Диссертация (1173332), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Изучение анатомического строения нижней челюсти кроликовподтвердило мнение о том, что кость в области угла и ветви нижней челюстиимеет толщину 0,3-2,3 мм и прикрыта толстым слоем мышечной ткани. Телочелюсти на уровне 2 и 3 зубов имеет толщину 7,2 и 11,4 мм и расположенонаиболее близко к поверхности кожи. В связи с этим формирование полостиосуществляли в области тела нижней челюсти на уровне 2 и 3 зубов. Послеместного обезболивания в подчелюстной области слева производили линейныйразрез длиной 35–40 мм, рассекая при этом кожу, подкожную жировую клетчаткуи фасцию. Тупо разводили мышцы.
Осуществляли тщательный гемостаз. Понижнему краю тела нижней челюсти рассекали надкостницу на протяжении 30–35мм и распатором отслаивали ее кверху, тем самым обнажая наружнуюповерхность тела нижней челюсти на уровне 2 и 3 зубов. С помощью бормашиныи фрезы с ограничителем у всех животных создавали в теле нижней челюстикостную полость. Такую же операцию выполняли справа В сформированныекостные полости на нижней челюсти слева после операции заполняли МСКвместескостнымматериаломBio-Oss,накладывалирезорбируемую108мембрану BioGide.
Дефект, сформированный с правой стороны, заполняликостным материалом Bio-Oss, перемешанным с кровяным сгустком, накладывалирезорбируемую мембрану BioGide. После заполнения костных полостейуказанными имплантатами мягкие ткани над ними послойно ушивали наглухо. Нанадкостницу, мышцы и фасции накладывали погружные швы кетгутом, края ранысшивали узловыми швами из шелка.Животных выводили из эксперимента на 30, 90 и 180 сутки по 4 животныхна каждый срок в каждой группе путем внутрибрюшинного введения калипсола вдозе 750 мг/кг и листенона в дозе 200 мг/кг массы экспериментальногоживотного.Фрагмент челюстной кости, содержащий дефект, фиксировали в 70° спиртев течение 10 суток и декальцинировали в растворе трилона-Б в течение 3-хнедель.
После отмывания образцов в спирте их заливали в парафин. Парафиновыесрезы толщиной 4–5 мк окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксиномпо Ван-Гизону для выявления коллагеновых волокон и толуидиновым синим длявыявления кислых гликозаминогликанов.Для подтверждения эффективности разработанной методики остеогенезаинтраоперационного дефекта с использованием остеозамещающего материала,насыщенногоаутологичнымиклетками,былапроведенаприжизненнаямультиспиральная компьютерная томография кроликов с использованиемаппарата Asteion 4 через 1, 3 и 6 месяцев послеоперационного периода.Анализируя полученные данные, можно сделать вывод о повышенииоптической плотности костной ткани в опытной группе как в сравнении сконтрольной группой, так и во времени течения репаративного процесса.Гистологическое изучение костной ткани в области дефекта нижнейчелюсти кролика позволяет сделать следующее заключение:1.
В контрольной группе, где дефект костной ткани заполнялся материаломBio-Oss без МСК, через 3 месяца в полости дефекта остаются фрагменты Bio-Oss,который окружается плотной фиброзной, местами рыхлой, соединительнойтканью. В этот период отмечаются признаки остеогенеза: новообразованнаякостная109ткань формируется вокруг фрагментов Bio-Oss и вблизи стенок «материнской»кости. Через 6 месяцев после операции полость в основном заполняетсясозревающей новообразованной губчатой костной тканью с формированиемкостного мозга жирового типа.
Внутри большинства трабекул костной тканиостаются фрагменты Bio-Oss.2. В опытной группе, где дефект костной ткани заполнялся материалом BioOss с МСК, через 1 месяц после операции полость дефекта была еще заполненафрагментами материала Bio-Oss. Однако уже в этот срок среди фрагментовматериала начинают формироваться отдельные трабекулы новообразованнойкостной ткани. Такие же трабекулы образуются и на стенках полости дефекта.Таким об- разов, в срок 1 месяц уже появляются признаки остеогенеза.Через 3 месяца бывшая полость дефекта, в отличие от контроля, ужезаполнена новообразованной губчатой костью, причем костная ткань имеетотносительнозрелоестроениебезучастковостеоида.Однакосрединовообразованных трабекул, а также внутри них обнаруживаются еще небольшиефрагменты материала Bio-Oss, который подвергается резорбции макрофагами игигантскими многоядерными клетками инородных тел.Через 6 месяцев после операции полость бывшего дефекта заполняетсягубчатой костной тканью, значительно более зрелой, чем в контроле в этотпериод.
Отмечается также частичная компактизация костной ткани регенерата.Очень редко внутри трабекул кости остаются фрагменты Bio-Oss.Таким образом, в опыте и контроле остеогенез идет двумя путями: 1)образование новообразованных костных балок вокруг фрагментов Bio-Oss и 2)формирование кости на периферии полости вблизи «материнской» кости. Вопытной группе, где были использованы аутогенные МСК, остеогенез в полостидефекта значительно опережает контрольную группу (без МСК).110ВЫВОДЫ1. Способ получения аутологичных мезенхимальных стволовых клеток изприкрепленной ткани десны соответствует требованиям, предъявляемым кклеточным линиям биомедицинского клеточного продукта, и позволяетпровести экспансию клеток для получения необходимой дозы на раннихпассажах (р2-р3).2.
В качестве матрицы носителя культуры аутологичных мезенхимальныхстволовых клеток был выбран остеопластический материал ксеногенногопроисхожденияBio-Oss,которыйнеоказываетцитотоксическоговоздействия на культуры клеток, обеспечивает высокую выживаемостьклеток при in vitro культивировании испосопствует формированию костнойткани in vitro.3. Разработанная и охарактеризованная методика направленной тканевойрегенерации костной ткани заключается в использовании ксеногенногоостеопластического материала, приведенного в виде гранул (150–400 мкм) инасыщенного аутологичными клетками из прикрепленной ткани десны.4. Оптическая плотность образовавшейся костной ткани в дефекте челюсти,полученной при использовании аутологичных клеток, на 19,5 HU (Р≥1)выше, чем в костной ткани контрольной группы в сроках 1 месяц, 209 HUчерез 3 месяца, достигая значений оптической плотности нормальной кости,что существенно сокращает сроки ортопедической реабилитации иобеспечивает полное восстановление функции зубочелюстного аппарата.5.
По данным морфологического исследования, через 6 месяцев в опытнойгруппе выявлено, что полость бывшего дефекта заполнена трабекулярнойкостной тканью, имеет значительно более зрелый характер, чем вконтрольной группе: трабекулы были более толстые, с правильнойорганизацией костной структуры, что свидетельствует не только околичественном росте, влияющем на объем кости, но и о качестве костнойткани.6. Проведенный анализ исследований по изучению гемодинамики пациентов спослеоперационными дефектами челюстей, позволяет заключить, чтоприменение биокомпозиции остеокондуктивного препарата в сочетании с111аутологичнымиМСКдеснызначительноповышаетэффективностьрепаративного остеогенеза, а разработанная методика может применятсядлякоррекцииальвеолярнойкости,необходимойадекватной ортопедической реабилитации пациентов.дляпроведения112ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ1.
Создана и апробирована методика малоинвазивного забора биоматериала,не требующая привлечения специалиста другого профиля. Даннаяметодика может с успехом применяться в клинике ортопедическойстоматологии для забора биоматериала для последующего созданиябиомедицинского клеточного продукта.2. С целью эффективного замещения объемных костных дефектов челюстейцелесообразнопродукта,применятьсостоящегопрототипизбиомедицинскогокомбинацииклеточногозарегистрированногоостеопластического материала ксеногенного происхождения с размерамичастиц 150–400 мкм и клеточной линии мезенхимальных стволовыхклеток из прикрепленной части десны в рекомендованной дозе 1×106клеток/см3.3.
Разработанныйпрототипбиомедицинскогоклеточногопродукта,показавший высокую эффективность в ускорении процессов регенерациикостной ткани при объемных дефектах челюстей кроликов, может бытьрекомендован для клинической апробации с целью подготовки пациентовс вторичной адентией к дальнейшему ортопедическому лечению.113СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.Апресян, Г. Н.
Нуждаемость в ортопедической стоматологической помощинаселения пожилого и старческого возраста и особенности ее оказания вусловиях бесплатного (льготного) зубного протезирования: автореф. дис. …канд. мед. наук: 14.00.21 / Апресян Григорий Николаевич. – М., 2005. – 28 с.2.Бронштейн, Д. А. Сравнительный анализ эффективности несъемногопротезирования в зависимости от способа фиксации металлокерамическихкоронок на дентальных имплантатах / Д. А. Бронштейн, Р. У. Берсанов, О. В.Евстратов и др. // Российский стоматологический журнал.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
