Диссертация (1174246), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Результаты выражали в мкмоль/л [91].Метод измерения активности СОД основан на степени торможения реакцииавтоокисления кверцитина [61]. За условную единицу активности СОД принима-39ли количество фермента, необходимое для снижения скорости окисления кверцитина на 50%.Активность каталазы определяли методом, основанным на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс [69]. Интенсивность окраски измеряли фотометрически при длине волны410 нм. Активность каталазы выражали в мкат/мл.
Активность СОД и каталазытакже определяли на спектрофотометре «Apel 330 PD» (Япония).ОАА определяли методом, основанным на степени ингибирования аскорбат- и ферроиндуцированного окисления твина-80 до МДА. Оптическую плотность измеряли на программируемом полуавтоматическом биохимическом анализаторе «БТС-330 (Испания) при длине волны 532 нм через 48 часов инкубациипри 40oС [110].2.8. Морфологическое исследование печениС целью морфологического исследования сразу после забоя животныхатравматично извлекали печень с одновременной оценкой ее макроскопическиххарактеристик: внешнего вида, массы, размеров, цвета, констистенции, структурыткани на разрезе. Печень взвешивали и в дальнейшем рассчитывали массовый индекс органа путем деления массы печени на массу тела животного и умноженияполученного результата на 1000.Печень фиксировали в десятикратном объеме 10% раствора нейтральногоформалина.
Для гистологического исследования брали стандартные участки печени в области ее ворот. Затем материал заливали в парафин по стандартной методике с последующим изготовлением срезов толщиной 5-7 мкм. Окраску срезовпроводили гематоксилином и эозином.Для объективизации морфологических данных осуществляли микрофотографирование срезов с помощью оптической системы Leica CME и окуляркамеры DCM-510 с последующим проведением морфометрии с помощью пакетапрограмм ImageJ.40Состояние гепатоцитов и оценку распределения поражений в печеночнойдольке оценивали по микрофотографиям гистологических препаратов. Определяли количество одноядерных и двуядерных, а также одноядрышковых и многоядрышковых гепатоцитов в центральном и периферическом отделах печеночныхдолек.2.9.
Статистическая обработка данныхПолученные цифровые данные обрабатывали с помощью пакета прикладных программ Microsoft Office Excel 2010 и программной среды вычислений R.Тип распределения признаков в статистической выборке определяли с использованием критерия Шапиро-Уилка. Значимость полученных результатов оценивалис помощью дисперсионного анализа (one-way ANOVA и с использованием критерия Крускала-Уоллиса), а также непарного параметрического t-критерия Стьюдента и непараметрического критерия Манна-Уитни в зависимости от типа распределения признаков.
Корреляционные связи между признаками устанавливалипри помощи коэффициента ранговой корреляции Спирмена (r s). Результаты считали достоверными при p≤0,05 [34, 66].41Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1. Влияние пептида АКТГ4-7-ПГП (семакса) на морфофункциональное состояние печени крыс при эмоционально-болевом стрессеУчитывая многогранность стрессорной реакции, для оценки уровня стрессаиспользуется множество методик, включающих исследование как психологических, так и физиологических составляющих данного процесса.Принимая во внимание механизмы стрессорного повреждения печени иописанные эффекты изучаемого пептида, такие как дозозависимый анальгетический, антигипоксический, анксиолитический и нейротрофический, представляетсяцелесообразным изучение влияния данного препарата на состояние печени вусловиях эмоционально-болевого стресса, характеризующегося наличием болевого компонента вследствие электрокожного раздражения лап и эмоциональногокомпонента как результата реакции на боль и присутствие другого животного вмомент ее возникновения.3.1.1.
Изменения биохимических показателей в сыворотке крови и гомогенизате печени на фоне введения АКТГ4-7-ПГП (семакса) в условияхэмоционально-болевого стрессаДля оценки функционального состояния печени нами было исследована интенсивность цитолитических процессов на основе анализа активности сывороточных трансаминаз и оценена белоксинтетическая функция печени путем определения концентрации общего белка в сыворотке крови. Функционирование ферментных антиоксидантных систем оценивалось путем определения в гомогенизате печени активности каталазы и СОД, а также интегрального показателя – ОАА. Приэтом во внимание принималась концентрация продукта ПОЛ – МДА.Как видно из нижеприведенных данных, ОЭБС вызывал существенное изменение исследованных биохимических показателей как в сыворотке крови, так ив гомогенизате тканей печени (таблица 1, рисунок 2-5).42Таблица 1 – Эффекты АКТГ4-7-ПГП при остром эмоционально-болевом стрессе (M±m)Стрессированные животныеГруппаПоказательВведение АКТГ4-7-ПГП в дозе:Контроль безстрессаКонтроль5 мкг/кг50 мкг/кг150 мкг/кг450 мкг/кгСыворотка кровиАлАТ, Ед/л58,9±3,957,3±3,965,9±3,161,1±5,745,7±3,4*56,9±3,1АсАТ, Ед/л155,6±10,7207,7±20,01151,6±8,1*161,8±8,8*147,2±11,4*137,0±5,4*Общий белок, г/л58,7±1,058,6±1,255,1±1,260,1±1,058,8±1,961,0±1,2Гомогенизат печениМДА, мкмоль/л2,5±0,12,7±0,113,3±0,1*2,5±0,1*3,2±0,1*2,3±0,1*Каталаза, мккат/л3,1±0,23,3±0,13,5±0,23,2±0,23,2±0,23,1±0,23,5±0,13,4±0,13,9±0,1*3,3±0,13,4±0,13,3±0,133,6±0,834,0±0,837,2±0,3*33,6±0,635,0±0,733,5±0,5СОД,усл.
ед.ОАА, %Примечание. * – р≤0,05-0,001 по сравнению с контрольной группой крыс, подвергавшихся стрессу;трольной группой крыс, не подвергавшихся стрессу.1– р≤0,05 по сравнению с кон-43Сравнение активности аминотрансфераз сыворотки крови в контрольныхгруппах нестрессированных и стрессированных крыс показало достоверное увеличение у последних активности АсАТ на 25,1% (р ≤ 0,05).
При этом активностьАлАТ оставалась на исходном уровне (рисунок 2).Рисунок 2 – Изменение активности сывороточных аминотрансфераз привведении АКТГ4-7-ПГП в условиях ОЭБС30120100АсАТ% -10АлАТ-20**-30***-40Контроль5 мкг/кг50 мкг/кг150 мкг/кг450мкг/кгПримечание. * – р≤0,05-0,01 по сравнению с контрольной группой крыс, подвергавшихся стрессу; 1 – р≤0,05 по сравнению с контрольной группой крыс, не подвергавшихся стрессу.Эффекты АКТГ4-7-ПГП в отношении активности АсАТ были однонаправленными и способствовали нормализации вызванных стрессорным воздействиемсдвигов.
Наиболее выраженное влияние пептид оказывал в максимальной использованной дозе 450 мкг/кг, после введения которой активность фермента снижалась на 34,0% (p≤0,01). После введения пептида в меньших дозах наблюдалосьнекоторое ослабление наблюдаемого эффекта, однако сравнение показателейопытных групп между собой статистически достоверных различий не выявило.Так, при дозе 150 мкг/кг данный показатель снизился на 29,1% (p≤0,01), 50 мкг/кг– на 22,1% (p≤0,05), 5 мкг/кг – на 27% (p≤0,01).
Следовательно, пептид в доста-44точно широком диапазоне доз оказывал существенное корригирующее влияние науровень сывороточной АсАТ в условиях острого эмоционально-болевого стресса.Изменения активности АлАТ после введения АКТГ-4-7- ПГП имело менеевыраженный характер. Достоверное снижение активности фермента отмечалосьтолько лишь после введения пептида в дозе 150 мкг/кг (на 20,2%, p≤0,05). Востальных опытных группах достоверных различий с показателем контрольнойгруппы не установлено.Изменения концентрации общего белка в сыворотке крови не наблюдалоськак у контрольных стрессированных животных, так и в экспериментальных группах (рисунок 3).Рисунок 3 – Эффекты АКТГ4-7-ПГП на содержание общего белка в сыворотке крови при ОЭБС6420%Общий белок-2-4-6-8Контроль5 мкг/кг50 мкг/кг150 мкг/кг450мкг/кг30-минутное эмоционально-болевое стрессирование приводило к активациипроцессов ПОЛ, что проявлялось увеличением концентрации МДА в гомогенизате тканей печени на 7,86% (p≤0,05) (рисунок 4).45Рисунок 4 – Эффекты АКТГ4-7-ПГП на содержание МДА в гомогенизатетканей печени при ОЭБСМДА30*25*201510%1МДА50-5*-10-15Контроль5 мкг/кг50 мкг/кг150 мкг/кг*450мкг/кгПримечание.
* – р≤0,05-0,001 по сравнению с контрольной группой крыс, подвергавшихся стрессу; 1 – р≤0,05 по сравнению с контрольной группой крыс, не подвергавшихся стрессу.Введение АКТГ4-7-ПГП в дозах 50 и 450 мкг/кг вызвало достоверное снижение уровня МДА в гомогенизате печени на 5,4% (p≤0,05) и 12,8% (p≤0,001) соответственно и нивелировало вызванное стрессом его повышение. Напротив, введение пептида в дозах 5 и 150 мкг/кг приводило к увеличению содержания МДАсоответственно на 23% и 21% (p≤0,001).Изменения факторов антиоксидантной защиты при этом имели маловыраженный характер. Так, после стресса не наблюдалось достоверных изменений активности каталазы, СОД и ОАА (рисунок 5).Влияние пептида на данные показатели проявилось только после его введения в минимальной из использованных доз – 5 мкг/кг в виде достоверного увеличения активности СОД на 14,4% и ОАА на 10,9% (р≤0,001).
Введение других дозпрепарата не приводило к значимым изменениям исследуемых показателей.46Рисунок 5 – Эффекты АКТГ4-7-ПГП на факторы антиоксидантной защитыв гомогенизате тканей печени при ОЭБС20*15*10СОД%5каталазаОАА0-5-10Контроль5 мкг/кг50 мкг/кг150 мкг/кг450мкг/кгПримечание. * – р≤0,001 по сравнению с контрольной группой крыс, подвергавшихсястрессу.ХЭБС сопровождался более значимыми изменениями исследованных показателей (таблица 2, рисунок 6-10). Так, активность АлАТ при ХЭБС достоверновозрастала (на 21,8%, р≤0,05), в то время как активность АсАТ фактически не изменялась (рисунок 6).
Говоря об изменении активности аминотрансфераз в контрольных группах животных, подвергавшихся и не подвергавшихся стрессорномувоздействию, следует отметить, что сдвиги активности были противоположнымитаковым при остром стрессе. Введение АКТГ4-7-ПГП в дозах 150 мкг/кг и 450мкг/кг вызывало снижение активности АлАТ соответственно на 29,5% (р≤0,01) и22,9% (р≤0,05) и полностью корригировало вызванные стрессом сдвиги данногопоказателя. Данный факт может свидетельствовать о снижении цитолиза гепатоцитов на фоне применения пептида в данных дозах.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
