Диссертация (1174186), страница 34
Текст из файла (страница 34)
и соавт., 2012).Основной морфологической особенностью УФ сшивания с препаратомДекстралинк на 3-7 сут наблюдений был менее существенный, чем прииспользованиидругихрибофлавинсодержащихрастворов,отекслоевроговицы. Ранее нами был отмечен этот эффект Декстралинка, обусловленныйего спецификой изменять величину гидратации ткани роговицы. На 14 сут211отёчны были небольшие участки стромы преимущественно в глубоких слоях,через 30-90 сут отечность стромы приобретала единичный характер.G. Wollensak с соавт.
называют одним из главных патоморфологическихкомпонентов УФ сшивания роговицы потерю кератоцитов, которую онинаблюдали в передних (до 300 мкм) слоях стромы кроликов в условияхрибофлавин-УФ-дозозависимого воздействия (Wollensak G. et al., 2004а).Большинство имеющихся наблюдений, в т.ч. клинических, выполнялисьпосле УФ сшивания роговицы с рибофлавин/декстраном. Так, конфокальная invivo микроскопия у пациентов с КК в раннем послеоперационном периоде (7сут) выявила признаки эпителиопатии с полиморфизмом клеток базальногоэпителия (Бикбова Г.М., Заболотная В.А., 2011).
Выявлено уменьшениеплотности кератоцитов передних и средних слоев стромы. При этом данныеоптикокогерентной томографии в течение 6-12 мес после лечения позволиливыявить «демаркационную линию», указывающую на глубину рибофлавинУФ-индуцированного фотохимического процесса (Бикбов М.М. и соавт.,2014)и,соответственно,развитиялакунарногоотекасвременнымпомутнением (хейзом) роговицы (Wollensak G. et al., 2010б).
Максимальноерасположение «демаркационной» линии у пациентов с КК отмечено впределах 340 нм (Mazzotta C. et al., 2008). При этом, восстановлениепрозрачности экстрацеллюлярного матрикса, нервных волокон и репопуляциякератоцитов может наблюдаться примерно через 6 мес после УФ сшивания(Бикбов М.М. и соавт., 2014).УФ сшивание со средством Хитолинк характеризовалась отеком стромыс утолщением Десцеметовой мембраны на 3-14 сут после облучения,определяласьполиморфноклеточнаяинфильтрация.Вобразцахгистопрепаратов обнаруживали участки дегенерации эндотелия.
Признакиотекастромысохранялисьдо90сутнаблюдений.Описаннаяпатоморфологическая картина использования УФО-Хитолинк, возможно,связанасэффектами,индуцируемымихитозаномвприсутствии212ультрафиолетовоговоздействия.Кромеэтого,следуетотметить,чтобиоактивность полимера может зависеть от его концентрации в растворе.Очевидно, также, что для хитозан-опосредованной стимуляции процессоврегенерации в роговице после процедуры кросслинкинга присутствия тольколишь одного биополимера недостаточно.
По всей видимости, для этого всостав офтальмологического раствора требуется введение дополнительныхбиологически активных компонентов, как например, в медизделии «Бол-хит»,содержащемкромехитозанахондроитинсернуюигиалуроновую(D-глюкуроновую) кислоты, сывороточный фактор роста крупного рогатогоскота и гепарин (Лазаренко В.И. и соавт., 2009; Лозбина Н.В. и соавт., 2016).Авторами представлены результаты клинико-морфологического исследованийпрепарата при экспериментальной проникающей травме роговицы. При этом вранний период (14 сут) определялся отек эпителия и набухание стромыроговицы с образованием складчатости, отмечалась активная пролиферация имиграция фибробластов стромы в область повреждения.
В последующемнезначительный отек стромы сохранялся до 3 мес, однако воспалительныйинфильтрат отсутствовал.По данным прижизненной конфокальной микроскопии, УФ сшивание сприменениемизоосмотического(контроль)иисследуемыхраствороврибофлавина (Декстралинк, Риболинк и Хитолинк) вызывало однотипныеморфологические изменения в роговице кролика in vivo. До 14 сут в опытныхгруппахотмечалиполиморфизмявленияклетокэпителиопатиибазальногоэпителия.сдесквамациейВизуализироваликлетокиапоптозкератоцитов в виде сетчато-расположенных клеток в переднем и среднемслоях роговицы, что связано с развитием в них лакунарного отека.
На 7-30 сутпосле рибофлавин-УФ-сшивания в передней строме отмечалиснижениеплотности кератоцитов. При этом апоптотированные клетки роговицырегистрировали на глубине до 360 мкм, в то время как задние слои стромы и213эндотелий без патологических изменений. На 30-90 сут отмечали появлениеединичных активированных кератоцитов в виде ярких контрастных клеток.Прижизненная конфокальная микроскопия роговицы кроликов послеУФО без рибофлавина выявила выраженные патоморфологические измененияво всех слоях стромы.
Наблюдали (до 90 сут) избыточный апоптозкератоцитовпрактическинавсюглубинустромысповреждениемэндотелиального слоя клеток, которое регистрировалось в виде статистическизначимого снижения их плотности, нарушением формы и упорядоченности.Таким образом, одним из основных морфологических измененийроговицы после ее УФ сшивания с использованием изучаемых намиофтальмологических растворов являлся отек стромы в виде вакуолизации иснижение плотности кератоцитов преимущественно в передних и среднихслоях роговицы, при сохранении эндотелиального слоя клеток.Наиболееактивную фазу набухания стромы наблюдали на 3-7 сут после процедуры,послечеговыраженностьпроцессапостепенноснижалась,однаконезначительный очаговый отек сохранялся до 90 сут.6.3.
Роль изменений локального и системного уровня цитокинов иантиоксидантного статуса при ультрафиолетовом сшивании роговицыОсобенностьюклиническихисследованийцитокиновогопрофиляпациентов с кератоконусом после УФ сшивания роговицы явилось влияниеисходного патологического фона, вызванного заболеванием. Так, нами былоустановлено статистически значимое (р<0,01-0,001) повышение содержаниятрансформирующих факторов роста в СЖ пациентов: TGF-1 в 10 раз иTGF-2 более чем в 25 раз, по сравнению с таковыми в группе практическиздоровых лиц, что, вероятно, может свидетельствовать о компенсаторнойинициации интракорнеальных процессов, направленных на активацию синтезароговичного коллагена и белков межклеточного матрикса (Бикбов М.М.
исоавт., 2013).214Одной из важнейшихфункцийTGF- является егоучастие врегенерации тканей, т.к. он стимулирует продукцию фибронектина иколлагена фибробластами, повышая их внедрение в межклеточный матрикс(Servold S., 1991). Показано, что TGF-β может способствовать увеличениюпродукции компонентов внеклеточного матрикса и подавлять активностьколлагеназы (Shah M. et al., 1992), а его изоформа -2 ограничиваетпролиферацию клеток, синтез IFN- и провоспалительных цитокинов (Wang J.et al., 2014).В настоящем исследовании выявлено двукратное превышение нормыуровней TNF- и IFN- в слезе больных КК по сравнению с нормой, пристабильных значениях IL-1.
Как известно, последний играет важную роль вразвитии и регуляции иммунных реакций, а активация цитокина, как правило,происходит при действии на организм патогенных факторов. TNF- способенактивизироватьэкспрессиюмолекуладгезии,дифференцировочныхцитокинов, а также хемотаксических факторов (Zhou L.
et al., 1996). Кромеэтого TNF- является индуктором апоптоза, опосредованного, в частности,активными формами кислорода. Травмы роговицы и кератэктазии, в рядудругих глазных заболеваний, ассоциированы с избыточным содержаниемцитокина в СЖ. Примечательно, что ряд исследователей, отмечая рост TNF-αв слезе, ставят под сомнение невоспалительный характер кератоконуса (LemaI., Duran J., 2005).По нашим данным УФ сшивание роговицы стандартным способомспособствовало дальнейшему росту уровней TGF-1 и TGF-2 в СЖ через 3сут после процедуры, соответственно, в 1,5 и в 2,5 раза (р<0,001), при этомрегистрировалось пиковое значение TGF-2.
Клинически в этот же период (34 сут) отмечали практически полное восстановление роговичного эпителия,удаленного в процессе оперативного вмешательства. На 7 сут исследованийуровень TGF-1 достиг максимума (р<0,001), тогда как концентрация TGF-2,215напротив, уменьшилась. В последующем (14 сут) локальное содержание TGF1 и -2 снижалось, оставаясь при этом выше (р<0,01-0,001) контрольныхзначений. С тем, чтобы оценить возможное влияние деэпителизации привыполнении стандартного УФ сшивания в клинические наблюдения быливключены пациенты с КК, у которых данная процедура выполняласьссохранением эпителия.
Установлено, что в течение всего срока исследования(14 сут), динамика изменения концентраций TGF-1 и -2 после стандартногокросслинкинга носила аналогичныйс трансэпителиальным, но менеевыраженный характер.Сшиваниеколлагенароговицырибофлавин-ультрафиолетомспособствует активизации синтеза трансформирующего фактора роста, чтопроявляется повышением его концентрации в слезной жидкости послепроцедуры.РостуровняTGF-1происходитболеемедленно,егомаксимальное содержание отмечали через 7 суток после УФ кросслинкинга,тогда как TGF-2 – уже на 3 сутки. Увеличение локальной концентрацииTGF-1 и -2 могло быть обусловлено запуском первичных механизмов«уплотнения» стромы, которые лежат в основе последующей стабилизациибиомеханических свойств роговицы (Бикбов М.М. и соавт., 2013).Нами установлено, что концентрация TNF- в слезе пациентов с КК на 3и 7 сут после стандартного и трансэпителиального практически неизменялась, а через 14 дней местный уровень TNF- снижался, превышая приэтом данные нормы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
