Методы общей бактериологии (том 3) (947294), страница 41
Текст из файла (страница 41)
Перед повторным употребле. йием инструменты необходимо тщательно прополоскать в дистиллированной воде, а если они предназначены для работы в полости тела животного или на его поверх. ности, то в стерильной дистиллированной воде. Лабораторные пипетки обеззараживают погружением в дезинфицирующий раствор, например 2%-пый о-фенилфенол, налитый в вертикальную или горизон- 227 чАсть те техникА БезОНАсности пРи РАБОте В лАБОРАтОРии тальную емкость Стеклянную посуду погружают полностью Перед использованием стеклянную посуду стерилизуют паром. 24.4.6.
Руки Для обычного мытья рук в лаборатории, когда не нмеюз дела с инфекционными агентами, можно применять разные моющие средства. Тщательное мытье рук в течение 15 — 20 с с вескодином приводит к сокращению числа бактерий более чем на 507Б. Мыло в кусках использовать не рекомендуется не только из-за грязи в мыльнице, но также потому, что некоторые микроорганизмы сохраняют жизнеспособность на мыле в течение некоторого времени. Если в резервуар с жидким мылом не добавлять предохраняющих средств, то там могут постепенно вырасти многочисленные популяции бактерий. В этом случае резервуар следует вымыть обычным способом и налить туда новое мыло Порошковые н листовые мыла имеют то преимущество, что онн не загрязняются бактериями и бактерии не способны расти на них Быструю дезинфекцию рук после загрязнения производят одним из следующих способов: 1) моют руки щеткой 30 — 60 с смесью вескодина и детергента и ополаскивают их водой; 2) моют руки щеткой 30 — 60 с смесью 47А-ного хлоргексидина и детергента и ополаскивают водой; 3) моют руки 20 — 30 с смесью фенольного дезннфектанта и детергента н затем ополаскивают водой (некоторые фенольные производные при слишком частом использовании в слишком больших концентрациях могут вызвать депигментацию смуглой кожи), 4) смачивают руки спиртом (50 — 707Б) на 20 — 30 с, затем моют их щеткой с мылом в течение 10 — 15 с и ополаскивают водой Благодарности Я благодарю участников Специального комитета по безопасности и охране здоровья, которые подготовили книгу под названием «Монография по лабораторной безопасности — дополнения к указаниям Национального 228 24 ПРЕДОТВРаЩРННЕ 34РаЖЕНГ!Я Н ДЕЗШяаьЕКЦИЯ института здоровья для исследований рекомбннантпой ДИК», вышедшую в июле 1978 г Информация, представленная в этой главе, в основном опирается на материалы этой монографии 24.5.
Л ИТЕРАТУРА 24.5.1, Общая литература 1 Саанупу М А Рго1сс/юп акашя/ ьп1сспоп ш йе шгсгоью/окка! !аЬога1огу Осчкея апг/ ргоссг/игся Лг/ч Лрр/ МгсгоЬю/, 3, 13!в 192 (1961) 2 Со!!ьпь С Н, Ниг!1иу Е 6, Ргдькогй /$ ТЬс ргечсппоп о1 /аЬо га!огу асципьд ьп/сс!юпя РВЫк Нса!й 1.а!к|а!огч Ясгчкс Мо покгарЬ Яспся Ыо 6 Нег Ма!сь1у'ь Я!а!~опаьу ОИкс, Епископ (!974) 3 Ваг/ою Н М Яа/с/у ш йс ппсгоью/окка/ !аЬога1огу, р 169— 204 !и Ыоьпа 3 к апг/ ВЬЬопя и % (сс! ), Мсйогм ш ппсго- Ь!о1оау Асаг/Выл|с Ргсяя, 1пс, Нотч той (1969) 4 РЫПьрь 6 В Мкгоью/оиьса! Ьаяагг/я ьп йе /ЗЬога/огу 1 Соп 1го/, Н Ргсчсп/ьоп 3 СЬсьп Ег/ис, 42, Л43 — Л48, 42, А!17— А130 (1965) 5 РЫ!Ьря 6 В Соп1го/ о$ шкгоЬ|а!ояка! !ьагагг/ь ьп йс /аЬога!огу Лгп 1пг/ Нук Аяяос д, 30, !70 — 176 (1969) 6 Яоггуег ? Аь, Яийоап 7 Р Яа/с1у ьп йс Ььо!окка! /аЬога1огу 3 СЬсш Ебг~с, 51 Л481 — А485 (1974) 7 /тег/ит А 6 !ЬоЬаяагд соп1го! р 191 — 2/О /п Мс!Ьу Е С зг апг/ АИгпап Ы Н (е4), Напг/ьоо/г о1 !аЬога1огу ашша! яс1спсе, чо/ 1, СГТС Ргсяя, !пс, С!счс!апг/ (1974) 24.5.2.
Справочники и руководства по безопасности 8 (/ Б РВЫк НеаИЬ Ясгысе С/аяяйсайоп о1 с/ьо/о/Пс аяспй оп Иге 1ьамя о1 Ьаяагд, 4й ег/, р 1 — 13 Ссп1ег 1о Епяеаяс Соп1го/ ЛИап1а, Оа (!9?6) 9 (/ Б РВЫк Нса!й Ясгчкс Еаьо~а1огу ьь1с1у а1 йс Сеп1сг /оь Ошсаяс Соп$го/ Осра~/шсп1 о$ НсаПЬ Ейка!ьоп апь/ 'йге//ага, РВЫка1юп Хо СОС 77 — 8118 Ссп1сг /ог Спаса»с Соп1го/, АИап 1а Оа (1977) 10 $/ Б РВЫгс Нса/й Ясгчке Ы1Н Ьюйааагг/ яа/ыу яиЫс ОРО Я/ос!г Ыо 1?40 — 00363 (/ Я Сгочегпшсп1 Ргьп/|пк Оикс, %аяйп8$оп, Р С (1974) 24.5.3. Лабораторные инфекции 11 Рь?ге Аь М Еа!ьога/огу аяяос~а1сг/ ьп/сс/ьопя яшшпагу ап6 апа/уяга о1 3921 саяся Неа1й 1.аЬ Яск 13 (2), 105 — 114 (1976) !2 Рйе /$ М, Яи//!га Я С, Яаи/ге М 1.
Соп/гпиьпи ипрог$апсе о$ /аЬога1огу асяьпгег/ ьп/сс/ьопя Аш Л РгьЫ~с Нсайй, 55, !90 — 199 (1965) 229 Часть И1 ПРИЛОЖЕНИЕ Глава 25 РАСТВОРЫ ДЛЯ РАЗВЕДЕНИЯ И ИЗМЕРЕНИЕ БИОМАССЫ Ф. Герхардт В этом приложении описывается ряд важных методов, применяемых в экспериментах, описанных в предыдущих главах. 25.1. РАСТВОРЫ ДЛЯ РАЗВЕДЕНИЯ Иногда при микроскопировании, измерении числа клеток, изучении генетических и метаболических свойств, а также для предварительной отмывки густые суспензии бактерий требуется довольно сильно разводить.
При этом важно, чтобы клетки сохраняли свои исходные характеристики, особенно жизнеспособность и уровень обменных процессов. В разведенных суспензиях клетки легче подвергаются вредным воздействиям со стороны неблагоприятной для них среды, чем в концентрированных суспензиях, для которых характерно высокое содержание в среде веществ, поступивших туда из клеток. В связи с этим состав раствора для разведения следует предварительно подобрать.
В качестве такого раствора, как правило, нельзя использовать дистиллированную или водопроводную воду, поскольку она гипотонична по отношению ко всем (за исключением покоящихся спор) бактерпальным клеткам и не обладает буферными свойствами. Физиологический раствор (0,85%-ный )час)) обычно также не подходит для разведения, поскольку он не забуфереп и изотоничен только по отношению к клеткам млекопитающих. По тем же причинам не годится обычно и фосфатный буфер.
При разведении такими растворами жизнеспособность клеток может упасть на 50ф> или более. Как правило, в качестве раствора для разведения применяют фосфатно-солевой буфер с желатиной. При- члсть чп. пгиложвпие сутствис белка стабилизирует чувствительные к механическим повреждениям бактерии и фагн, а фосфат благодаря своим буферным свойствам способствует сохрансншо рН около 7,0.
В состав фосфатно-солевого буфера входит 8,6 г ХаС1, 0,3 г безводного КНаРОм 0,6 г безводного 1>)азНРОм 0,1 г жслатины и дистиллированная вода объемом до 1 л. Еще лучшими свойствами обладает раствор, применяемый для разведения в общих целях, который имеет состав: 0,4 М !(аС! (нлн 0,6 М сахарозу) для создания осмотического равновесия, 60 мМ фосфатный буфер с рН ростовой среды (разд. 6.!.2), 50 мМ Мп80> для сохранения целостности мембран и 0,01г!» желатины в качестве стабилизирующего фактора (последняя может быть искл>очена, если почему-либо не подходит для работы с даннымн клетками). Этот раствор особенно хорош для грамотрицательпых бактерий, которые легче повреждая>тся, чем грамположительные. Другие соображения по поводу растворов для разведення, примапясмых прп отмывке бактерий, приводятся в разд.
10.4.2 и 19.1.1. В критических и необычных случаях раствор следует подбирать специально. Если нужно задержать рост клеток, в качестве лучшего раствора для разведения может послужить питательная среда без источников углерода. При использовании соленого буфера с жела- тиной, как правило, требуется корректировка рН н осмотического давления. Для многих аназробпых бактерий раствор для разведения должен содержать какой>шбудь носстаповитель и в нем не должно быть растворенного кислорода (равд. 6.6.3 и 6.6.4). При работе с микроорганизмами могут возникать проблемы, связанные с адсорбцией бактернальных клеток на поверхности стеклянной посуды (см.
Введение к гл. 11). Трудности могут появиться и при электроподсчете клеток (разд. 1!.1.2), а также в других случаях, когда, например, клетки пе расходятся после деления нли агрегируют благодаря адгезивпым свойствам поверхности нли за счет злектростатического заряда. Такие группы клеток иногда можно диспергироватьпутем физнческихвоздействий — очень кратковременной обработкой ультразвуком нли интенсивным перемешиванием в миксере 55.
РАСТВОРЫ ДЛЯ РАЗВЕДЕНИЯ И ИЗМЕРЕНИЕ БИОМАССЫ типа Ъог1ех. При этом подсчитывают число жизнеспособных клеток и с помощью микроскопа следят за тем, чтобы диспергирование клеток было максимальным, а разрушение минимальным. Диспергированное состояние клеток поддерживают, а иногда его достигают„добавляя к раствору для разведения химический агент, который адсорбируется клетками и придает им отрицательный заряд, обусловливающий отталкивание. В качестве таких агентов рекомендуется добавлять детергенты (разд. 10.3.3), например 0.15/5 твина 80; однако эти вещества эффективны в основном для мнкобактерий или клеток с гидрофобной поверхностью и могут оказаться вредными для других клеток. Эффективными диспергирующими агентами, подходящими для обычно используемых в экспериментах бактерий, являются полимеризованные органические соли сульфоновых кислот алкил-арильного типа (соединения ряда лигиина) [5).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
