Методы общей бактериологии (том 3) (947294), страница 30
Текст из файла (страница 30)
Изменения в службах охраны здоровья, в типах медицинской продукции, требующих стерилизации, а также государственные постановления влекут за собой изменения в технике осуществления стерилизации. Стерилизация характеризуется развиваюшейся технологией с непрерывным усовершенствованием в конструкциях оборудования и его управлении. Методы стерилизации описываются во многих работах обшего характера 11 — 13). Стерилизация есть вероятностная функция. Гибель клеток бактерий обычно описывается экспоненциальной кривой подобно химической реакции первого порядка (рнс. 23.1). Эффективность стерилизации выражается в виде статистической вероятности выживания клеток (35). По окончании процессов стерилизации (влажным жаром, сухим жаром, ионизирующим облучением и окисью этилена) вероятность выживания клетки должна составлять не более 10-'.
Любой метод стерилизации, за исключением фильтрации, можно охарактеризовать скоростью уничтожения живых микроорганизмов. Параметр В применяется для оценки стерилизации путем нагревания и представляет собой время, необходимое при данной температуре для получения десятикратного (90%-ного) уменьшения по- га. стлвилмзация с,5 Ъ ,„4 х 5 ~~. 7 в. т 9о с н-7 а в-7 сп а -э ~-5 в-с -5 -б "о 1 7 5 а 5 б 7 д брема боадецс пйпя, мин Рнс. 23Л.
Графическое определение величины 0 и вероятности выживания микроорганиаиов. пуляции микробов; температуру часто обозначают в нижнем индексе (например, Р~ас). Параметр Р можно получить графически построением зависимости логарифма числа выживших бактерий от времени воздействии стерилнзующего агента. При атом параметр Р определяется как время на абсциссе, соответствующее десятикратночу уменьшению числа бактерий по ординате (рис. 23.1).
Этот параметр можно также вычислить (151 Параметр з представляет собой изменение температуры в градусах по шкале Цельсия или Фаренгейта, которое требуется для изменения параметра Р в 10 раз. Параметр гс представляет собой значение инактивации бактерий под действием нагревания, вычисляемое делением необходимого времени при заданной температуре нагревания на эквивалентное время при 121'С (250'г), когда з равно 10'С (18"-г).
Часто для определения числа выживших бактерий используют два метода, а именно: подсчет числа клеток, выживших после посева в чашки (по числу образовавшихся колоний), и оценка наиболее вероятного числа (НВЧ) выживших клеток с использованием флуктуационного веста. Первый метод описан в равд. 11.2 зтои ЧАСТЬ РЬ ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ В ЛАБОРАТОРИИ книги. Прн его нспользованнн строят график зависимости логарифма числа подсчитанных в чашках клеток от времени при данной температуре. По этим точкам проводят прямую (равд.
11.5.7) либо на глаз, либо с помощью метода наименьших квадратов (равд. 11.5.8) н определяют по ней параметр Р. Процесс гибели клеток, как правило, подчиняется логарифмическому закону. Однако наблюдаются и отклонения от этого закона. В этих случаях вычисление параметра Р не очень существенно. Отклонения могут объясняться такими факторами, как гетерогенность начальной популяции в отношении устойчивости, различное состояние клеток в условиях эксперимента (клетки, сбившиеся в комки), а также адаптация клеток в процессе нагревания 1241. Для определения числа бактерий, выживших пря различных временах воздействия, н тем самым для получения параметра Р [10, 13] можно также использовать флуктуационный тест.
Экспернмент должен быть поставлен таким образом, чтобы во всех пробирках наблюдался рост при самом коротком времени экопознции и рост отсутствовал бы во всех пробирках в случае наиболее продолжительной экспозиции. Промежуточные времена экспозиции следует выбирать так, чтобы рост имел место в определенной части пробирок.
Рекомендуется использовать как минимум три разные температуры. Уравнение для вычисления числа выживших бактерий в пробе имеет внд В = 1и г/д = 2,303 1а (г!11), где  — вероятное число выживших бактерий, г — число проб, исследуемых за временной интервал, и о — число стерильных проб (23). Для стерилизации в промышленных условиях применяют общепринятые способы, но необходимо провести контрольные исследования, используя микроорганизмы с заранее известной устойчивостью; в большинстве случаев это бактериальпые споры, Необходимо также периодически проверять суспензию спор на сохранение устойчивости.
Прн установлении режима стерилизации следует использовать по крайней мере три параллельные пробы для каждого времени воздействия н для каждого изучаемого параметра. Точность результата 23 СТЕРИЛИЗАЦИЯ Таблица 23.1, Бактерии, споры которых часто используют как биологические индикаторы Приблиаи. тельное ана- чение велк- чини и Способ стерилизации Споры Вас!!!ия яиЬВ!!я Окись этилена (б00 мг/л при 54 еС и 50о)в-ной относительной влажности) Влажный жар (>!21 'С) З,О мнн ВасШия я!лаго!Аегтарй(- !ия С!оя!и!т(!ит ярогодяпея Васб!ия яиЬИВя ВасГ!!ия рига!! ия 1.5 мнн Влажный жар (е-!21'С) Сухой жар (170'С) Иоинзирутопгее облучение 0,2 — 0,8 мии 0,8 мин 0,17 Мрад Таблица 23.2.
Поставщики биологических индикаторов Поставщик (равд. 2З.З! Тна индикатора Полоска с нанесенными на нее операми одного вида бактерий Полоска со спорами бактерий двух аидов ЗМ Со. Полоска со спорами известной численности Полоска со спорами и определенным количеством культуральиой среды Суспензия спор в культу- ральной среде Суспензин спор Агпег!сап В1о!одгса! Соп1го! Со. Ааеггсап 51еп1!2ег Со.
ВВ1. М!сгоЬ|о!ойу Буз(егпз Саз11е Со. В!ч., БуЬгоп Согр. С!Ьга!1аг В!о!об!са! 1.аЬога1ог1ез, 1пс. Ног(Ь Агаепсап Бс!енсе Ааааа(а1ез, !пс. Аптег!сап Б1еп1гхег Со. Саайе Со. В!ч., БуЬгоп Согр. Ыог1Ь Агаег!сап Бс!епсе Аьзос!а1еа, !пс. Ргоррег Мапп1ас1пппй Со., 1пс. Агаег!сап 51епйхег Со. ВВЕ М!сгоМо1обу БуМегпа ЕМ 1.аЬога(опез, 1пс.
Ангес!сап Б(ег!!!хег Со. Саз(!е Со. В!ч., БуЬгоп Согр. Ыог(Ь Агаег!сап Бс1епсе Азаос!а1ез, 1пс. ЧАСТЬ УЬ ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ В ЛАБОРАТОРИГЗ есть функция числа параллельных проб. Чтобы была уверенность в надежности результатов стерилизации, перед экспериментом следует тщательно проверить оборудование. По вопросам стерилизации см. обзор 125]. Перед стерилизацией необходимо определять также число и типы микроорганизмов, находящихся в объекте (микробное загрязнение). Время, требуемое для стерилизации, получают умножением параметра 0 для имеющегося в материале микробного загрязнения на общее число бактерий в стерилизуемом объеме. Если определено время, необходимое для инаьтивации загрязняющих микроорганизмов, можно вычислить вероятность отсутствия стерильности в отношении наиболее устойчивого микроба.
Биологические индикаторы (БИ) содержат известные концентрации микроорганизмов, обычно бактериальных спор, которые при определенном воздействии гибнут с прогнозируемой скоростью. БИ могут быть приготовлены на различных носителях (например, па фильтровальной бумаге, нитях или кусочках глины), иногда их непосредственно вносят на поверхность или внутрь стерилизуемого материала. В табл. 23.1 указаны виды бактерий, споры которых чаще всего используются для наблюдения за процессами стерилизации.
В табл. 23.2 приведены поставщики БИ. Вероятность отсутствия стерильности для микроорганизма из числа БИ может быть вычислена так же, как и для микробного загрязнения. Для определения фактора безопасности должно быть известно, как соотносятся между собой вероятности нестерильности БИ и исследуемого загрязненюг. Часто вместо параметра П для микробиологического загрязнения в уравнение вероятности подставляют параметр 0 для БИ. Это позволяет в самых плохих условиях найти время, необходимое для стерилизации. Системный подход к производству стерильных продуктов включает в себя следующие условия: 1.
Приготовление, отбор и распределение материала таким образом, чтобы число микробов в нем было сведено к минимуму. 2. Использование того процесса стерилизации, кото» рый соответствует образцу и его упаковке. 170 88 стеРилизАциЯ Таблица 23.3. Стерилизация тех или иных объектов разными с посв бам в Способ Обмят Растворы для парентерального введения, инструменты, оборудование для асептичсской работы, культуральные среды, резиновые пробки Стеклянная посуда, масла, инструменты, иглы. петролатум, порошки, оборудование для асептической работы Оборудование для дачи наркоза, катетеры, диагностическое оборудование, вживляемые протезы, лабораторное оборудование, обору.
доаание для лечения дыхательных органов, хирургическое оборудование, вспомогательные хирургические материалы, оптические инструменты, пластмассовые трубки, упаковочные материалы, ветошь Порошки, перевязочный материал, пробирки для крови, ланцеты для взятия крови, щетки, мази от ожогов, ожоговые тампоны, цептрифужные стаканы, диалнзные ячейки, хирургические нити, подстилки для лабораторных животных, хирургическая одежда Газы, жидкости, мази и масла с низкой вяз- костью Изажный жар Сухой жар Окись этилена Ионизирующее об- лучение Фильтрация 171 3. Выбор такой упаковки, которая не препятствовала бы процессу стерилизации и способствовала бы поддержанию стерильности после его окончания. 4.
Измерение параметров процесса стернлизациидля контроля правильности епо проведения. б. Хранение образцов после стерилизации н соответствующих условиях. 6. Доставка, открывание контейнеров и использование материала без загрязнений. В табл. 233 представлены известные методы стерилизации и материалы, обычно стерилизуемые этими методами. Ниже перечислены факторы, вызывающие гибель микроорганизмов, которые следует учитывать при выборе процесса стерилизации.
ЧАСТЬ УБ ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ В ЛАБОРАТОРИИ 1. Конструкция и (или) химический состав образца. 2. Биологическое и физическое состояние микроорганизма перед стерилизацией. 3. Наследственная устойчивость микроорганизма к стерилизации и получаемая в итоге скорость его гибели. 4. Исходное количество микроорганизмов в образце, подлежащем стерилизации. 5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
