Диссертация (1173332), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Эффективность НКР при увеличениикостного объема АО составляла 97,4 ± 2,5% при применении остеозаменяющихматериалов, 100 ± 0% при применении и аутогенной кости, и остеозаменяющихматериалов и 98,6 ± 2,9% при применении аутогенной кости.Таким образом, эффективность применения аутологичной кости непревосходит таковую при применении остеозаменяющих материалов [20].Следуетотметить,чтопроцедуразаборааутокостидостаточнотравматичная и сложная, кроме того, применение аутотранспланатата нерекомендуется при обширных дефектах кости [81].Для изучения эффективности различных методик НКР в регенерациидефектов зоны фуркации было проведено исследование, в котором участвовали 20пациентов (50 дефектов зоны фуркации).
Пациенты были рандомизированы в 5групп, в группе 1 НКР проводилась с использованием резорбируемой мембраны(полигликолиевая кислота/полимер молочной кислоты), в группе 2 – сиспользованием резорбируемой мембраны (полигликолиевая кислота/полимермолочной кислоты и ГА), в группе 3 – с использованием соединительнотканноготрансплантата,в группе4–с использованием соединительнотканноготрансплантата и ГА, в группе 5 (контрольной) проводился только открытыйкюретаж. Во всех группах отмечалось статистически значимое улучшениеклинической симптоматики и повышение плотности кости по сравнению сконтрольной.
Полное закрытие дефекта отмечалось у 40% пациентов в группах 2103и 4 и у 20% – в группах 1 и 3. Также в группах 2 и 4 значимое увеличениеплотности кости при рентгенологическом обследовании было отмечено через 6 и12 мес. после проведения НКР, а в группах 1 и 3 – только через 12 мес. Такимобразом, наиболее успешным лечение было при применении ГА, что позволилоавторам исследования рекомендовать его применение при НКР [28].Средибольшогоколичестваразличныхметодоввосстановленияцелостности костной ткани и тканей пародонта только некоторые из них могутрассматриваться как регенеративные. Несмотря на широкое применениеразличных биоматериалов, применяющихся для регенерации тканей, ни один изтрансплантационных материалов не может рассматриваться как «золотойстандарт» регенеративной терапии [96, 108, 111, 128].Хорошие результаты при сохранении костной массы альвеолярного гребнябыли получены при применении остеозаменяющего материала животногопроисхождения и биоразлагаемой коллагеновой мембраны [56].Реабилитация пациентов с отсутствием зубов всегда является непростойзадачей, особенно при наличии протяженной атрофии нижнечелюстногоальвеолярного гребня.
Одним из методов, позволяющих восполнить дефициткостной массы является ДО.Наибольшую сложность при проведении ДО представляет контроль векторадистракции, в настоящее время решение данной проблемы не найдено [109].В экспериментальном исследовании было продемонстрировано, чтоприменение МСК с нейрональным ростовым фактором при ДО позволяетсущественно улучшить восстановление переднего альвеолярного нерва [123].Недостатками ДО являются многократные хирургические манипуляции инеудобство для пациента, вынужденного носить во рту дистрактор в течениепродолжительного времени [75, 88].В последнее десятилетие существенно возрос интерес к трансплантации СК.В связи с этим СК, полученные из зубной ткани, являются многообещающимитрансплантатами, поскольку являются высокопролиферативными и имеютспособность к мультидифференцировке [101].104Ранее в исследованиях in vivo было показано, что трансплантация СК связкипародонта приводит к быстрой регенерации тканей пародонта, в том числе АО,цемента и связки пародонта [71].В исследовании in vivo, проведенном Mizuno Н.
и соавт., было показано, чтомембраны культивированных аутологичных периостальных клеток вызвалирегенерацию тканей пародонта, в том числе АО, цемента и связки пародонта [82].Также в ряде исследований была показана эффективность трансплантацииМСК костного мозга в регенерации тканей пародонта [50, 57, 129].В исследованиях in vivo также было продемонстрировано, что СК жировойткани в сочетании с PRP обладают способностью восстанавливать дефектыпародонта,чтопозволяетрассматриватьданныеклеткикакисточниктрансплантатов в хирургии пародонта [51, 118].Вкачествесигнальныхмолекулвтканевойинженерииширокоприменяются различные факторы роста и цитокины в смеси с внеклеточнымматриксом, такие как МБК, фактор роста фибробластов, интерлейкин-6,инсулиноподобныйфакторроста,тромбоцитарныйфакторроста,трансформирующий фактор роста бета-1. Создание пула накопления факторовроста препятствует их деградации и защищает от влияния внешних факторов,облегчая их презентацию на поверхности клеточных рецепторов [98, 105].В тканевой инженерии большое значение имеет выбор биоразлагаемойполимерной конструкции (подложки) для успешного выращивания тканей.Так, было продемонстрировано, что керамические подложки с фосфатомкальция являются превосходным материалом для тканевой инженерии, посколькуониактивнопромотируютостеогенез.Крометого,ониявляютсябиоразлагаемыми.
В настоящее время ведется активное изучение данныхподложек в исследованиях in vitro и in vivo. Согласно результатам, полученным вряде исследований, в их создании следует использовать комбинированныйдизайн, принимая во внимание трехмерную архитектуру, химические свойстваповерхности и топографию, т. е. все факторы, необходимые для формированиякости.105Также была продемонстрирована эффективность применения подложки,содержащей хитозан, альгинат и ГА [59].В исследовании in vivo была показана эффективность использованиябиомиметической подложки, содержащей полилактид-ко-гликолид, со СКжировой ткани и МБК в ускорении заполнения костного дефекта нижней челюсти[69].Таким образом, в настоящее время методы тканевой инженерии нашлиширокое применение в дентальной хирургии для восстановления костныхдефектов, при этом особое внимание обращается на использование СК,полученных из зубной ткани, ведется отбор наиболее перспективных склинической точки зрения СК, а также разработка новых биоразлагаемыхполимерных конструкций для выращивания тканей.В связи с этим актуальным является создание новой методики направленнойтканевой регенерации с использованием аутологичных клеток.В основу данной работы вошло лабораторное и экспериментальноеисследование, проведенное в период с 2013 по 2016 гг.
В лабораторную частьисследования вошло:1. Была создана методика получения культуры МСК из прикрепленнойткани десны кролика в соответствии с требованиями, предъявляемыми кбиомедицинскимклеточнымпродуктамприпроведениидоклиническихисследований. Для получения культуры МСК был проведен забор фрагментаткани десны кролика размером 3×3×1 мм в условиях операционной.Оперативное вмешательство проводилось под общим наркозом препаратомЗолетил 0,5 мл внутривенно с предварительной премедикацией Рометаром 0,5 млвнутримышечно. Операцию проводили с соблюдением правил асептики иантисептики. Скальпелем производили треугольный разрез длиной 3–4 мм,тщательно осуществляли гемостаз.
Полученный биоматериал помещали встерильный контейнер с транспортной средой, содержащей питательную средуDMEM (Gibco) и 3% пенициллина-стрептомицина (Gibco), и транспортировалипри +20ºС в про- цессинговую лабораторию.106Культивирование осуществляли в стандартных условиях в СО2-инкубаторес концентрацией СО2 5%, атмосферного воздуха 95% и с повышеннойвлажностью.
Замену культуральной среды на свежую осуществляли каждые 72часа. Пассирование клеток осуществляли следующим образом: после образованиясубконфлюэнтного монослоя (80–90% площади культурального пластика) клеткиоднократно отмывали раствором Версена, затем снимали с помощью раствораВерсена с 0,25% трипсином, центрифугировали при 350 g, убирали надосадок,осадок ресуспендировали в полной питательной среде и разливали в новуюкультуральную посуду.2. Был выбран остеопластический материал в качестве матрицы носителяклеток на основании исследования на цитосовместимость со стандартнымилиниями клеток.Дляоценкиостеопластическиепролиферативногоматериалыпотенциалаотечественногобылипроизводствавыбраны«Коллапан»,«ЛиоПласт», зарубежного производства «Bio-Oss», «Easy-Graft».Эти материалы были выбраны, так как они относятся к разным группамостепластическихматериалов.Так,материал«ЛиоПласт»отечественногопроизводства представляет собой деминерализованное губчатое вещество костнойткани,отечественныйостеопластическийматериал«Коллапан»–этоискусственный ГА в комбинации с коллагеном и линкомицина гидрохлоридом.«Easy-Graft» – это синтетический остеопластический материал.
«Bio-Oss» –натуральный остеопластический материал на основе бычьей костной ткани.3. Присозданиитканеинженернойконструкциисиспользованиемаутогеных остеобластов для лечения заболеваний пародонта установлено, что ниодин из исследуемых зарубежных и отечественных материалов не обладаетвыраженными адгезивными и пролиферативными свойствами, что ухудшаетвосстановление костной ткани и является причиной экссудативных явлений инеудачи оперативного наращивания объема костной ткани.
В результате серииэкспериментов in vitro установлено, что отмывание образцов костных материаловзначительно ухудшает их адгезивные и пролиферативные свойства. Присоздании тканеинженерной конструкции, направленной на восстановление107дефекта костной ткани челюстей, с использованием аутологичных клеток самымилучшимипролиферативнымиостеопластическийматериалиадгезивнымизарубежногоBio-Oss.свойствамиОтмываниеобладаетобразцовбуферным раствором ухудшило пролиферативные и адгезивные свойства всехматериалов, кроме остеопластического материала Bio-Oss, свойства которогоулучшились.Усовершенствованная методика культивирования аутологичных клеток иоценкаизмененияадгезивногоипролиферативногопотенциалаостеопластических материалов после оптимизации их свойств позволилиразработать композиционный материал для замещения костных дефектовчелюстей и способы его изготовления и применения.Экспериментальной частью работы явилось создание адекватной моделикритического дефекта нижней челюсти кролика с дальнейшей имплантациейцитосовместимого остеопластического материала в область тела дефекта нижнейчелюсти кролика.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
