Диссертация (1335845), страница 23
Текст из файла (страница 23)
63). В группе с БоАл уровни иммунореактивной ароматазы вглиальных клетках отрицательно коррелировали с генотипом APOE 4genotype (r = -0.858; p = 0.006), что означает меньшее количество цитохромаР-450аром в глиальных клетках у людей с генотипом APOE 4. Половыхразличий в окрашивании Р-450аром в нейронах БЯМ ни у пациентов с БоАл,ни у контрольных случаев обнаружено не было.
При нормальном старенииустановлено достоверное увеличение как нейрональной (r = 0.763; p =0.0001), так и глиальной (r = 0.693; p = 0.0001) иммунореактивной ароматазыу мужчин (r = 0.642; p = 0.005 для нейрональной и r = 0.714; p = 0.001 дляглиальной P-450аром) и женщин (r = 0.846; p = 0.0001 для нейрональной и r =0.673; p = 0.004 для глиальной P-450аром) (Рис. 67).СОЯВ нейронах (p = 0.006) и глиальных клетках (p = 0.007) СОЯ упациентов с БоАл отмечено значительное снижение окрашивания наароматазу по сравнению с контрольными случаями (Рис. 64). Половыхразличийвинтенсивностииммуноцитохимическогоокрашиваниянаароматазу в СОЯ в контрольной и группе с БоАл установлено не было.
Принормальном старении уровни нейрональной (r = 0.551; p = 0.001) и глиальной(r = 0.474; p = 0.005) иммунореактивности P-450аром возрастали (Рис. 68).Это увеличение оказалось более значимым у мужчин (r = 0.625; p = 0.007 длянейрональной и r = 0.736; p = 0.001 для глиальной P-450аром), чем у женщин(r = 0.483; p = 0.058 для нейрональной и r = 0.121; p = 0.655 для глиальной P450аром). Согласно тесту Манн-Уитни, иммунореактивность P-450аром внейронах была выше у пожилых, чем у молодых мужчин (p = 0.003), и былавыше у пожилых, чем у молодых женщин (p = 0.031).168Рис.
63. Иммуноцитохимическое окрашивание ароматазы в базальном ядре Мейнертаконтрольных (А,С, Е) и случаев с болезнью Альцгеймера (В,D,F).169Рис. 64. Иммуноцитохимическое окрашивание ароматазы в супраоптическомконтрольных (А,С, Е) и случаев с болезнью Альцгеймера (В,D,F).ядре170ИНФВ нейронах инфундибулярного ядра (p = 0.033) и в меньшей степени вего глиальных клетках (p = 0.067) окрашивание ароматазы было уменьшено вслучаях с БоАл по сравнению с контрольной группой (Рис.
65). Половых ивозрастных различий ни у пациентов с БоАл, ни у пожилых контрольныхслучаев обнаружено не было.ТМЯИммуноцитохимическая экспрессия ароматазы в ТМЯ оказаласьинтенсивной и не отличалась у пациентов с БоАл и контрольных случаев внейронах (p = 0.550) и глиальных клетках (p = 0.324). Половых и возрастныхразличий окрашивания Р-450аром в контрольной и группе с БоАлобнаружено не было.ММЯВ нейронах (p = 0.027) и глиальных клетках (p = 0.036) ММЯпациентов с БоАл содержание ароматазы оказалось ниже, чем в контрольныхслучаях (Рис. 66). У мужчин с БоАлиммунореактивность ароматазы внейронах положительно коррелировала с генотипом APOE 4 (r = 0.841; p =0.018).
Это означает, что у людей с генотипом APOE 4 содержание P450аром выше. Половых различий в окраске P-450аром обнаружено не былони в группе с БоАл, ни в контрольной группе. Когда мужчины и женщиныучитывались вместе, как нейрональная (r = -0.527; p = 0.008), так и глиальная(p = -0.429; p = 0.037) иммунореактивность P-450аром уменьшалась свозрастом в ММЯ.
При этом в группе мужчин статистическая достоверностьвозрастного уменьшения ароматазы составила (r = -0.553; p = 0.050), а уженщин (r = -0.546; p = 0.082), вероятно из-за небольшого числа случаевмолодого возраста. В группе пожилых контрольных случаев (Таблица 32)интенсивность нейрональной P-450аром продолжала снижаться при старении(r = -0.572; p = 0.013).171Рис. 65. Иммуноцитохимическое окрашивание ароматазы в инфундибулярномядре контрольных (А,С) и случаев с болезнью Альцгеймера (В,D).172Рис.
66. Иммуноцитохимическое окрашивание ароматазы в медиальноммамиллярном ядре контрольных (А,С) и случаев с болезнью Альцгеймера (В,D).173Рис. 67. Иммуноцитохимическое окрашивание ароматазы в базальном ядре Мейнерта пристарении (у молодой женщины и молодого мужчины (вверху) и пожилой женщины ипожилого мужчины (внизу).Рис. 68.
Иммуноцитохимическое окрашивание ароматазы в супраоптическом ядреМейнерта при старении (А – молодой женщины, В – молодого мужчины, С – пожилойженщины, D – пожилого мужчины). Масштаб – 25мкм.174мРНК P450аромДля определения экспрессии мРНК P450аром в нейронах и глиальныхклетках была проведена цепная реакция полимеразы (ЦПР) в ядрах снаиболее интенсивным иммуноцитохимическим окрашиванием ароматазы, аименно в БЯМ и ТМЯ, как описано выше. Цикл ЦПР для экспрессии генаароматазы в БЯМ (площадь ядра на срезе) составил 26, в ТМЯ - 29, внейронах БЯМ - 32, в глиальных клетках БЯМ – 29 и в нейронах ТМЯ - 27. Всовокупности приведенные данные свидетельствуют об экспрессии генаCYP19 как в нейронах, так и в глиальных клетках БЯМ и ТМЯ человека (Рис.69).Рис.
69. Графики, демонстрирующие экспрессию гена ароматазы в нейронах (А, В) иглиальных клетках (С, Д) гипоталамуса, изолированных путём лазерного микроиссечения.175Сравнительное иммуноцитохимическое исследование эстрогеновогорецептора в нейронах гипоталамуса и передне-базального мозга присосудистой деменции и болезни АльцгеймераЭР был обнаружен в основном в ядрах нейронов, а также в некоторыхастроцитах.
Степень иммуноцитохимического окрашивания оцениваласьтолько для ядер нейронов, причём интенсивность иммуномечения какправило коррелировала с количеством нейронов, содержащихЭР.Статистически значимых различий в интенсивности окраски ядерных ЭРмежду контрольными и случаями с СС в изучаемых ядрах (Таблица 36, Рис.70) обнаружено не было. Достоверность увеличения интенсивности окраскиядерных ЭР при БоАл была подтверждена в ВЯДБ, БЯМ, СОЯ и ММЯ(Таблица 36, Рис. 70). Более выраженным это увеличение оказалось в группемужчинсБоАл.Приэтомстатистическизначимыхразличийвинтенсивности окраски ЭР между случаями с СС и БоАл обнаружено небылозаисключениемБЯМ,вкоторомсравниваемыйпоказатель(интенсивность окрашивания ядерных ЭР) оказался выше в группе с БоАл(p = 0.020), чем при СС (Рис.
70).Иммунореактивностьароматазывнейронахбылазначительноповышена в БЯМ (p = 0.006) и снижена в СОЯ (p = 0.001) в группе с СС посравнению с контрольными случаями (Таблица 37). Следует отметить, что вобоих ядрах различия были более выражены у мужчин (p = 0.016), чтосоответствует эпидемиологическим данным о более высокой частотевстречаемости у них СС (Sachdev et al., 1999). Иммунореактивностьароматазы в глиальных клетках оказалась уменьшенной (p = 0.051) в СОЯпри СС и опять более выраженно у мужчин (p = 0.032) по сравнению сженщинами(p=0.310).Измененийвинтенсивностииммуноцитохимического окрашивания ароматазы в нейронах и глиальныхклетках ТМЯ и ММЯ отмечено не было. Однако, не исключено, что вбольшей группе различия в ММЯ могут быть обнаружены. В группе с СС176иммунореактивность нейрональной ароматазы увеличивалась с возрастом вБЯМ (r = 0.633; p = 0.036).
Следует отметить и тот факт, что у женщин с ССуровень экспрессии мРНК вазопрессина (r = -0.899; p = 0.015) в СОЯотрицательно коррелировал с иммунореактивностью ароматазы в нейронах.Помимо этого, удалось подтвердить результаты предыдущих исследованийароматазы при БоАл (Ishunina et al., 2005). В большинстве случаев характеризменений ароматазы при СС и БоАл совпадал.Таблица 36Сравнительный анализ иммунореактивности ЭР в ядрах нейронов при сосудистойдеменции (11 случаев) и болезни Альцгеймера (13 случаев) по сравнению сконтрольными случаями (11)ВЯДББЯМСОЯИНФТМЯММЯСС= (p=0.456)БоАл (p=0.021)= (p=0.387) (p=0.016)= (p=0.349) (p=0.051)= (p=0.481) (p=0.031)= ()= ()(p=0.085)(p=0.071)= () (p=0.028)(p=0.085)= - статистически достоверные изменения отсутствуют - экспрессия ЭР увеличенаТаблица 37Сравнение изменений ЭР и ароматазы в нейронахпри болезни Альцгеймера и сосудистой деменцииБоАлССЭРароматазаЭРароматазаВЯДБ↑==н.о.БЯМ↑↑=↑СОЯ↑(♂)↓=↓ИНФ↑↓=н.о.ТМЯ====ММЯ↑↓=== - статистически достоверные изменения отсутствуют↑ - экспрессия увеличена, ↓ - экспрессия сниженан.о.
– параметр не определялся177Рис. 70. Эстрогеновый рецептор альфа в различных структурах мозга при сосудистомслабоумиииболезниМикрофотографииАльцгеймера.демонстрируютИммуноцитохимическоеотсутствиеотчётливыхокрашивание.различийвиммунореактивности ЭРα при сосудистом слабоумии (СС) (а, б) в сравнении сконтрольными случаями (в, г), а также резкое увеличение числа и интенсивности окраскинейронов с ядерными ЭРα в базальном ядре Мейнерта (а, в, д) и медиальном мамилярномядре (б, г, е) при болезни Альцгеймера (БоАл) (д, е) при одновременном окрашивании.Увеличение в 25.2 раз.178Иммуноцитохимическое окрашивание мутантного белка УБВ+1 –маркера нарушения функции протеасомыИммунореактивный УБВ+1 выявлялся в виде компактных телецокруглой формы, напоминающих нейрофибриллярные клубки. Наиболееинтенсивным окрашивание УБВ+1 оказалось в БЯМ и ТМЯ при БоАл.Значительно меньшее количество нейронов, экспрессирующих УБВ+1, былообнаружено в ВЯДБ и ММЯ, где характер окрашивания был болеедиффузным, с преимущественной локализацией в цитоплазме.
УБВ+1наблюдался в ядре и отростках нейронов, например, в дендритах.Немаловажно, что УБВ+1 и ядерные ЭР редко ко-локализуются в одном итом же нейроне (Рис. 71). Даже в случае обнаружения в одних и тех женейронах, ЭР и УБВ+1 находятся в различных компартаментах цитоплазмы.При этом окрашивание УБВ+1 в контрольных случаях либо отсутствует,либо значительно меньше, чем при БоАл. У некоторых пожилых случаевотмечено интенсивное цитоплазматическое окрашивание (Таблица 38).Рис. 71. Эстрогеновый рецептор альфа и убиквитин В+1 в базальном ядре Мейнерта приболезни Альцгеймера. Иммуноцитохимическое окрашивание. Стрелки указывают на однии те же нейроны на соседних срезах, окрашенные на ЭР (а, б) и УБВ+1 (в, г) (маркерапониженной активности протеасомы).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
