Глик, Пастернак - Молекулярная биотехнология - 2002 (947307), страница 70
Текст из файла (страница 70)
Мо»ча». 1986. Рго»есйоп оГ саШе а8а!пк! Гоо»-нп»1-шои»Ь йкеаке Ьу а куп»йс»к рер»Ые. Вс!енсе 232! 639 — 641. Ре«8пкоп М. 199!. Рго8гекк»о»чагдк шЫек соп»го1. Тгепгй ВшгесЬпо!. 9! 7 — 11. Е1пйе)к»ей! А., К. Р. Вйча. !989. $ Ые гесошЫпап» чассшек 1ог рои$»гу. Тге!»»)к ВГогесйпо!.
7: 273 -277. Нехпег С., А. Нора, В. Моки. 1987. Ргечепйоп оГ чнссиин ч!гик !п$ес»юп ш !пипшюдейс»еш нисе Ьу чес»ог-д!гес»с»$11.,-2 ехргекяоп. Лав»ге 330: 259-262. Вакцины 245 6гайап! Г. 1,. 1990. Лдепочпьеи ыи ехргеияоп нес!от ипс1 гесошЬтпап! нассшея Тгеосй //(отесйпо/. 8: 85 — 87. Нопнйг М. А.„В.-%.
Е. Гее, В. Л. ОИ!оп, Си Наг(И. 1995. Рготесдче шцпипйу адаспя тиЬегси1ояи Ьтдисес1 Ьу нассптыИоп снЬЬ спи!ог ех!гаседи!аг рюти(пь о! МусоЬастег/ат тиЬетса/отй. Ртос. Ь/ат/. Асад. Юс/. (/оА 92:!530 — 1534. Лопеи Т. К., Б. 1,. Ной!пап. !994. Ма!ипа1 нассше дене!оршеп!. Сдп. М/сгоЬ/о/. //ен. 7: 303 — 310. Карет Л. В., Н.
Г,ос1ааап, М. М. Ва1йш, М.М. (ечпе. 1984. Л гесотпЫпап! Иче оги! сйо!егы насстпе. Б(о/уесйао/оду 2: 345 — 349. Карет Л. В., Н. Гос!с!пап, М. М. Втдйп(, М. М. Гечпе. 1984. КесснпЬитып! поп!охйюдепсс !7Ьпо сйо/етое ягапв ии апепиатес1 сйо1еги чассше сапйдатеа. /нагиса 308: 655 — 658. Карет Л. В., Л. О. Могпя Лг., М.
М. 1 ечпе. 1995. СЬо!еги. С!т. /)/(стоЬ(о!. Кен. 8: 48 — 86. Киийттч О. С., И. Х Ьсиаси, 1. А. Опий!4, К. чн'. Гавада, В. Мохи, О. В. КеЫ!ег. !991. 1пс1истюп оГ Р!аатойит ~а!с/рагит !!апаш(ияоп-Ыосй!пд апИЬойеи Ьу гесотпЬ!пып! чассшта чпв. 5с/епсе 252: 13! 0 — 1313. Кнррег Н., чч. Кедег, С. Кнгх, В.
Гогах, Н. Всйадег, К Ггипхе, К. В!той!па(ег, О. Мап!иагй, Тт. О. Хаи1аМсу, Р. Н. !!о(исйпе(аег. 1981. С!оп)пд оГ сОЫЛ о1' гпа!ог аптгдеп о!' Гоо! апд пюисй йиеиие чпж апд ехргеииюп ш К со/1. А!агате 289! 555 — 559. Гниду 1. А., О. ОотчЬеп1со, С. С. В(гаопиеп„ Р.
чн'. Веппап. 1984. РппесИоп оГ нисе Гтош !ерйа1 Ьегреи яшр!ех и!гии спГесИоп Ъу чыссшитюп нч!Ь а иесгетес1 Готе о( с!опед 81усорготеш Г). Рдо/Тесбао/оду 2: 527 — 532. Ьисне К. Б., Р. М. Кедег, В. Л. КеесЬ, А. Л. Оачиоп, Ъ'. %йапд, А. Л. Могдап, Е. К1еГГ, К.
Ч'. ЕИв. 1987. стипседы-хоитег чгии ии а 1Ые нес!от 1ог Гйе ехргеьяоп оГ1огегдп денет Рте. Ь/ад. Асад. Бс/. (/5А 84! 3896 — 3900. Ме1саЫпоы Л. Л., Л. С. Вас!оГГ. 1994. СЬо!ета наес!нее: ИИЬИпд ап апс1еп! исошде. Бс/епсе 265! 1387-1389. Мссйе1 М.-Г, Н. 1.. Оачи, М. ИсЫееГ, М. Мапо)пт, Р. ТюПав, К. О.
%йа!еп. 1995. ИЧЛ-шейы!ед пппшпгеаюп то !Ье Ьерыт(т!ы В ииг(асс апддеп сп гоке: андреев оГ Гйе 1штпогы! геиропие тпппк ЬериИтга В чга) шГесИоп сп Ьшпипз. Ртос. Л'ат/. Асад. 5с/. (/5А 92: 5307 — 531!. М!пег Л. Х., О. Е. НптЬу. 1990. Ъисс)п)ы чгия ы четка!Ие тоо1 Гог шо1еси!аг Ью!од(итя Тгеасй И/отес/жо/. 8: 20 — 25. Моих В.
1991. 5/с!се(п)ы чтив а тоо! Гог геиеигсЬ ипд чыссспе с1ече!оршеп!. 5с/еосе 252: 1662 — 1667. )н)айе1 О. Л., Р. Ь. Ге1дпег. 1993. (3(тес! депе !гиии(ег 1ог иппппютйегиру апс1 пппюпгха!юп. 7тепсй В/отесйтсо/. 11: 211 — 215. )летн!оп В. М. С., С. О. ЛасоЬ, В. А. О. о!осйег. !989. 1пнпипогеиропие то сЬо!ега тохш ерйоре !пиес!ед !и Ха/толе//а ЙадеИш. 5с/еасе 244: 70 — 72. )с)иыиепхчге18 К. В., С.
А. вопд. 1994. Ми1аги чассшея пш(Ир1е !ыгдети. 5с/епсе 265: 1381 — 1383. Оейеп В., Н. Непдаг!пег, К. М. Узп1сегпаде!. 1991. Ъ'ысс!пиИоп Гог сдиеаие. ос/еасе 251: ! 95 — 197. Рао)е!И Е., Л. Тат!адда. Лапиату 1995. 1птет(егоп иепьйгче гесошЬтпап! рохчпь чыссше. ().К расеи! 5, 378, 457. Ка!айа М. 1987. г/ог!дсн)де оррогсишИеи ш депеИ- саПу епдшеегес1 ныссптеи.
В(о/Тесйпо/оду 5т 1154 — 1158. Яхетпоге О. К., А. А. Вгапедгош, Л. С. Вас)о1Т. !995. Лттепиатес1 8!аде!Ы аи а О)нЛ де)гнету неЫс!е !ог Г)ХЛ-п)ейатед пппшшхит!оп. Юс/етссе 270: 299-302. В!очег С. К., Ъ'. Г. Ие 1а Сгпх, Т. К. Гиеты(, Л. Е Вит(е(п,?.А. Вепсоп, 1,.Т. Веппеп, О. Р. Вяни), Л. Г. т'онпд, М. Н. Еее, О. К НаНпИ, В. В. Впаррег, К. О. Ваг)еКа, Ч'.
К. ЛасоЬы, Лг., В. К. В(оош. 1991. 74енн иие о( ВСО 1ог гесошЫ- пап! часстпея Ь/агате 351! 456 — 460. Таад О.-С., М. Ое5т11, В. А. Лойпатоп. !992. СепеИс ипшипыытюп Ы а ьцпр!е ше!Ьод Гог еИс(Ипд ип иппшпе геиропие. Ватаге 356: 152--154. Тиг(адда Л., Е. Рао)е!И. 1988. КесотпЬшып! нисстп)а ч(гиз чисс)пея Тгеттдт ///отесйтто!. бт 43-.46.
Т1!иь К. 6., Л. Гы Оие(гои-Г11йо, 1.. А. К. Ое Гге(Фж, В. М. Вечег!у. 1995. Оене!орптеп! оГ а аиГе Иче ! е/тйтатг/а чиссше Ипе Ьу депе гер1ысешеп!. Ртос. /с/ат/. Асад. 5ст'. Г/5А 92: ! 0267 — 10271. Ойпег Л. В., Л. Л. Ооппеду, В. Рагйег, Сс Н.
Кйодеы, Р. !.. Ге!дпег, ч'. Л. О!наг(й, $. Н. Огопйсотчи!й, К. К. Оесй, С. М. Оеччйт, А. Гпейпап, Е. А. Насте, К. К. Генис!ег, О. Магйпех, Н. С. Реггу, Л. %. Япчег, О. Е. Моп(дотпегу, М. А. Е(п. 1993. 246 ГЛАВА 11 Негего!ойоца рго!есйоп абгйпгй !и!!цепка Ьу !шее! юп о!' О?!А епсойп8 а гйга1 ргсее. легше 259: 1745-1749. КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ 1. Опишите вкратце способ создания вакцины против бактерий, продуцирующих токсин. 2.
Что ограничивает применение традиционных вакцин? 3. Предположим, что вы принимаете участие в работе междунаролной организации по охране здоровья животных и вам нужно создать вакцину против крайне вирулентного вируса крупного рогатого скота. Известно, что геном представляет собой полиаденилированную линейную одноцепочечную РГ!К длиной 10 т. п. н. и содержит восемь разных генов. Вирус не имеет оболочки, его основной антигенной детерминантой является белок капсида (УР 2).
Какую сгратегню вы используете? 4. Какие гюдходы применякпся при создании пептидных противовирусных вакцин? 5. Что представляет собой вирус коровьей оспы и как с его помощью можно получать уникальные живьге рекомбинантные вакцины? б. Предположим, что вы вылелили РНК-содержащий вирус, вызывающий бешенство у скунсов и енотов. Как на основе этого очищенного вируса создать рекомбинантную вакцину, защищающую животных от бешенства? 7. Как работник Всемирной организации здравсюхранения вы должны найти оптимальный способ искоренения беа!енства в популяциях диких животных.
Предположим„что у вас есть пептидная вакцина и вакцина на основе вируса коровьей оспы; выберите одну из них и обоснуйте ваше решение. 8. Как можно использовать в качестве вакцины бактерии со жгутиками'> 9. Перечислите преимушества живой рекомбинантной' вирусной вакцины перед неживой и субъединичной вакцинами. 10. Опишите несколько подходов, использованных при создании холерной вакциНы.
(ЛАВА 12 Использование рекомбинантных микроорганизмов для получения коммерческих продуктов Зндонуклецзы рестрикции До настоящего времени основной целью исследований в области молекулярной биотехнологии было получение разли гных белков. Олнако технологию рекомбинантных ДНК можно использовать также для крупномасштабного производства многих ценных низкомолекулярных соединений — витаминов„аминокислот, антибиотиков и т.
д. При наличии эффективной системы экспрессии получение белка — продукта специфического гена — не составляет особого труда. Белок может представлять собой либо тот конечный продукт, который хотят получить (например, рестрицирующую эндонуклеазу) „либо фермент, катализирующий определенную химическую реакцию (например, одну из реакций биосинтеза антибиотиков). Иногда в результате генетических манипуляций микроорганизм приобретает способность к синтезу нового фермента и может использоваться для получения )и гьчо низкомолекулярных соелинений — витаминов, аминокислот, красителей, антибиотиков, предшественников различных биополимеров и т.
д. Такой микроорганизм становится чфабрикой> по производству полезных метаболитов. Развитие технологии рекомбинантных ДНК было бы невозможно, если бы в распоряжении исследователей не было нужных эндонуклеаз рестрикции (рестриктаз). В настоящее время в продаже имеется более 300 различных рестриктаз. Эти ферменты синтезируются самыми разными микроорганизмами: аэробными, анаэробными„фотосинтезируюпптми, диазотрофными, мезотрофными, термофильными, психрофильными, медленно- и быстрорастущими. Для культивирования каждого из них необходимо подобрать оптимальные условия ферментации температуру, рН, состав среды, концентрацию кислорода — с тем чтобы максимизировать выход необходимого фермента.
Чтобы це пришлось выращивать большое число разных микроорганизмов, готовить многокомпонентные среды, разрабатывать разные ферментеры и тратить время на полбор оптимальных условий роста для многочисленных организмов, часто клонируют гены эндонуклеаз рестрикции в Езсйепсйкч со)й Это позволяет стандартизовать условия получения необходимых продуктов. Кроме того, культура клеток .Е сон быстро достигает высокой плотности и может быль приспособлена для сверхпродукции необхолимого фермента. Технология выделения и экспрессии чужеродных генов в Е. сон и в некоторых других микроорганизмах достаточно хорошо отработана, однако не стоит забывать, что синтез гетерологичного белка в организме-хозяине может оказывать на него негативное влияние.
Например, сверхпродукция такого белка может привести к истощению метаболических ресурсов хозяйского организма и отрицательно повлиять на его рост. Присутствие гетерологичного белка может оказаться даже губительным для клетки- хозяина. Так, сайты ресзрикции имеются во всех молекулах ДНК, и если продуктом клонированного гена является эндонуклеаза рестрикции, то в отсутствие специальных защитных механизмов хозяйская ДНК будет расщепляться ею. 248 ГЛАВА 12 Микроорганизмы, синтезирующие эндонуклеазы рестрикции, выработали систему самозащиты: сии мотивируют ОднО или несколько оснований рестриктазного сайта, и расщепление ДНК в этом сайте гомологичной эндонуклеазой рестрикции блокируется.
Грамотрицательпые микроорганизмы имеют еще один механизм защиты: эндоную1еазь1 рестрикции у них локализованы в периплазматическом пространстве. Благодаря такой компартментализации происходит физическое разделение рестриктаз и ДНК и при этом обеспечивается свободный доступ метилирующего (модифицирующего) фермента к хромосомной ДНК.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
