Автореферат (1155053), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Полученные результаты представлены в таблице 13.Таблица 13. Общее количество высвобождающихся ТИА из различных эритроцитарныхформ in vitro (% выражение*)Эритроцитарные формыТИАVCRVCR:ПЭГ 4000 - 1:5VCR:ПЭГ 4000 - 1:10VCR:ПЭГ 4000- 1:20VCR:ДМСОVLBVLB:ПЭГ 4000 - 1:10VLB:ПЭГ 4000 - 1:20VLB:ПЭГ 400- 1:20VLB:ДМСО104,845,433,784,047,308,306,708,3611,599,592010,228,806,347,0812,9715,4513,0417,1619,8016,73Время инкубации (t) мин406012023,6740,2945,0716,6530,3037,349,2419,0724,7610,7417,3625,4818,9325,2337,6831,3449,4560,5223,4737,5144,9725,3244,8152,8728,6636,6343,9824,4232,7746,1924048,1845,3931,3634,6647,9764,8051,8558,0650,7856,2536054,5353,3340,1339,9954,2368,0763,8960,7560,3564,50*среднее знач.; SD (VCR) ≤ 3,72; SD(VLB) ≤ 6,1.Согласно результатам, представленным в таблице 13 и на рис.
5 видно, что высвобождениеинкапсулированных ТИА препаратов из эритроцитарных носителей составляло в среднем дляVCR - 54,93± 3,29%, VCR: ПЭГ4000 1:5 - 53,33 ± 2,60%, VCR: ПЭГ 4000 1:10 - 40,13 ± 4,74%,VCR: ПЭГ4000 1:20 - 39,99 ± 2,86%, VCR: ДМСО 2 мг/мл - 54,24 ± 8,87%, VLB - 68,07% ± 14,55;VLB: ПЭГ 4000 1:10- 63,89% ± 6,75; VLB: ПЭГ 4000 1:20- 60,75% ± 6,11; VLB: ПЭГ 400 1:201860,35% ± 7,63; VLB: ДМСО 2 мг/мл - 64,50% ± 1,91 от инкапсулированных в эритроцитарных формза отмеченный период времени в 6 ч.
(относительная погрешность среднего результата (ξ) непревышала 21,38%).Рисунок 5. График зависимости высвобождения VLB и VCR сульфата из различных эритроцитарных форм in vitro (37 0С) от времени инкубацииа.- Кумулятивное высвобождение VLB сульфата, б. Кумулятивное высвобождение VCR сульфата(%, ср. знач.± SD) от инкапсулированного количества препарата в ЭНОпределение стабильности КН и клеточных форм ТИА препаратов. Исследования осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ) проводили для нормальных и ТИА инкапсулированных эритроцитов. Полученные результаты представлены в таблице 14.Таблица 14. Данные о степени гемолиза различных ТИА-загруженных ЭНКонтрольныеэритроциты*0,11000,295,32 ± 0,6840,380,26 ± 0,450,429,35 ± 0,980,513,67 ± 0,670,65,30 ± 0,220,654,24 ± 0,410,73,58 ± 0,880,83,11 ± 0,430,91,12 ± 0,13n=3; *Ср.
знач. ± SDNaCl, %Степень гемолиза K(Hb), %ТИА-ПЭГ-ЭритроТИА-Эритроциты*циты*10010099,17 ± 0,8794,86 ± 0,7989,59 ± 1,6387,54 ± 1,4866,61 ± 2,0462,87 ± 1,233,46 ± 1,3531,95 ± 1,424,35 ± 1,6223,08 ± 0,7615,17 ± 1,7414,70 ± 1,057,06 ± 1,966,83 ± 1,085,55 ± 1,255,38 ± 0,914,03 ± 0,853,76 ± 0,39ТИА-ДМСО-Эритроциты*10096,28 ± 0,9589,18 ± 1,8266,05 ± 2,1732,51 ± 1,8623,58 ± 1,7314,89 ± 1,046,96 ± 1,495,48 ± 0,363,86 ± 0,92Таблица 15.
Метрологические характеристики среднего результата степени гемолиза (КHb)разных ТИА-загруженных эритроцитарных форм в 0,4% растворе NaClСтепень гемолиза (КHb) разных ТИА-загруженных эритроцитарныхМетрологическая хаформ в 0,4% растворе NaClрактеристика среднегоКонтрольные эритEry-VCR: ПЭГEry-VCRрезультатаEry-VCR (%)*роциты (%)*(%)*ДМСО (%)*25,3966,6162,8766,05x̅s20,9664,141,434,7019SDRSD∆x̅*ξn = 3; *P = 95%,0,9830,0332,448,302,030,035,057,581,200,0192,974,722,170,0335,398,15Данные, приведенные в таблице 15 показывают, что ТИА инкапсулированные ЭН гемолизируются в среднем на 65,18% ± 5,0 (P = 95%) в сравнении с контрольными эритроцитами, которыегемолизируются на 29,39% ± 2,44 в 0,4% растворе NaCl (относительная погрешность среднего результата (ξ) не превышала 8,3%). Инкапсулирование эритроцитов в среде, модифицированнойПЭГ, показывает повышение устойчивости к гемолизу по сравнению с эритроцитами, инкапсулированными в немодифицированной среде.
Это свидетельствует о том, что ПЭГ могут стабилизировать и минимизировать повреждения клеточных мембран эритроцитов в процессе инкапсуляции.Турбулентная хрупкость эритроцитов является еще одной характеристикой, которая зависит от изменений в целостности клеточной мембраны и отражает устойчивость нагруженных эритроцитов к гемолизу, вызванному турбулентным потоком внутри капиллярной при сосудистой циркуляции в организме (таблица 16).
Из результатов, описанных в таблице 17 видно, что после энергичного встряхивания и 6 часов инкубации при 37 0С, выделение гемоглобина из ТИА инкапсулированных эритроцитарных форм имеет среднее значение для VCR, инкапсулированного в немодифицированной среде – 7,39% ± 0,249, а для VLB – 7,36% ± 0,241.
Для VCR, инкапсулированногов модифицированной среде VCR:ПЭГ4000 1:20 – 7,25% ± 0,24, VLB:ПЭГ4000 1:20 7,27% ± 0,117,VCR:ДМСО – 7,39% ± 0,412, VLB:ДМСО -7,26% ± 0,175. Выделение гемоглобина из контрольнойпробы составило 6,8% ± 0,175 (P = 95%). Относительная погрешность среднего результата (ξ) непревышала 5,6%. Полученные результаты показывают, что высвобождение гемоглобина из ТИАинкапсулированных эритроцитов по сравнению с неинкапсулированными, имеет тенденцию к увеличению в среднем на 6% после энергичного встряхивания и 6 часов инкубации при 37 0С.Таблица 16.
Высвобождение гемоглобина из ТИА загруженных эритроцитов послеэнергичного встряхивания in vitroВыделение гемоглобина Hb, %*ВремяЭритроЭритроинкуба- КонтрольЭритроЭритроциты-VCR:циты-VLB:ции ные эритроциты-VLBциты-VCRПЭГ 4000 ПЭГ 4000(мин)циты1:201:20103,48 ± 0,04 3,82 ± 0,04 3,89 ± 0,04 3,73 ± 0,03 3,73 ± 0,03204,09 ± 0,06 4,28 ± 0,03 4,36 ± 0,03 4,35 ± 0,07 4,37 ± 0,03404,73 ± 0,07 5,35 ± 0,03 5,49 ± 0,04 5,64 ± 0,06 5,62 ± 0,04605,58 ± 0,06 5,91 ± 0,04 6,03 ± 0,08 6,11 ± 0,04 6,04 ± 0,031205,98 ± 0,04 6,49 ± 0,06 6,81 ± 0,04 6,53 ± 0,04 6,47 ± 0,062406,32 ± 0,04 6,90 ± 0,07 7,04 ± 0,03 7,00 ± 0,03 6,71 ± 0,043606,80 ± 0,04 7,09 ± 0,04 7,21 ± 0,06 7,25 ± 0,06 7,16 ± 0,09n=3, *- Сред. зн ± ̅̅̅̅20ЭритроЭритроциты-VCR- циты-VLBДМСОДМСО3,88 ± 0,044,59 ± 0,035,97 ± 0,046,3 ± 0,086,59 ± 0,046,97 ± 0,037,39 ± 0,063,83 ± 0,064,56 ± 0,036,02 ± 0,066,23 ± 0,036,64 ± 0,046,83 ± 0,067,26 ± 0,04Таблица 17.
Метрологическая характеристика среднего результата высвобождения гемоглобина из различных ТИА-загруженных эритроцитарных форм после энергичного встряхивания (после инкубации 6 ч.)Высвобождение гемоглобина (%)Метрологическая характери- ЭН безEry-VCR: Ery-VLB: Ery-VCR- Ery-VLBДМСОстика среднего инкапсу- Ery-VCR Ery-VLB ПЭГ 4000 ПЭГ 4000ДМСОлирова(%)*(%)*(%)*результата1:20 (%)*1:20 (%)*(%)*ния (%)*6,87,397,367,257,277,377,33x̅S20,00540,01090,01020,1010,0240,030,005SD0,07350,10440,10120,10070,04910,1730,0733RSD0,010810,01410,01420,01390,00680,02350,010010,175280,24890,24140,24010,11710,41250,1748∆x̅*ξ2,583,373,283,311,615,592,39*P=95%Определение стабильности КН и клеточных форм VCR и VLB при хранении.
Для изучения стабильности КН с включёнными ТИА, ЭН инкубировали в Na-фосфатном буфере при различных температурах. Стабильность определяли по степени высвобождения гемоглобина из эритроцитов при хранении. Полученные экспериментальные результаты представлены в таблице 18.Таблица 18. Степень гемолиза ТИА инкапсулированных ЭН при хранении в различныхусловиях1 деньТемпература, 0С41020ЭН1,0281,0571,415VCR-ЭН I1,1891,2361,764VCR - ЭН II1,1421,2831,811VCR- ЭН III1,2081,2641,849VCR- ЭН IV1,2261,3111,783VLB- ЭН I1,1421,2261,868VLB- ЭН II1,2081,2641,915VLB- ЭН III1,2451,3021,868VLB- ЭН IV1,1891,3211,849*Abs- контрольных эритроцитов - 0,109ФормаЭНСтепень гемолиза, K(Hb)3 деньТемпература, 0С410201,7641,8492,0571,9432,342,8112,0382,2832,7831,9812,2552,8112,0852,3022,7642,0472,2172,7172,0662,2552,6791,9622,2922,8022,0752,2452,6986 деньТемпература, 0С410202,2832,5283,0282,8873,0943,5752,9153,1233,4722,843,2833,6982,9253,1043,5282,9063,173,4722,9253,2263,4813,0093,2833,4912,9723,1983,604Полученные результаты демонстрируют, что хранение ТИА инкапсулированных ЭН при+4 0С в Na-фосфатном буфере является оптимальным.
В дальнейшем рассматривались характеристики изменения ТИА-ЭН при хранении только при данной температуре. Результаты представлены в таблицах 19 и 20.Таблица 19. Степень гемолиза ТИА инкапсулированных ЭН при хранении при +4 0СФорма ЭНЭритроцитыVCR-Ery-IVCR-Ery-IIVCR-Ery- IIIVCR-Ery- IVVLB-Ery-IVLB-Ery-II1 нед.11,09631,12591,14811,10371,14811,1704Время хранения (недели)2 нед.3 нед.1,44443,25561,72964,39261,69634,50371,74814,61111,64074,53702,21485,06672,25195,0963214 нед.10,325911,796311,688912,070414,011114,763014,5444VCR-ПЭГ-4000 (1:5)VCR-ПЭГ-4000 (1:10)VCR-ПЭГ-4000 (1:20)VCR-ПЭГ-4000 (1:50)VCR-ПЭГ-4000 (1:100)VLB-ПЭГ-4000 (1:10)VLB-ПЭГ-4000 (1:20)VLB-ПЭГ-400 (1:20)VLB-ПЭГ-4000 (1:50)VLB-ПЭГ-4000 (1:100)VCR-ATФVLB-ATФVCR-ДМСОVLB-ДМСО1,01851,04071,04811,06671,10371,02221,04071,04811,10741,11851,10371,13331,07041,05931,98892,00742,04072,10002,19261,99632,03332,00372,21482,23702,57042,62222,13332,15564,17784,21854,46674,58894,52594,61484,74814,41114,73704,82225,38525,5635,15565,192611,174111,325911,440711,729612,129612,544411,166711,525912,166712,463013,363013,985211,514811,7889*Abs- контрольных эритроцитов – 0,270Таблица 20.
Количественное содержание (%) инкапсулированных ТИА после хранения при+4 0СДни хранения137VCR-ЭН I873,47599,11VCR-ЭН II846,86698,18VCR-ЭН III859,27795,31VCR-ЭН IV893,068VCR-ПЭГ-1:201078,86999,01VCR-ПЭГ-1:201026,90898,93VCR-ПЭГ-1:201059,13197,50VCR-ПЭГ-1:201024,685VCR-ДМСО1246,90899,19VCR-ДМСО1179,73198,72VCR-ДМСО1248,66897,06VCR-ДМСО1206,786VLB-ЭН I891,73399,29VLB-ЭН II871,72798,19VLB-ЭН III911,73895,97VLB-ЭН IV906,678VLB-ПЭГ 1:201057,17899,01VLB-ПЭГ 1:201091,37898,69VLB-ПЭГ 1:201089,11697,38VLB-ПЭГ 1:201096,543VLB-ДМСО1291,73198,95VLB-ДМСО1269,17398,49VLB-ДМСО1209,15697,19VLB-ДМСО1245,867*Количества ТИА препаратов, применяемых для инкапсулирования – 2000 мкгФорма ЭНИнкапсулированное количество ТИА (мкг)1420,9929,9123,6621,3128,9923,94Таблица 21. Метрологические характеристики среднего результата количественного содержания инкапсулированных ТИА после хранения при +4 0С̅)Метрологические характеристики среднего результата (Количественное содержание инкапсулированных ТИА в ЭН после храненияпри +4 0С (%)1 д.3 д.7 д.14 д.22̅ = 99,09%s 0,02; SD = 0,128RSD = 0,00129∆̅ =0,1344; ξ = 0,14%2 =̅ = 98,53%s = 0,092; SD = 0,303RSD = 0,0031∆̅ = 0,32; ξ = 0,32%̅ = 95,96%s 0,1859; SD = 0,43RSD = 0,0045∆̅ = 0,45; ξ = 0,47%22 =̅ = 24,80%s 14,49; SD = 3,81RSD = 0,1535∆̅ = 3,99; ξ = 16,11%2 =Полученные данные свидетельствуют, что выдерживание ТИА инкапсулированной эритроцитарной формы при +4 °С является оптимальным условием для хранения ЭФ-ТИА препаратов.При хранении количественное содержание ТИА препаратов в эритроцитах изменяется.
Установлено, что после 3 дней хранения ЭН, содержание ТИА в них, в среднем, составляет 98,54% ± 0,32;после 7 дней - 95,96% ± 0,52, а после 14 дней - 24,80% ± 3,99 (P = 95%) от инкапсулированной дозы(относительная погрешность среднего результата (ξ) не превышала 16,11%). На основании полученных результатов можно сделать вывод о том, что максимальная продолжительность храненияТИА инкапсулированных ЭН при +4 0С составляет 7 дней, без уменьшения их терапевтическойдозы ниже 95% от инкапсулированных количеств ТИА препаратов (таблица 20).ВЫВОДЫ:1. Разработана спектрофотометрическая методика качественного и количественного определения VCR иVLB в субстанциях и лекарственных формах.2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
