Диссертация (1174186), страница 36
Текст из файла (страница 36)
Показано, что недостаток рибофлавина в стромеформирует каскад патоморфологических событий необратимого характера,приводящихкпотеренативнойструктурыроговицы.Наоснованиипроведенных исследований обоснована необходимость дифференцированногоподхода к применению рибофлавинсодержащих растворов при проведенииультрафиолетового сшивания роговицы.222ВЫВОДЫ1.Выявленоотсутствиецитотоксичности,раздражающегоисенсибилизирующего действия разработанных офтальмологических растворов,обеспечивающих эффективное и безопасное ультрафиолетовое сшиваниероговицы.
Степень проницаемости и динамика интраокулярного содержаниярибофлавина в роговице и влаге передней камеры глаза экспериментальныхживотных обусловлены составом растворов и площадью деэпителизации (8-9 мм).2.Ультрафиолетовоеоблучениевприсутствииисследуемыхраствороврибофлавина способствовало повышению прочностно-механических свойствроговицы – увеличению модуля Юнга на 103-221% (р<0,01) и предела прочностина146-246%(р<0,01).Экспериментальнообосновананеобходимостьдифференцированного подхода к применению рибофлавинсодержащих растворовпри проведении УФ сшивания роговицы в зависимости от ее толщины: припоказателе более 450 мкм – рекомендуется Декстралинк, 400-450 мкм – Риболинк.Определено, что декстран-опосредованное обезвоживание корнеальной ткани,характерное для раствора Декстралинк, увеличивает жесткость роговицы.3.
Экспериментально показано, что поглощение ультрафиолета роговицей припроведении ее ультрафиолетового сшивания зависит от физико-химическихсвойств растворов фотосенсибилизаторов и толщины оптической оболочки глаза.Степень УФ абсорбции роговицей на 7±1,6% выше при использованиипрепаратов Риболинк и Хитолинк, чем Декстралинк. Определено значениеформирования прекорнеальной пленки в дополнительной защите глаза от УФизлучения в зависимости от вида рибофлавинсодержащего раствора: применениерастворов на основе биополимеров увеличивает поглощающую способностьсистемы «роговица–рибофлавин–прекорнеальная пленка» на 29±8,1% (р<0,05).НедостаточнаяУФабсорбцияроговицейпослеинстилляцийсредстваДекстралинк, обусловленная снижением корнеальной толщины, компенсируетсястабильностью образуемой пленки.2234.
Показано значимое усиление образования активных форм кислорода ипроцессов свободно-радикального окисления в тканях глаза, проявляющеесяростом значений светосуммы железоиндуцированной (на 56-75%, р<0,05) илюминолзависимой хемилюминесценции (на 58-406%, р<0,05-р<0,01); продуктовфотопероксидации, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой на 26-44% (р<0,05)в супернатантах гомогенатов роговиц и глазных яблок, влаге передней камерыживотных после рибофлавин-ультрафиолетового воздействия.5.
По данным гистологии и прижизненной конфокальной микроскопии выявленыморфологические особенности роговицы животных после ультрафиолетовогосшиваниясиспользованиемрибофлавинсодержащихрастворов,характеризующиеся набуханием стромы, уменьшением плотности кератоцитов впередних (до 40-51%, р<0,05) и средних (до 35-46%, р<0,05) слоях в первые 30дней эксперимента с последующим восстановлением архитектоники оптическойоболочки (90 сут) при отсутствии повреждения эндотелия. Установлено, чтоультраструктурные изменения роговицы сопровождаются повышением диаметраколлагеновыхфибрилл(на4-10%)ирасширениеммежфибриллярногопространства (на 5-13%).6. Установлено повышение локальных уровней TNF-, IFN-, TGF-1 (в 10 раз,р<0,001), TGF-2 (в 25 раз, р<0,001) у пациентов с кератоконусом при отсутствиизначимыхсистемныхизменений.Особенностямистандартногоультрафиолетового сшивания роговицы с рибофлавином являются транзиторноеувеличение содержания IL-1β, IFN- (р<0,05), TGF-1 и -2 (р<0,05) в слезнойжидкости, при неизменных значениях TNF-.
Значимых системных измененийконцентрации цитокинов не обнаружено.7. У пациентов с кератоконусом отмечается снижение антиоксидантного статусаслезы (на 40%, р<0,05). Ультрафиолетовое сшивание роговицы сопровождаетсяослаблением локальной системы антиоксидантной защиты (на 52%, р<0,05) иснижением уровня супероксиддисмутазы (на 70%, р<0,05) в ранние сроки послепроцедуры (1-3 сут), вызванные усилением выработки активных форм кислорода224и процессов свободно-радикального окисления в тканях глаза.
При этом общийантиоксидантный статус организма не изменяется.8.Механизмыулучшенияультраструктурыроговицыиповышенияеебиомеханических свойств под воздействием ультрафиолетового облучения спредложенными растворами рибофлавина обусловлены изменением диаметраколлагеновыхфибрилл,сопровождающимсятранзиторнымувеличениеммежфибриллярного пространства, усилением образования активных формкислорода и процессов свободно-радикального окисления, снижением локальногоантиоксидантногостатуса,отсутствиемнекротическихивыраженныхвоспалительных реакций в тканях глаза. Недостаток содержания рибофлавина встроме формирует каскад патоморфологических событий необратимого характера(васкуляризация в слоях роговицы, нарушение целостности десцеметовоймембраны, эндотелиальная дистрофия), приводящих к потере нативной структурыроговицы.225ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИРаствор«Декстралинк»рекомендуетсяприпроведениипроцедурыультрафиолетового сшивания (кросслинкинга) роговицы при кератэктазиях дляприменения в офтальмологической практике.Для выполнения безопасного и эффективного ультрафиолетового сшиванияроговицы необходимо качественное насыщение стромы рибофлавином, котороеможет быть достигнуто преимущественно за счет достаточной площадидеэпителизации (не менее 8-9 мм).Привыполненииультрафиолетовогосшиванияроговицыфотосенсибилизаторами, содержащими декстран, рекомендуется предварительноенасыщение роговицы продолжительностью не менее 30 мин.
Минимальнаятолщина роговицы, при которой может использоваться средство «Декстралинк»,должна быть не менее 440-450 мкм.Применение раствора «Риболинк» с гидроксипропилметилцеллюлозой,обладающего хорошей способностью к пенетрации в строму, допустимо нароговицах не менее 400 мкм, а длительность этапа насыщения может бытьсокращена до 20-25 мин.Нерекомендуетсяиспользованиераствора«Хитолинк»всвязиваскуляризацией и разрастанием соединительной ткани в роговице.Значимым аспектом безопасности процедуры ультрафиолетового сшиванияроговицы является наличие прекорнеальной пленки рибофлавина, стабильностькоторой определяется вязкостью раствора.
В связи с этим во время выполненияультрафиолетового сшивания роговицы, как на этапе насыщения, так и на этапеоблучения, рекомендуется придерживаться следующей частоты инстилляций вглаз: для средств «Декстралинк» и «Риболинк» – 1 капля в 2 мин, дляизоосмотического раствора рибофлавина – 1 капля в мин.226ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫПредложенные нами методические подходы оценки интенсивностипротекания процессов свободно-радикального окисления и образованияактивных форм кислорода в тканях глаза открывают новые возможности длясравнительныхэкспериментальныхиклиническихисследованийэффективности различных протоколов ультрафиолетового сшивания роговицыи патогенетических аспектов воздействия данной процедуры на состояниеоптической оболочки, в том числе с учетом применения разнообразныхспособов коррекции кросслинкингиндуцированных осложнений.227ПРИЛОЖЕНИЕИсследования, представленные в настоящей работе, легли в основу научнотехнической документации на разработанные медицинские изделия протекторроговицы«Декстралинк»и«Устройствоофтальмологическоедляультрафиолетового облучения роговицы глаза «УФалинк», которые былиофициально зарегистрированы.228229СПИСОК СОКРАЩЕНИЙАФК – ROS – (reactive oxygen species) активные формы кислородаАФА – RNS – (reactive nitrogen species) активные формы азотаВПК – влага передней камерыГПМЦ – гидроксипропилметилцеллюлозаЖИ ХЛ – железоиндуцированная хемилюминесценцияКК – кератоконусЛЗ ХЛ – люминолзависимая хемилюминесценцияМДА – малоновый диальдегидММП – матриксная металлопротеиназаММП-МТ – матриксная металлопротеиназа мембранного типаОАС – TAS – (total antioxidant status) общий антиоксидантный статусОКТ – оптикокогерентная томографияПОЛ – перекисное окисление липидовР-Р – роговица-рибофлавинР-Р-П – роговица-рибофлавин-прекорнеальная пленкаСЖ – слезная жидкостьСК – сыворотка кровиСОД – супероксиддисмутазавк-СОД – внеклеточная супероксиддисмутазац-СОД – цитозольная супероксиддисмутазаСРО – свободно-радикальное окислениеТИМП – тканевой ингибитор матриксной металлопротеиназыТБК – тиобарбитуровая кислотаТБК-рп – ТБК-реагирующие продуктыУФ – ультрафиолетовыйУФО – ультрафиолетовое облучениеФС – фотосенсибилизаторХЛ – хемилюминесценцияЭЦМ – экстрацеллюлярный матрикс230CXL – (UV corneal collagen crosslinking) ультрафиолетовое сшивание(кросслинкинг) роговицыА-CXL – ускоренное (акселерированное) ультрафиолетовое сшивание роговицыS-CXL (s-CXL) – стандартное ультрафиолетовое сшивание роговицы с удаленнымэпителиемTE-CXL (t-CXL) – трансэпителиальное ультрафиолетовое сшивание роговицы ссохраненным эпителиемEpi-On – (epithelium On) сохранение эпителия роговицыEpi-Off – (epithelium Off) деэпителизация роговицыIFN – (interferon) интерферонIL-1 – (interleukin-1) интерлейкин-1Н2О2 – перекись водородаNO – (nitric oxide) оксид азотаTGF – (transforming growth factor) трансформирующий фактор ростаTNF – (tumor necrosis factor) фактор некроза опухоли231СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
