Диссертация (1174186), страница 33
Текст из файла (страница 33)
Однако, единого мнения в отношении уровня образования АФК иинтенсивности связывания компонентов основного вещества стромы нет(Дубинина Е.Е., 2001; Лю Б.Н., Лю М.Б., 2005).Рост параметров ЛЗ и ЖИ хемилюминесценции образцов ВПК,супернатантов из роговичных гомогенатов и глазных яблок после УФоблучения (370 нм) роговицы без рибофлавина, характеризующих активациюпроцессов СРО за счет АФК-ассоциированного воздействия, наряду соснижением антиоксидантного статуса тканей глаза, может приводить к АФКопосредованномуапоптозуивпоследствиикнеобратимымпатоморфологическим изменениям роговицы (Скулачев В.П., 2001). Показано,что следствием масштабной гибели кератоцитов при УФ сшивании роговицыявляется появление в передних и средних (до 250 мкм) слоях стромыхарактерного лакунарного отека, являющегося одной из причин временногопомутнения (хейза) роговицы (Wollensak G.
et al., 2010).Доказательства сдвига прооксидантно-антиоксидантного баланса втканях глаза были получены при изучении супернатантов гомогенатовроговиц и глазных яблок после УФО без применения ФС, где наблюдали ростТБК-рп на 20% и 38%, соответственно. Количественно содержание ТБК-рп втканях глазного яблока выше, чем в роговице. Очевидно, что после УФОроговицы в процессы липоперокисдации были вовлечены и другие глазныеструктуры.Динамика уровня ТБК-рп, как в супернатантах гомогенатов роговиц, такиглазныхяблок после рибофлавин-УФ сшивания, характеризовалось206умеренным снижением показателя в течение 1-14 сут после процедуры.
Такимобразом, количество образующихся ТБК-рп лимитировалось присутствиемфотосенсибилизатора в роговице в условиях ее УФ облучения.Само по себе удаление эпителия (Epi-Off) практически не влияло насодержание ТБК-рп в тканях глаза, в отличие от значимой УФ-индуцируемойактивации процессов ПОЛ при выполнении стандартного (с деэпителизацией)УФ сшивания роговицы.Следует отметить, что патологический процесс при кератоконусесопровождается ростом концентрации малонового диальдегида в слезе более,чем на 38% (Семенова А.Л. и соавт., 2008а; Халимов А.Р. и соавт., 2011),увеличением диеновых конъюгатов и кетодиенов по сравнению с нормой(Горскова Е.Н. и соавт., 2002).Исходя из вышеизложенного, можно заключить, что УФ облучениероговицы усиливало активность процессов свободно-радикального окисленияв тканях глаза, которые в присутствии рибофлавина проходили менееинтенсивно.
Тенденцию к постепенной нормализации параметров ЛЗ и ЖИхемилюминесценции наблюдали в срок до 14 сут, концентрации ТБК-рп вокулярных тканях – до 7 сут. При этом влияние деэпителизации роговицы навыраженность свободно-радикальных процессов была незначительной. Такимобразом, в основе механизма УФ сшивания лежит АФК-опосредованнаяактивация процессов СРО, которые, в свою очередь, способны инициироватьнежелательные патофизиологические последствия процедуры.Настоящие исследования направлены на изучение механизмов УФсшивания роговицы, в том числе на обоснование возможности последующегоприменениявклиническойпрактикеизучаемыхофтальмологическихрастворов, в частности, средства Риболинк (состава: 0,1% рибофлавин и 1,0%ГПМЦ на изотонической буферной основе).
Известно, что повышениеконцентрациилекарственныхсредствврастворахувеличиваетихосмотичность и агрессивность для конъюнктивы при местном применении.207При суммарной концентрации растворенных ингредиентов менее 1% растворыявляются гипоосмотичными и относительно безопасными, в диапазоне 1-10%– обладают умеренной локальной гиперосмотической активностью, а вдиапазоне 10-76% – способны оказывать выраженное гиперосмотическое инекротизирующее действие (Ураков А.Л. и соавт., 2011).
Проведенная намиоценка возможного токсического действия исследуемых офтальмологическихрастворов для УФ сшивания роговицы Декстралинк, Риболинк, Хитолинкпоказала безопасность их биологического действия по тесту цитотоксичностиin vitro на культуре фибробластов мыши, критерию осмомоляльности,раздражающего действию на кожу и слизистую оболочку глаз кроликов,кожной реакции после сенсибилизации (Бикбов М.М.
и соавт., 2010).Ультраструктурныеизменениявламеляхстромы,связанныесособенностями их фибриллярной «упаковки» после УФ обработки, являютсяопределяющими в повышении биомеханических свойств роговицы. УФоблучение(370нм,фотосенсибилизатора3мВт/см 2 ,приводилок10мин)роговицыснижениюкрысупорядоченностибезиоднородности фибриллярной последовательности, при этом ранний период (3сут) наблюдения характеризовался снижением количества фибрилл наизмеряемой площади (0,25 мкм 2) и тенденцией к увеличению их диаметра до36,92±2,88 нм, против контроля 35,59±2,33 нм.
К сроку 90 сут отмеченныеизменения диаметра фибрилл сохранялись, а межфибриллярное пространствовосстанавливалось практически до нормы. При этом морфологическиепризнаки нарушения однородности фибрилл и локального набухания стромысохранялись.Ультраструктураколлагенарибофлавинсодержащимироговицырастворамина3сут(изоосмотический,послеУФОсДекстралинк,Риболинк, Хитолинк) характеризовалась более значимым ростом диаметрафибрилл от 37,78±3,16 нм – при сшивании с Хитолинком и до 39,62±3,21 нм –при использовании изоосмотического раствора.
В этот же срок во всех208опытных группах сохранялась упорядоченность коллагеновых фибриллнаряду со снижением компактности фибриллярной упаковки. А наблюдаемоеувеличение межфибриллярного пространства, очевидно, связано с развитиемпостоперационного отека стромы. В конечный срок эксперимента, возросшийдиаметрфибриллпрактическисохранялся,восстанавливалась.аплотностьКакпоказалирасположениянашифибриллморфологическиенаблюдения, участки стромы с локальными явлениями отека все-такиприсутствовали.Однако нет полной ясности относительно плотности расположенияфибрилл в волокнах после рибофлавин-УФ сшивания роговицы.
Как известно,патологическийпроцессприККсопровождаетсянарушениемфункционального состояния роговичного коллагена, в частности, за счетснижения диаметра фибрилл, которое может достигать 10-15% по сравнению снормой. Лечение пациентов с КК методом рибофлавин-УФ сшиванияроговицы с последующей сквозной кератопластикой (через 6 мес) в связи снизкойостротойзренияпозволилоAkhtarS.ссоавт.провестиультраструктурное исследование изъятого в ходе операции материала,которое выявило повышение диаметра фибрилл в ламелях, при увеличениирасстояния между волокнами коллагена (Akhtar S.
et al., 2013).В некоторых работах показано, что межфибриллярное пространствоувеличивается, в ряде исследований – уменьшается. По видимому, это связанос разными сроками наблюдений, различными экспериментальными моделямии исходным патологическим фоном, например при КК.Установлено повышение плотности фибриллярной последовательностинепосредственнопослепроцедурытрансэпителиальногоУФсшиванияроговицы кроликов с использованием рибофлавина с бензалконием хлоридом(Pinelli R.
et al., 2009). Очевидно, неповрежденный эпителий препятствовалнабуханию стромы, которое наблюдается при стандартном методе.209Получены сведения об увеличении диаметра и плотности упаковкифибрилл после УФ обработки с рибофлавином, где использовались донорскиероговицы на модели in vitro, исключающей процесс естественной гидратациироговицы и развития отека стромы (Choi S. et al., 2013).Увеличение стромального диаметра фибрилл обнаруживалось послерибофлавин-УФ сшивания роговицы у пациентов с КК и последующей (через6 мес) кератопластикой (Mencucci R.
et al., 2010). В данном случае имел местоисходно сниженный диаметр фибрилл по причине патологического состоянияроговицы, вызванного заболеванием.Результаты изменений структуры ламелей роговицы крыс, полученныенаминамоделидемонстрируют,корнеальногочтопроцессыУФсшиванияинтактныхпостоперационнойживотных,трансформацииколлагеновых волокон, в частности, укрупнение фибрилл, наблюдалось до 90сут эксперимента и не только на фоне патологического состояния роговойоболочки. Снижение плотности упаковки фибрилл отмечали в ранний срокпосле процедуры УФ сшивания с изучаемыми растворами рибофлавина (3сут),приэтомнекотороевосстановлениеисходногомежфибриллярногопространства наблюдали к 90 сут.Таким образом, если процесс изменения плотности фибриллярнойупаковкипослепроцедурыУФсшиваниясрибофлавиномимеетвариабельность, обусловленную сроком давности выполнения процедуры, тонеоспоримымкритериемультраструктурнойтрансформациироговицыявляется повышение диаметра фибрилл, что является одним из факторовповышения прочностных свойств корнеальной ткани (Wollensak G.
et al.2004б).Согласноданным,проведенныхисследованийдинамикиморфологических изменений роговицы крыс после УФ воздействия безрибофлавина (370 нм, 3 мВт/см 2, 10 мин) в ранний срок наблюдений (3-7 сут)выявлено расслоение коллагеновой структуры роговой оболочки за счет210значительного отека, при этом уже с 3-х сут определяли неравномерностьраспределения кератоцитов, связанную с их гибелью и врастание в стромуновообразованных сосудов с признаками эндотелиальной дистрофии.
К 14-30сут указанные патоморфологические изменения нарастали, а к 90 сут носилинеобратимый характер.Наиболее современные исследования последствий окулярного УФоблучения крыс in vivo при гораздо более жестком воздействии длиной волны300 нм без рибофлавина в течение 15 мин также указывали на индуцированиепроцессов апоптоза во всех трех слоях роговицы, которые уже через 5 чобнаруживаются гибелью эпителиальных клеток, керато- и эндотелиоцитов,достигая максимума через 24 ч (Kronschlаger M.
et al., 2015).Основные изменения роговицы после УФ сшивания с рибофлавиномизоосмотическим и средством Риболинк были связаны с разрыхлением пучковколлагеновых волокон, обусловленныеразвитием отека стромы в раннийпериод (3-7 сут) наблюдения. К 14 сут явления отека спадали, а к 30 сут –носили локальный характер. Через 90 сут после начала экспериментанаблюдали восстановление архитектоники клеточных слоев. В стромероговицыприсутствовалисвидетельствующиеоединичныесохранениижидкостиочагимеждуразволокнения,пучкамиволоконколлагена. Имеются данные исследования кадаверных глаз человека ex vivoпосле стандартного УФ сшивания с 0,1% рибофлавином, которые такжепоказалинарушениеправильнойархитектоникиволоконколлагенасналичием разволокнения структуры стромы и гибели кератоцитов в переднихслоях роговицы (Зотов В.В.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
