Диссертация (1335845), страница 18

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 18)

Данные случаев с СС (серые треугольники) и соответствующейконтрольной группы (белые точки) продемонстрированы на графиках Б, Г, Е, З.119Иммуноцитохимическое исследование эстрогеновых рецепторов  и  вядрах передне-базального мозга и гипоталамуса при болезниАльцгеймера и сосудистом слабоумии.Базальное ядро МейнертаИммуноцитохимическое окрашивание ЭР и ЭР в БЯМ человекавыявлено в ядрах нейронов и в виде гранул в их цитоплазме (Рис. 41, 42).Фоновая окраска практически отсутствовала. Помимо крупных нейроновэстрогеновые рецепторы обнаружены в астроцитах, микроглии, кровеносныхсосудах и мелких нейронах. В контрольной группе выраженных половых ивозрастных отличий в интенсивности окрашивания нейронов на ЭР и ЭРне обнаружено, тогда как у пациентов с БоАл интенсивность экспрессииэстрогеновых рецепторов была значительно выше, чем у контрольныхслучаев (Рис.

41, 42). Содержание ЭР в БЯМ было выше, чем ЭР. Причём,ЭР локализовался главным образом в ядрах нейронов, а ЭР - в цитоплазме(Таблица 16, Рис 41, 42). Ни длительность фиксации, ни промежуток междумоментом смерти и взятием материала не влияли на окрашиваниеэстрогеновых нейронов в контрольной группе и группе с БоАл прииспользовании теста линейной регрессии. В среднем, в контрольной группебыло изучено 30825 нейронов БЯМ для каждого случая на предмет ЭР и31423дляЭР.ВгруппесБоАлдлякаждогослучаябылопроанализировано 21115 на предмет ЭР и 17917 на ЭР. Согласно тестамКолмогорова-СмирноваиШапиро-Уилкараспределениеполученныхзначений было нормальным.Половые и возрастные особенности ЭР и ЭР в контрольной группе.По результатам двухфакторного теста ANOVA процентное содержаниенейронов БЯМ с ядерными и цитоплазматическими эстрогеновымирецепторами  и  в контрольной группе от пола и возраста не зависело.Анализлинейнойрегрессиипозволилвыявитьтенденциюкположительной корреляции процента нейронов с ядерными ЭР с возрастом120(r=0.305, p=0.053), что означает некоторое увеличение содержания ЭР впроцессе старении.

Однако, после разделения по половому признаку,статистически достоверная положительная корреляция процента нейроновБЯМ с ядерными ЭР и возрастом была установлена у мужчин (r=0.612,p=0.003) и отсутствовала у женщин (r=0.011, p=0.963).Число нейронов БЯМ с цитоплазматическими ЭР увеличивалось пристарении в контрольной группе независимо от пола (r=0.0.323, p=0.042)(Таблица 16, 18).Таблица 16Интенсивность окраски ЭР и ЭР у контрольных случаевв базальном ядре МейнертаВозрастПол1) 202) 283) 294) 315) 316) 327) 338) 339) 3610) 4311) 4612) 4913) 4914) 4915) 5016) 5017) 5118) 5319) 5320) 5421) 5422) 5423) 5524) 6325) 6826) 7327) 7428) 7829) 7830) 8131) 92мужженженмужмужженженмужмужмужженженмужженмужженженженмужженмужженмужмужженженмужженмужженмужЭР: в ядре в цитоплазме+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ЭР: в ядре в цитоплазме+++++++++++-+++++++++++++++++++++++++++++++-+++++++++++++++121Таблица 17Интенсивность окраски ЭР и ЭР в контрольных случаях и при БоАл в базальномядре МейнертаВозрастПолЭР: в ядре в цитоплазмеЭР: в ядре в цитоплазмеКонтрольные случаи32) 5633) 5834) 6135) 6336) 6337) 6438) 6939) 7440) 8241) 8542) 8543) 94мужженженмужженмужженмужмужженмужжен+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++Случаи с болезнью Альцгеймера1) 542) 573) 604) 615) 636) 637) 698) 729) 8210) 8311) 8512) 94женмужженмужженмужженмужмужженмужжен+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++-++++++++-+++++++++++++++++++++++++++Таблица 18Средний процент нейронов базального ядра Мейнерта с ЭР и ЭРВозраст 50 летПолМужчиныКоличество случаев8Возраст>50 летЖенщины7Мужчины13Женщины13Процент нейронов с ЭР:в ядре (%)13.86.715.37.324.64.222.65.5цитоплазме (%)92.41.989.61.985.54.685.12.75.43.13.50.96.32.627.54.839.66.636.86.8Процент нейронов с ЭР:в ядре (%)2.81.1в цитоплазме (%) 33.163.5122ЭР при БоАлУ пациентов с БоАл в базальном ядре Мейнерта отмечено болеевысокое содержание нейронов с ядерными ЭР, чем у контрольных случаев(главный эффект теста ANOVA (ГЭ): F(1;23) = 9.992; p = 0.005).

В то жевремя различий в количестве нейронов БЯМ с цитоплазматическими ЭРмежду контрольными случаями и пациентами с БоАл установлено не было(Таблица 17, 19, Рис. 43). Половые различия экспрессии ЭР в группе с БоАлотсутствовали (Таблица 17, 19).ЭР приБоАлУ пациентов с БоАл процентное содержание нейронов БЯМ сцитоплазматическими (ГЭ: F(1;23) = 6.437; p = 0.019) и ядерными ЭР (ГЭ:F(1;23) = 4.805; p = 0.039) оказалось выше, чем у контрольных случаев (Рис.28, 29). Комбинированный эффект БоАл и пола был значительным дляпроцента нейронов БЯМ, содержащих ядерные ЭР (ГЭ: F(2;23) = 4.049; p =0.033; эффект взаимодействия (ВЭ): F(1;23) = 6.137; p = 0.022).

Количествонейронов с ядерными ЭР оказалось выше у женщин с БоАл, чем уконтрольных женщин (ГЭ:F(2;17) = 5.460; p = 0.017) (Таблица 19). Послеразделения группы с БоАл по полу, влияние БоАл на процент нейронов БЯМс ядерными ЭР оказался значительным у женщин (ГЭ: F(1;10) = 7.849, p =0.019), но не у мужчин (ГЭ: F(1;10) = 0.0001, p = 1.000).Генотип аполипопротеина Е (ApoE) не влиял на процент нейронов сцитоплазматическими (p = 0.960) и ядерными (p = 0.169) ЭР ицитоплазматическими (p = 0.863) и ядерными (p = 0.492) ЭР по результатамтеста ANOVA.

Рис. 43 отражает различия в количестве нейронов с ядернымии цитоплазматическими ЭР и ЭР между контрольными случаями ипациентами с БоАл (группа 1) независимо от пола, тогда как таблица 19представляет половые различия в контрольной и группе с БоАл (группа 2).123Таблица 19Средний процент нейронов базального ядра Мейнерта с ЭР и ЭР при болезниАльцгеймераСлучаи с БоАлПолМужчиныКоличество случаев6Женщины6Контрольные случаиМужчины6Женщины6Процент нейронов с ЭР:в ядре (%)57.55.653.24.832.87.730.511.2в цитоплазме (%)72.53.874.33.976.58.880.33.8в ядре (%)1.20.6 14.21.4 1, 21.20.40.30.2 2в цитоплазме (%)75.83.565.810.744.013.544.013.2Процент нейронов с ЭР1p=0.07;2p=0.017.Рис. 41.

Иммуноцитохимическое окрашивание эстрогенового рецептора  в базальномядре Мейнерта людей с болезнью Альцгеймера (А, С) по сравнению сконтрольными случаями (В, Д). У пациентов с БоАл наблюдается болееинтенсивное ядерное окрашивание ЭР, чем у контрольных случаев (масштабнаялинейка = 25m).124Рис 42. Иммуноцитохимическое окрашивание ЭР в БЯМ пациентов с БоАл (A, C) и уконтрольных случаев (B, D). Интенсивность цитоплазматического мечения ЭР упациентов с БоАл выше, чем у контрольных случаев (масштабная линейка = 25m).Рис. 43.

Количество нейронов БЯМ с ядерными ЭР (p = 0.005) и ЭР (p = 0.039) большеу пациентов с БоАл, чем у контрольных случаев. Пропорция нейронов БЯМ сцитоплазматическими ЭР выше у пациентов с БоАл, чем у контрольных случаев(p = 0.019).125Вертикальное ядро диагонального поля БрокаЭРОкрашивание ЭР показано в ядрах и цитоплазме нейронов безсущественных половых и возрастных различий (Таблицы 20 и 21).Значительно более высокая интенсивность окраски ядерных ЭР отмечена вВЯДБ пациентов с БоАл по сравнению с контрольными случаями (Рис.

44).Согласно анализу линейной регрессии ни длительность фиксации, нипромежуток между моментом смерти и взятием материала не влияли напроцентное содержание нейронов с ядерной и цитоплазматической окраскойЭР и ЭР. Следует подчеркнуть, что ядерная локализация ЭР и ЭР былаобнаружена и у молодых контрольных случаев с более длительнымпромежутком между моментом смерти и взятием материала. Более того,систематическое исследование на материале экспериментальных животныхпоказало, что окрашивание ЭР и ЭР довольно резистентно к временномуинтервалу до фиксации.ЭР в контрольной группеПо результатам однофакторного анализа ANOVA и теста КрускаллУоллис статистически достоверных различий в процентном содержаниинейронов ВЯДБ с ядерными и цитоплазматическими ЭР среди четырёхгрупп контрольных случаев не обнаружено.

Более того, указанныйпоказатель при старении существенно не изменялся (Таблицы 20 и 22).Анализ линейной регрессии выявил положительную корреляцию генотипаAPOE (2 < 3 < 4) с процентом нейронов ВЯДБ с цитоплазматическимиER (r = 0.767, p = 0.044) у пожилых контрольных случаев.ЭР у пациентов с БоАлУ пациентов с БоАл обнаружено значительно более высокоесодержание ядерных ЭР в нейронах ВЯДБ, чем у контрольных случаев (ME(главный эффект): F(1;21) = 9.415, p = 0.006 по данным ANOVA и p = 0.013126согласно тесту Манн-Уитни) (Таблицы 21 и 23, Рис. 44 и 45).

У людей с БоАлсвозрастомувеличивалосьпроцентноесодержаниенейроновсцитоплазматическими ЭР (r = 0.701, p = 0.024). Влияние генотипа APOE насодержание ЭР в нейронах не установлено. После разделения случаев пополу, оказалось, что процент нейронов с цитоплазматическими ЭРувеличивался с возрастом у мужчин с БоАл (r = 0.865, p = 0.058) и вконтрольной группе (r = 0.965, p = 0,008), и практически не изменялся уженщин этих двух групп.Рис. 44. Иммуноцитохимическое окрашивание ЭР у двух пациентов с БоАл (A, B) и уконтрольных случаев того же возраста (C, D).

У пациентов с БоАл обнаружена болеевысокая пропорция нейронов с более интенсивным ядерным окрашиванием ЭР, чем вконтрольной группе. Примеры различий в интенсивности окрашивания ЭР отмеченыследующим образом: "S" – сильное, "M" – умеренное, "W" – слабое, "VW" – очень слабое.Масштаб = 25 мкм.127Таблица 20Клинико-патологическая информация о контрольных случаях в возрасте до 50 лет и интенсивность окраски эстрогеновыхрецепторов  и  в вертикальном ядре диагонального поля БрокаВозрастПолЭР: в ядре в цитоплазме ЭР: в ядре в цитоплазме1) 20муж++-+++2) 283) 294) 31женженмуж+++++-++-+++++++5) 336) 357) 36женмужжен++++++++++++-8) 439) 4710) 4811) 4912) 49женмужмужженжен++++++++-++++++-+++++++Причина смертисердечная недостаточность, фибринозногеморрагическая пневмониякардиогенный шокпечёночная комафеминизирующая карцинома надпочечников сметастазами, сердечная недостаточностьастматический бронхит, отёк лёгких, гипоксиядыхательная недостаточность, лейкемия, сепсисязва двенадцатиперстной кишки с перфорацией,перитонитинфаркт миокарда, злоупотребление алкоголемостановка сердцасахарный диабет I типакарцинома лёгких, почечная недостаточностьопухоль лёгких с метастазами, тромбоэмболияЭР - эстрогеновый рецептор , ЭР - эстрогеновый рецептор , муж – мужчины, жен – женщины.128Таблица 21Интенсивность окраски эстрогенового рецептора  в вертикальном ядре диагонального поля Брокав контрольной и группе с БоАлВозрастПолЭР: в ядре в цитоплазме1) 562) 583) 614) 635) 646) 687) 768) 809) 8210) 8511) 94Контрольная группамуж+жен++жен+++ +муж+муж+жен+++ +жен+жен+++ муж+++ +муж+++ +жен++-ВозрастПол1) 572) 603) 634) 685) 696) 787) 798) 809) 8510) 96Случаи с болезнью Альцгеймерамуж+++ жен+++ +муж+++ +муж+++ +жен+++ +муж+++ +жен++жен+++ муж+++ +жен+++ +-ЭР - эстрогеновый рецептор , муж – мужчины, жен – женщины.Достоверные различия между группами по возрасту (p = 0.722),полу (p = 0.845) и длительности фиксации (p = 0.556) отсутствуют.ЭР: в ядре в цитоплазме129Таблица 22Содержание эстрогеновых рецепторов  и  в нейронах вертикального ядрадиагонального поля Брока в контрольных случаях при старенииВозраст  50ПолМужчиныЧисло случаевВозраст > 50Женщины5Мужчины7Женщины56Процентное содержание нейронов с ЭР (%):в ядре23.211.315.16.130.35.829.310.9в цитоплазме55.813.339.414.246.911.257.89.8ЭР отсутствует30.57.560.614.236.78.930.710.4Процентное содержание нейронов с ЭР (%):в ядре6.72.0в цитоплазме68.47.9ЭР отсутствует26.74.916.16.96.62.14.01.174.96.674.22.570.98.222.16.124.22.226.88.2ЭР - эстрогеновый рецептор ; ЭР - эстрогеновый рецептор .Таблица 23Процентное содержание нейронов с ЭР и  в ВЯДБ пациентов с БоАлгруппа с БоАлКоличествоконтрольные случаи1011ядерные55.45.2129.86.21цитоплазматические52.65.752.97.2ядерные6.71.15.21.2цитоплазматические70.83.472.44.4ЭР %:ЭР %:ЭР: эстрогеновый рецептор ; ЭР эстрогеновый рецептор ; ВЯДБ: вертикальное ядродиагонального поля Брока; ядерные: процент нейронов с окрашиванием в ядре;цитоплазматические: процент нейронов с цитоплазматическим окрашиванием;1p = 0.006.130Рис.

Характеристики

Список файлов диссертации