Методы общей бактериологии (том 3) (947294), страница 36
Текст из файла (страница 36)
рильнай ватой. Шприц не применяют для внесения инфекционной жидкости в открытый пузырек или пробирку с целью смешивания. Смешивание с помощью шприца разрешается только в том случае, если конец иглы находится ниже поверхности жидкости в пробирке. Если раствор набирают шприцем из пробирки, то стараются не загрязнить втулку иглы, так как зто может привести к попаданию инфекционного материала на пальцы. Когда вьгнимают шприц н иглу из бутыли с резиновой пробкой, иглу н пробку заворачивают в ватный тампон, смоченный соответствующиы дезннфектантом. Если есть опасность загрязнения дезинфектантои чувствительного к нему материала, используемого в эксперименте, применяют стерильный сухой тампон, который сразу же помещают в дезинфицирующий раствор.
Ва время прививки животному руку держат сзади иглы во избежание укалызаиия. Перед прививкой убеждаются в том, что животное хорошо фиксировано, и принимают меры предосторожности в случае неожиданных дзнишний. Место прввнвнн перед инъекцией н особенно после нее протирают дезинфицирующим веществам. После непользования грязные стеклянные шприцы многоразового пользования с надетыми иа ннх иглами погружают в емкость с дезинфицирующим раствором н затем автоклавируют. Чтобы уменьшить возможность заражения, игльг должны оставаться на шприцах да конца автаклавироваиия. Шприцы с надетыми на ннх иглами помещают в отдельный лоток, в котором нет других использованных материалов Иглы н шприцы одноразовога пользования помещают в лоток с дезинфицирующим раствором и затем автоклавируют.
Емкости с надписью «Шприцы н иглы» после соответствующей упаковки н разрушения содержимого можно выбрасывать в обычный контейнер для отходов. После стерилизации иглы н шприцы специально портят и разбивают, чтобы их не испольэовали наркоманы. В тех случаях, когда после использования иглу нужно поместить в защитный футляр, ее берут пинцетом, чтобы уменьшить вероятность случайного укола пальца. При взятии образцов крови предпочтительнее пользоваться вакуумными трубочками. Шприцы н иглы многоразового и одноразового пользования складывают в отдельные лотки с дезннфектантом, чтобы не возникало проблемы нх сортировки.
Шприцы и иглы никогда не кладут в лотки, содержащие пипетки и другую стеклянную посуду. 24.2.4. Вскрытие емкостей С пробирками, содержащими бактернальные суспензнн, необходимо обращаться осторожно. Такие простые операции, как удаление пробки нз пробирки нлн пере- 200 ас пРедотВРАщение зАРАжения и дезинФекция несение культуры из одной емкости в другую, могут вызывать образование аэрозолей. Следует четко метить пробирки и штативы с пробирками, содержащими биологически опасный материал.
Чтобы уменьшить проливаиие из разбитых пробирок, рекомендуется пользоваться безопасными подставками для пробирок вместо обычных штативов. В такой безопасной подставке каждая выемка для пробирки имеет достаточно высокие стенки, так что если пробирка разобьется, все ее содержимое останстся в выемке. Аэрозоль с большим содержанием жидкости образуется при энергичном встряхивании жидких культур, тогда как при вращательном движении сосудов образование аэрозоля минимально, а получаемая суспензия достаточно гомогенна.
По окончании ресуспендирования жидкой культуры следует несколько минут выждать и только затем открывать емкость; это способствует снижению образования аэрозоля. Брызги аэрозоля могут появляться при погружении стерильной горячей петли или иглы в жидкую культуру пли в косяк. Чтобы уменьшить образование аэрозолей, петле дают остыть либо на воздухе, либо при соприкосновении с внутренней стенкой емкости или поверхностью агара, где до этого заведомо не росла культура. После использования петли и иглы предпочтительнее стерилизовать в электрической или газовой печи, специально предназначенной для этой цели, а не нагреванием на открытом пламени.
В таких печах имеется заслонка, задерживающая брызги. В продаже имеются петли для внесения инокулята одноразового пользования, которые проще обеззараживать погружением в дезинфицирующий раствор, чем нагреванием. При посеве штрихом на неровную поверхность агара происходит вибрация петли или иглы, что приводит к образованию аэрозоля. Как правило, этой проблемы не существует, если посев делают на гладкую поверхность агара, поэтому рекомендуется не высевать культуру в чашки с неровной поверхностью агара.
Вода, появляющаяся в чашках Петри в результате синерезиса, образует в перевернутой чашке пленку между ребром чашки и крышкой в которой могут содержаться жизнеспособные бактерии. При открывании чашки эта пленка разрывается, в результате чего возникают аэрозо- 201 ЧАСТЬ Е1 1ЕХЫ11КА БЕЗОПАСНОСТ11 ПРИ РАБОТЕ Б ЛАБОРАТОРИИ ли. Сообщающиеся с внешней средой пластмассовые чашки Петри, у которых крышка касается края чашки в трех точках, менее подвержены этой опасности.
Уменьшает, но не предотвращает образование аэрозолей фильтровальная бумага, вставленная в крышки. Если чашки заведомо мокрые, то их следует открывать в боксе. Менее вероятно высвобождение аэрозолей при открывании бутылей с завинчивающимися пробками или закрытых тампонами пробирок. Но все же это может произойти, когда во время открывания разрывается пленка между краем и прокладкой. Аэрозоли образуются при удалении ватных пробок илн крышек с колб, бутылей н центрифужных стаканов сразу же после взбалтывания или центрифугирования. Опасно вынимать пробки, намокшие в результате невертикального положения колбы или центрифужного стакана. Пробки могуг слегка увлажняться при центрифугированнн, если в ходе его происходит незначительное вспеннвание.
В связи с этим все жидкие культуры с инфекционным материалом необходимо открывать в безопасном боксе, надев перчатки и лабораторную одежду с длинными рукавами. Аэрозоль может образовываться прн вскрытии запечатанной ампулы с лиофилизованной нли жидкой культурой, поэтому ампулы следует вскрывать в безопасном боксе. Собирая осколки ампулы, необходимо позаботиться о том, чтобы не порезать перчатки или руки, чтобы разбитое стекло не попало в глаза, на лицо илн не осталось неубранным. После вскрытия ампулы суспензия бактерий не должна загрязняться посторонними микроорганизмами или дезинфицирующими веществами, Этого добиваются, работая в безопасном боксе в перчатках. Для того чтобы вскрыть ампулу, прежде всего делают насечку пилкой около шейки ампулы. Саму ампулу оборачивают ватой, пропитанной дезинфицирующим веществом, и вскрывают надломом в месте насечки, предварительно убедившись, что держат ее вертикально.
Другим способом в месте насечки делают трещину, прикладывая к нему накаленную проволоку или стеклянную палочку, затем оборачивают ампулу пропитанной в дезинфицирующем веществе ватой и открывают ее надломом. Вату н верхушку ампулы немедленно бросают в дезинфицирующий раствор. Содержимое 202 ы. пгадотввхщвниа зхглжвния и дазинч акция ампулы растворяют путем медленного добавления жидкости, стараясь не допускать образования аэрозоля. Раствор перемешивают, следя за тем, чтобы не было пузырьков, и переносят в приготовленную емкость. Для удобства открывания выпускаются ампулы с предварительно нанесенной насечкой, однако такие ампулы менее надежны: они могут разбиваться во время работы с ними илн прн хранении. Лмпулы с жидкими культурами вскрывают аналогичным образом.
Сбор культур, выращиваемых на куриных эмбрионах, весьма опасен. При его проведении сильно загрязняются скорлупа и подносы с яйцами, окружающая среда и руки экспериментатора. Работу подобного рода следует выполнять в безопасных боксах, часто пользуясь подходящим дезинфицирующим веществом. 24.2.5. Центрифугирование При центрифугнровании инфекционных бактериальпых суспензий следует пользоваться безопасными центрифужными гильзами, а настольные центрифуги должны находиться в безопасных боксах класса 1, имеющих панель с перчатками или окна для рук, которые можно открывать и закрывать. Центрифужные стаканы и гильзы наполняют и открывают в безопасном боксе класса 1. Если центрифугируют вне бокса, то применяют зашнтную гильзу.
После заполнения и запечатывання ее протирают или окунают в дезинфицирующий раствор. По истечении необходимого времени гильзу обмывают чистой водой„поскольку некоторые дезинфицирующие вещества вызывают коррозию. Перед центрифугированием проверяют стаканы, и если находят трещины или сколотые края, то такими стаканами пе пользуются. Внимательно осматривают внутреннюю поверхность гильз и ликвидируют шероховатости нлн приставшие частицы.