию, комбинированную из двух препаратов - 20,2% (2 человека сэритематозными формами рожи и 32 человека – с геморрагическими, р=0,02), такимобразом, комбинированную терапию, в основном, получали геморрагическими формамирожи. Длительность нахождения больных в стационаре составила, в среднем, 10,1 дня (от4 до 25 дней.43Лабораторные данные представлены в Таблице 8.При эритематозных формах рожи среднее значение гемоглобина составило141,9±2,9 г/л.

Средний лейкоцитоз составил 12,9х109/л, сдвиг влево был незначительным,индекс Кальф-Калифа, в среднем, для данной группы пациентов составил 2,3±0,5.Тромбоцитоз составлял 270,8±18,6х109/л, уровень мочевиныумеренно повышена всреднем 7,11±0,57ммоль/л. Креатинин 109,4±9,6 мкмоль/л, причем у большинствапациентов (75%±7,2) он находился в пределах лабораторной нормы, у 5,6%±3,8 былменее 60 мкмоль/л, у 19,4%±6,6 более 120 мкмоль/л.Уровень глюкозы венозной крови составилв среднем 6,4 ±2,0 ммоль/л. С-реактивный белок у большинства пациентов был повышен, его среднее значениесоставило 56,7±16,2 мг/л. Из параметров КЩС оценивался уровень Na: у большинствапациентов он находился в пределах лабораторной нормы и в среднем составлял142,2±0,95ммоль/л.

Протромбин в среднем был равен 86,7%±1,6. Антистрептолизин-О всреднем составлял 112,9 ±41,7 Ед., у 10 пациентов превышал предельно допустимыйуровень в 200 Ед .При геморрагических формах рожи гемоглобин в среднем составлял 133,2 ±1,6 г/л: умужчин анемия отмечалась сравнительно реже, чем у женщин, однако разница оказаласьстатистически недостоверной (t=1,8). Лейкоцитоз в среднем был равен 12,66±0,39х109/л,со значительным сдвигом влево, индекс Кальф-Калифа составил 4,9±1,8, тромбоцитыравнялись 235,6±9,7х109/л. Мочевина была умеренно повышена до 7,4±0,29 ммоль/л,креатинин в среднем приближался к 104,1±4,98 мкмоль/л.