Диссертация (1335845), страница 22

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 22)

Содержание изоформы э2 уменьшалосьс возрастом только в контрольных случаях (r = -1.000; p = 0.0001).158Таблица 30Нормализованная экспрессия различных изоформ ЭР в ММЯ№ПолВозраст6-7 (к)Ампликоны, связывающие экзоны7-8 (к)6-8 (э7)1-3 (э2)2-3 (к)Контрольные случаи1)ж610.0380.0204.6*10-39.9*10-41.2*10-32)м620.0330.0141.8*10-39.6*10-41.3*10-33)м710.0100.00481.8*10-37.7*10-43.3*10-44)ж760.0690.0340.0116.2*10-49.3*10-45)ж830.0240.00331.2*10-31.8*10-43.3*10-4Случаи с болезнью Альцгеймера4.5*10-48.2*10-41.5*10-36.1*10-41.8*10-30.0092.0*10-33.5*10-48.1*10-40.0580.00721.6*10-35.5*10-47.1*10-4840.0390.00551.0*10-38.9*10-43.7*10-4700.0090.00382.7*10-36)ж610.0380.0097)м650.0940.0378)м730.0309)ж7610)ж11)м2.4*10-3Использованные сокращения: ж – женщина; м – мужчина; к – классическая мРНК ЭР;э7 – сплайсинговый вариант с выпадением седьмого экзона; э2 – вариант с выпадениемвторого экзона.

Для ампликонов 6-7, 7-8 и 6-8 данные от случаев #4 и #11 не быливключены в статистический анализ вместе с другими случаями, т.к. их кДНК былиполучены в отдельных экспериментах.Супраоптическое ядроЭР выявлен в ядрах и цитоплазме ВП нейронов дорсолатеральнойчасти СОЯ с преимущественной локализацией в ядрах нейронов. Помимоэтого, ЭР был отмечен в глиальных клетках и некоторых волокнах (Рис. 62).Достоверных различий в окрашивании ЭР в ядрах (F[1;32] = 1.280; p =0.267) и в цитоплазме (F[1;32] = 0.003; p = 0.954) ВП нейронов у пациентов сБоАл и контрольных случаев установлено не было (Таблицы 31, 32). Послеразделения на 4 группы с учётом пола (контрольные пожилые мужчины,контрольные пожилые женщины, мужчины с БоАл, женщины с БоАл(F[3;32] = 3.365; p = 0.033), процент ВП нейронов с ядерными ЭР оказался159выше у контрольных женщин по сравнению с контрольными мужчинами(F[1;16] = 5.763; p = 0.031), подтверждая результаты предыдущихисследований, а также был выше у мужчин с БоАл, чем у мужчинконтрольнойгруппы(F[2;23]=4.278;p=0.028).Различиявпропорциональном содержании ВП нейронов с ядерными ЭР междупациентами с БоАл мужского и женского пола (p = 0.341), а также междуженщинами с БоАл и женщинами контрольной группы отсутствовали (p =0.429).В группе с БоАл была обнаружена положительная корреляционнаязависимость между процентом ВП нейронов с ядерными ЭР и размерами ихАГ (r = 0.681; p = 0.005) и перикарионов (r = 0.568; p = 0.027), чтоподтверждаетпредположениеотом,чтостимулирующиеэффектыэстрогенов на СОЯ опосредуются через ЭР (Ishunina et al., 2000).Положительная зависимость между количеством ВП нейронов с ядернымиЭР и АГ была особенно выраженной у женщин с БоАл (r = 0.805; p =0.016).У контрольных мужчин пропорция ВП нейронов с ядерными ЭР вдорсолатеральной части СОЯ с возрастом постепенно снижалась (r = - 0.784;p = 0.037).ЭР в дорсолатеральной части СОЯ человека выявлен главным образом вцитоплазме нейронов.

Встречались и единичные клетки с ядернойлокализацией ЭР. Более того, окрашивание ЭР обнаружено в глиальныхклетках и многочисленных волокнах и кровеносных сосудах.Процентное содержание ВП нейронов с ядерными ЭР оказалось ниже упациентов с БоАл по сравнению с контрольными случаями (F[1;31] = 4.774; p= 0.037), тогда как число ВП нейронов с цитоплазматическими ЭР в этигруппах не отличалось (F[1;31] = 0.556; p = 0.462). При учёте пола изучаемыхслучаев, были выявлены половые различия в содержании ВП нейронов сцитоплазматическими ЭР (F[3;32] = 3.028; p = 0.047) при сравнительном160отсутствии подобных отличий для ядерных ЭР (F[3;31] = 2.198; p = 0.111) уконтрольных случаев и пациентов с БоАл.Рис.62.Иммуноцитохимическоевазопрессинэргическойокрашиваниедорсолатеральнойчастиэстрогеновогосупраоптическогорецептораядравмужчиныконтрольной группы (A), мужчины с БоАл (B), женщины контрольной группы (C) иженщины с БоАл (D).

Интенсивность иммуноцитохимического окрашивания ЭР, а такжеколичество ВП нейронов СОЯ с ядерными ЭР оказалось выше у женщины (C), чем умужчины контрольной группы (A), а у мужчины с БоАл (B) выше, чем у мужчиныконтрольной группы (A). Масштаб = 25мкм.Таблица 31Клинико-патологическая информация контрольных случаев и пациентов с БоАл, а также интенсивность окраски ЭР и ЭР в СОЯ№ВозрастПолВм (г) П1)2)3)4)5)6)7)8)9)10)11)12)13)14)15)16)54566061636363656668697880829094жмжжжммжммжмжмжж12571357н1311121613681154н14611366107413401087н111911188.005.008.005.156.251.4026.457.1541.007.178.3052.506.1589.006.106.101)2)3)4)5)6)7)8)9)10)11)12)13)14)15)16)545760606363636364696978808287941055169010608999349801350125110501150136212401139131710478823.155.003.455.104.553.205.006.003.404.002.553.152.154.154.103.5028452935383230313033293157322932жmffffmmmfmmfmffAPOE : Я+ Ц+  :Я+/Ц+ШБКонтрольные случаи2833++- /+- 03533++++-/+ 087nr++++-/++ 02832++++++-/++ 02743+++-/+ 065н++++++-/++ 02932+++-/++ 029н++++++ /+н49н++++ /+++ н4733+++- /+- 13133++++-/+ 170nr++++ /++ н3442++++-/++ 263н+++-/+ 12533++++++-/+ 32933++++++-/++ 1Пациенты с Болезнью Альцгеймера33++++- /+- 5643++++++-/+ 6733++- /+6743++++++-/++ 6733+++-/+- 6533++++++-/+ 6733+++- /+- 6744+++++-/+ 6743++++++-/+ 6733++++++-/++ 6644+++++- /+- 5733+++++-/+ 6743+++- /+6744+++++-/++ 5642+++++- /+6н43+++++н56ФШРПричина смертикарцинома молочной железы, ОПНопухоль носоглоткикарцинома яичниковглиобластома, комакарцинома молочной железы, эвтаназияпневмония, желудочковая тахикардиялёгочная инфекция, абсцесс в брюшной полостикарцинома молочной железы, обширные метастазыаденокарцинома желудка, септический шокинфаркт миокардаинфаркт миокарда, эмболия лёгких, тампонада сердцасердечно-лёгочная недостаточность, отёк лёгкихгрудная жаба, сахарный диабет, дегидратациякарцинома лёгких, бронхопневмониясердечная недостаточностьбронхопневмония, сепсисБолезнь Альцгеймера, кахексияБолезнь Альцгеймера, пневмония, уросепсисБолезнь Альцгеймера, внезапная смертьБолезнь Альцгеймера, кахексияБолезнь Альцгеймера, инфаркт миокардаБолезнь Альцгеймера, кахексияБолезнь Альцгеймера, пневмонияБолезнь Альцгеймера, острый агранулоцитозБолезнь Альцгеймера, внезапная смертьБолезнь Альцгеймера, пневмонияБолезнь Альцгеймера, бронхопневмонияБолезнь Альцгеймера, грудная жабаБолезнь Альцгеймера, внезапная смертьБолезнь Альцгеймера, пневмонияБолезнь Альцгеймера, кахексияБолезнь Альцгеймера, дегидратация, кахексияТаблица 32Средний процент нейронов с ЭР и ЭР в группе контрольных случаеви пациентов с БоАлКонтрольная группаГруппа с БоАлПолмужчиныженщинымужчиныженщинычисло887930.97.7 1,295.50.753.15.5 197.90.953.74.9 294.92.247.63.998.40.8ЭР %:Я+Ц+ЭР %:Я+6.01.2 54.70.73.10.653.90.743Ц+81.25.690.53.176.34.189.32.5 3,4ЭР: эстрогеновый рецептор ; ЭР эстрогеновый рецептор ; дл-СОЯ:дорсолатеральная часть супраоптического ядра; Я +: процент нейронов с окрашиваниемэстрогеновых рецепторов в ядре; Ц +: процент нейронов с окрашиванием эстрогеновыхрецепторов в цитоплазме1p = 0.031; 2 p = 0.028; 3 p = 0.016; 4 p = 0.012; 5 p = 0.053Так, пропорция ВП нейронов с цитоплазматическими ЭР оказаласьвыше у женщин с БоАл по сравнению с мужчинами с БоАл (F[1;15] = 7.682;p = 0.016) и была выше у контрольных женщин по сравнению с женщинами сБоАл (F[2;24] = 5.500; p = 0.012).АроматазаИммунореактивнаяароматазаобнаруженавнейронахввидецитоплазматических гранул с преимущественной аггрегацией вокруг ядра иплазмолеммы,чтоуказываетналокализациюокрашиваниявэндоплазматической сети.

Более того, ароматаза выявлена в отросткахнейронов, крахмалоподобных амилоидных телах и глиальных клетках,включая астроциты, олигодендроциты, клетки эпендимы и сосудистогосплетения (Рис. 63-68). Следует отметить, что не все клетки эпендимы исосудистого сплетения окрашивались на Р-450аром, наблюдались инеокрашенныеглиоциты.Примечательно,чтосодержание163иммунореактивной ароматазы в эпендимной выстилке боковых и третьегожелудочка резко уменьшалось при БоАл (p = 0.009). Иногда встречалисьпримеры околоядерного окрашивания P-450аром (главным образом в ММЯ).Наиболее интенсивным иммуноцитохимическое мечение цитохрома P450аром оказалось в ТМЯ. Причём изменений, связанных с полом, возрастоми БоАл, обнаружено не было.

Наиболее выраженные различия междуконтрольными и случаями с БоАл (Таблицы 33 и 34) и при нормальномстарении (Таблицы 33 и 35) были отмечены уже при малом увеличении (x2.5)в СОЯ и БЯМ (Рис. 63, 64, 67, 68). Самое слабое иммуноцитохимическоемечение ароматазы наблюдалось в ММЯ. P-450аром был обнаружен и впаравентрикулярном, вентромедиальном и в меньшей степени в туберальномлатеральном гипоталамическом ядрах. Нейрональные уровни ароматазыположительно коррелировали с глиальными в большинстве проведенныхсравнений, в БЯМ и СОЯ контрольных случаев и в СОЯ, ИНФ и ММЯпациентов с БоАл.

Следует отметить, что ни фиксация, ни промежутокмежду моментом смерти и взятием материала не оказали влияния наокрашивание ароматазы по результатам анализа линейной регрессии.ВЯДБСтатистически значимых различий в интенсивности окраски ароматазыв нейронах (p = 0.621) и глиальных клетках (p = 0.934) между пациентами сБоАл и контрольными случаями в ВЯДБ обнаружено не было. В группе сБоАл у мужчин отмечено большее содержание Р-450аром в нейронах, чем уженщин. Половых и возрастных различий у пациентов с БоАл и контрольныхслучаев установлено не было.Таблица 33Клинико-патологическая информация и интенсивность окраски ароматазы в ядрах передне-базального мозга и гипоталамуса человекаКонтрольные случаи старше 56 лет№ВозрастПолВЯДББЯМСОЯИНФТМЯММЯН/Г+++ /++++ /++++++ /++++++ /+++++ /++++ /++Н/Г++ /+++++ /++++++ /++++++ /+++++ /++++ /++++++ /+++++ /++++++ /++Н/Г++ /++++ /+++++ /++Н/Г+++ /++++++ /++++++ /++++++ /+++Н/Г++ /+++++ /+++++ /+++ /++ /++++++ /++++++ /+++++ /+++++ /+++Н/Г++ /+++++ /++++ /++++ /++++ /++++ /+++ /++++++ /++++ /++++ /++++ /+++++ /+++++ /+++1)2)3)4)5)6)7)8)9)565858606161636363МЖМЖЖЖЖММ10)64М++ /++++ /++++ /+++11)12)13)14)15)16)17)18)19)20)21)22)23)24)25)656668686969727476788080829094ЖММЖЖЖММЖМЖММЖЖ++ /++++++ /++++++ /+++++ /++++++ /++++++ /+++++ /++++++ /++++++ /++++++ /+++++ /++++++ /++++++ /+++++++ /++++++ /++++ /+++++ /+++++ /++++/+++++ /+++++ /+++++ /+++++ /++++ /++++++ /+++++ /++++++ /+++++++ /+++++ /++++++/++++++ /+++++ /++++++ /++++++ /++++++ /++++++ /+++++ /+++++ /+++++ /+++++ /++++++ /++++++ /++++++ /++++++ /++++++ /++++++/++++++ /+++++ /++++++ /++++++ /+++++ /++ /++++ /+++++ /+++ /++++ /++++ /++++ /+++++ /++++++ /++++ /++++++ /+++++ /++++++ /+++++ /+++++ /+++++ /+++++ /+++++ /++++++ /++++ /++++/+++ /++ /++++- /++++ /+Причина смертиопухоль носа, лапаротомияпослеоперационная комаразрыв аорты, гипертензиякарцинома яичниковглиобластома, комаострая сердечная недостаточностькарцинома молочной железыпневмония, желудочковая тахикардиялёгочная инфекция, абсцесс в брюшнойполостилейкемия, тромбоцитопения,субарахноидальное кровотечениекарцинома молочной железы с метастазамиаденокарцинома желудка, сепсисинфаркт миокардакарцинома молочной железы с метастазамиинфаркт миокарда, лёгочная эмболиякардиогенный шокострая сердечная недостаточностьинфаркт миокардааденокарцинома яичников, отёк лёгкихсердечная недостаточность, отёк лёгкихсахарный диабет, дегидратациядыхательная недостаточность, эмфиземакарцинома лёгких, бронхопневмонияострая сердечная недостаточностьбронхопневмония, сепсисСокращения: М; мужчина, Ж; женщина, Н; окраска нейронов, Г; окраска глиальных клеток, ВЯДБ; вертикальное ядро диагонального поля Брока, БЯМ; базальноеядро Мейнерта, СОЯ; супраоптическое ядро, ИНФ; инфундибулярное ядро, ТМЯ; туберомамиллярное ядро, ММЯ; медиальное мамиллярное ядро.165Таблица 34Случаи с болезнью Альцгеймера№ВозрастПолБЯМСОЯИНФТМЯММЯН/ГН/ГН/ГН/ГН/ГН/ГПричина смертиболезнь Альцгеймера, кахексияболезнь Альцгеймера, пневмония, сепсисболезнь Альцгеймера, кахексия,дыхательная недостаточность4)60Ж++ /+++++++ /++++ /+++++ /+++++ /++++ /+++болезнь Альцгеймера, внезапная смерть5)61М+++ /+++ /++++ /+++++ /++++- /+болезнь Альцгеймера, лихорадка6)63Ж+++ /+++++ /+++++ /++++ /++++- /++болезнь Альцгеймера, инфаркт миокарда7)63Ж++ /++++ /+++ /++болезнь Альцгеймера, кахексия8)63М+++ /++++++ /++++ /+++++++ /+++++ /++++ /+болезнь Альцгеймера, пневмония9)63М+++ /+++++ /+++++ /+++++ /++++++ /+++болезнь Альцгеймера, агранулоцитоз10)68М+++ /++++++ /+++ /+++болезнь Альцгеймера, пневмония11)69Ж+++ /++++++ /++++ /+++++ /++++++ /++++ /+++болезнь Альцгеймера, пневмония12)69М+++ /+++ /++ /++++ /++болезнь Альцгеймера, бронхопневмония13)72Ж++ /++++ /+++++ /++++ /+++++ /++++ /++болезнь Альцгеймера, бронхопневмония14)72М+++ /++++ /++++ /+++ /++++ /+болезнь Альцгеймера, пневмония15)72М+++ /++++ /+++++++ /+++болезнь Альцгеймера, сердечнаянедостаточность16)78М++ /++ /+++- /++++ /+++- /+болезнь Альцгеймера17)78Ж++ /+++ /++++ /+++++ /++++ /+болезнь Альцгеймера, кахексия18)79Ж++ /+болезнь Альцгеймера, бронхопневмония,кахексия19)80Ж+++ /++++ /++++ /+++ /+++++ /++++ /+болезнь Альцгеймера, внезапная смерть20)82М+++ /+++++ /++++++ /+++++++ /++++++ /+++болезнь Альцгеймера, пневмония21)83Ж+++ /++++ /++++ /+++++ /+++++ /+болезнь Альцгеймера22)85М+++ /++болезнь Альцгеймера, почечнаянедостаточность23)87Ж+++ /++++++ /++болезнь Альцгеймера, кахексия24)94Ж++ /+++++ /++++ /++болезнь Альцгеймера, дегидратация25)96Ж+++ /++болезнь Альцгеймера, пневмонияСокращения: М; мужчина, Ж; женщина, Н; окраска нейронов, Г; окраска глиальных клеток, ВЯДБ; вертикальное ядро диагонального поля Брока, БЯМ; базальноеядро Мейнерта, СОЯ; супраоптическое ядро, ИНФ; инфундибулярное ядро, ТМЯ; туберомамиллярное ядро, ММЯ; медиальное мамиллярное ядро.1)2)3)545758ЖММВЯДБ+++ /++++++ /+++++ /+++++ /++++++ /+++ /+++++ /+++++ /++++ /++ /+++ /+++++ /+++++ /+++++ /++ /++ /++ /+166Таблица 35Контрольные случаи в возрасте до 50 лет№ВозрастПолВЯДБН/ГБЯМН/ГСОЯН/ГТМЯН/ГММЯН/ГПричина смертиострая сердечная недостаточность, острая фибринозногеморрагическая пневмониякардиогенный шокпечёночная комаинфаркт миокарда и острая сердечная недостаточностьфеминизирующая карцинома надпочечников с метастазамиострая сердечная недостаточностьбронхопневмония, отёк лёгкихастматический бронхит, отёк лёгких, гипоксия, комадорожно-транспортное происшествиедыхательная недостаточность, лейкемия, сепсисперфорирующая язва двенадцатиперстной кишки,перитонитхориокарцинома яичка с метастазами, односторонняягонадэктомияинфаркт миокарда, злоупотребление алкоголемпневмонияостановка сердцасахарный диабет I типа с осложнениямикарцинома лёгких, почечная недостаточностьопухоль лёгких с метастазами, обширная тромбоэмболия1)20М+++ /+++ /+-++ /++++ /+++++ /++2)3)4)5)28293131ЖЖММ+++ /+++++ /+++- /++ /++- /+++ /+-++ /+++++ /++- /++++ /+-+++ /+++++ /+++ /++++ /++6)7)8)9)10)3233333536ЖЖММЖ++ /++ /++ /++- /++++ /++ /++ /++++ /+++++ /++++++ /+++++ /+11)36М++ /+++ /++++ /++12)13)14)15)16)17)434347484949ЖМММЖЖ+ /+-++ /+-+ /++- /++ /++++ /+++++ /++++ /+++++ /++++- /+++- /++ /+18)50М++ /+++ /+++ /+++++ /+++ /+++++ /++++++ /++++ /+++++ /++++ /+++++ /+++++ /++++ /+карцинома мочевого пузыря с метастазами, сепсис, отёклёгкихСокращения: М; мужчина, Ж; женщина, Н; окраска нейронов, Г; окраска глиальных клеток, ВЯДБ; вертикальное ядро диагонального поля Брока, БЯМ; базальноеядро Мейнерта, СОЯ; супраоптическое ядро, ТМЯ; туберомамиллярное ядро, ММЯ; медиальное мамиллярное ядро.БЯМУ пациентов с БоАл в нейронах БЯМ обнаружена более высокаяэкспрессия иммунореактивной ароматазы, чем у контрольных случаев (p =0.003), тогда как для глиальных клеток наблюдалась обратная тенденция (p =0.074) (Рис.

Характеристики

Список файлов диссертации