Автореферат (1155053), страница 4
Текст из файла (страница 4)
Результатыэксперимента приведены в таблице 7.Таблица 7. Количественное содержание найденного препарата в процентном соотношениик связанному во фракции препаратуL(см)5,1105,110Связанные фракции препаратовС форменными элементамиВ плазмекрови% (от общ. свя% (от общ. связанmср. (мкг) mср. (мкг)Ср. %* mср. (мкг)Ср. %*занной фракции)ной фракции)VCR647,264339,35452,43307,91047,5752,6747,33641,420339,35452,91302,06647,09VLB284,507301,11852,92267,89647,0853,0446,96566,400301,11853,16265,28246,84В гемолизате13В таблице 7 показаны результаты связывания с компонентами плазмы VCR - 52,67% ± 0,54и VLB - 53,04% ± 0,27 по отношению к общей связанной фракции соответственно, а также с форменными элементами VCR - 47,33% ± 0,54 и VLB - 46,96% ± 0,27% (относительная погрешностьсреднего результата (ξ) не превышала 1,025 при P = 95%).Изучение взаимодействия ТИА VCR и VLB с форменными элементами крови. Результаты эксперименты представлены в таблице 8.Таблица 8.
Количественное содержание найденных и связанных препаратов с форменнымиэлементами кровиНайденоМетрологическиеm (мкг)R %*m (мкг)характеристикиVCR̅=53,09I531,50953,15468,491SD=0,06752II531,27153,13468,729RSD = 0,0013III530,65753,07469,343̅Х ± ∆х̅ = 53,09 ±0,1073% (P = 95%)IV529,99253,00470,001ξ = 0,2022%VLBX ̅ = 53,69I538,42653,84461,574SD=0,1914II538,10553,81461,895RSD = 0,0036III537,41853,42462,582Х±̅ ∆̅ = 53,69 ±0,3043 % (P = 95%)IV537,00553,70462,995ξ = 0,5667%* взято для приготовления модельного образца – 1000 мкг.№ колонкиСвязанноМетрологическиеR%характеристики46,8546,8746,9347,0046,1646,1946,2646,30X ̅ = 46,91SD = 0,06752RSD = 0,0014Х±̅ ∆х ̅ = 46,91±0,11 % (P = 95%)ξ = 0,2288%X ̅ = 46,23SD = 0,06752RSD = 0,0014Х±̅ ∆̅ = 46,91±0,10 % (P = 95%)ξ = 0,2200%В проведенном анализе с модельными образцами «В» подтверждаются данные, которыебыли получены в проведённом эксперименте с моделями «А» и «Б». Результаты в таблице 8 показывают, что препараты VCR - 46,91% ± 0,1073% и VLB - 46,23% ± 0,1017% (P = 95%) взаимодействуют с форменными элементами крови (эритроцитами) и остаются необнаруженными (относительная погрешность среднего результата (ξ) не превышала 0,2288%).
Таким образом, установлено, что ТИА препараты обладают высокой способностью связываться с компонентами плазмыи форменными элементами крови.Получение эритроцитарных клеточных форм ТИА препаратов VCR и VLB. Для получения эритроцитарной клеточной формы VCR и VLB использован модифицированный метод гипоосмотического лизиса. Полученные данные, представленные в таблице 9, свидетельствуют о довольно близкой степени включения исследуемых веществ в ЭН.Таблица 9. Сравнительные данные об эффективности включения ТИА препаратовХарактеристикаЭНПосле изолирования 1-4 нед.Практическое соЭффективностьдержаниевключения преПрепаратв надосадочнойпаратов, E (%)*̅ ± ∆х̅)жидкости, E(%)*(ХVCR32,45 ± 3,45766,75 ± 3,33214Общее количеПотеряство найденныхпрепарапрепаратовтов,(Сред.
зна.)%(%)99,200,80С.И.VCR42,96 ± 3,94655,94 ± 4,211После изолироваVLB31,22± 5,56967,42 ± 5,377ния 1-4 нед.С.И.VLB44,27 ± 3,86654,58 ± 4,257*- результаты представлены в виде среднего значения ±∆̅ (P = 95%)98,901,1098,641,3698,841,16Эффективность включения VCR и VLB в свежеизолированные эритроциты составила всреднем 42,96 ± 3,946% и 44,27 ± 3,866% соответственно (относительная погрешность среднегорезультата не превышала (ξ) - 9,184%).
Эти показатели демонстрируют, что эффективность загрузки значительно повышается при использовании свежеизолированных эритроцитов. В технологическом процессе получения ТИА инкапсулированных препаратов в ЭН потери препарата значительны. С фармацевтической и технологической точки зрения это не выгодно, поэтому разработка методики, позволяющей увеличить эффективность инкапсуляции ТИА препаратов, являетсяактуальным направлением исследований.Изучение возможности увеличения эффективности «загрузки» эритроцитов ТИА препаратами.
Инкапсулирование препаратов проводилось в модифицированной среде с ПЭГ (ПЭГ400 и ПЭГ-4000 (1:5, 1:10, 1:20; 1:50; 1:100); с ДМСО (2 мг/мл) и АТФ (2 мг/мл). Полученныерезультаты представлены в таблицах 10-12.Таблица 10. Эффективность «загрузки» ТИА препаратов в ЭН в модифицированной среде сПЭГВзято дляИнкапсулиро- Эффектив№ коСоотношеинкубироваванное коли- ность заМетрологическиелонки Марка ПЭГниениячествогрузки,характеристики*ТИА: ПЭГ(мкг)(мкг)E (%)VCRIПЭГ 400022001:51190,68654,12̅ = 53,30%;IIПЭГ 400022001:101428,84964,95SD = 12,318%;RSD = 0,2311IIIПЭГ 400022001:201445,38765,70̅Х ± ∆х̅ = 53,30 ± 15,31%;IVПЭГ 400022001:50942,86542,86Р = 95%; ξ = 64,243%VПЭГ 400022001:100855,48838,89VLBIПЭГ 400020001:10907,67445,38̅ = 46,11%;IIПЭГ 400020001:201000,63950,03SD = 7,003%;IIIПЭГ 400020001:50808,22340,41RSD = 0,1519̅IVПЭГ 400020001:100776,89038,84Х ± ∆х̅ = 46,11 ± 8,71 %Р = 95%; ξ = 42,228 %VПЭГ 40020001:201117,14655,86* Здесь и в таблицах 11-12, L хроматографический колонки (Cефадкс G -25) = 10 см, d = 10 мм.
Температура элюлирования – комнатная.В результате видно, что в среде, модифицированной ПЭГ, эффективность «загрузки» VCRв ЭН составила в среднем 53,30 ± 15,31% и VLB - 46,11 ± 8,71% (относительная погрешность среднего результата не превышала (ξ) 28,73%). Также установлено, что эффективность загрузки ТИАв средах, модифицированных ПЭГ-4000 и ПЭГ-400 (ТИА: ПЭГ - 1:20), возрастает на 10-20% вразных случаях и составляет для VCR - 65,70% и для VLB - 55,86%.15Таблица 11. Эффективность загрузки ТИА препаратов в ЭН в модифицированной среде сДМСО (2 мг/мл) *№ колонкиИнкапсулированное количество (мкг)Эффективность загрузки,E (%)VCRI1377,34162,61II1254,73957,03III1325,76560,26IV1358,65461,76V1401,32163,70VLBI1408,10564,01II1287,31158,51III1398,34563,56IV1423,90864,72V1349,08761,32*Здесь и в таблице 12: взято для инкубирования 2200 мкг ТИА.Метрологическиехарактеристики̅ = 61,07%;SD = 2,5821%;RSD = 0,4234̅Х ± ∆х̅ = 61,07 ± 3,21%;Р = 95%; ξ = 11,7540%̅ = 62,43%;SD = 2,5288%;RSD = 0,1519̅Х ± ∆х̅ = 62,43 ± 3,14%;Р = 95%; ξ = 11,2618%При модифицировании среды ДМСО наблюдается увеличение эффективности загрузки вЭН на 15 – 20% по сравнению с немодифицированной средой и составляет для VCR и VLB 61,07± 3,21% и 62,43 ± 3,15% (P = 95%) соответственно (относительная погрешность среднего результата не превышала (ξ) 5,26%).Таблица 12.
Эффективность загрузки ТИА препаратов в ЭН в модифицированной среде сАТФ (2 мг/мл)№ колонкиИнкапсулированное количество (мкг)IIIIIIIVV1001,87431053,64021114,93951083,11541203,3340IIIIIIIVV936,68161224,96091072,98371115,03031065,4529Эффективность загрузки, E (%)VCR45,5447,8950,6849,2354,70VLB42,5855,6848,7750,6848,43Метрологическиехарактеристики̅ = 49,61%;SD = 3,4161%; RSD = 0,06889̅ ± ∆х̅ = 49,61 ± 4,2471%;ХР = 95%; ξ = 19,1435%̅ = 49,23%;SD = 4,7126%; RSD = 0,957̅Х ± ∆х̅ = 49,23 ± 5,8590%;Р = 95%; ξ = 26,6129%Полученные результаты (таблица 12) демонстрируют увеличение эффективности загрузкиТИА препаратов в среде, модифицированной с АТФ, на 5-7%. Эффективность включения ТИАпрепаратов в модифицированной среде с 2 мг/мл АТФ при этом в среднем составила для VCR иVLB - 49,61 ± 4,249% и VLB - 49,23 ± 5,858% соответственно (относительная погрешность среднего результата не превышала (ξ) 11,898%).Сравнительные данные об эффективности включения ТИА препаратов в ЭН в модифицированных средах приведены на рис.
3.16Рисунок 3. Сравнительный график эффективности включения ТИА препаратов в ЭН в немодифицированной среде и модифицированных средахSD - стандартное отклонение, E% - эффективность загрузки ТИА; SE - стандартная ошибка среднего результата4. Изучение свойств ЭН с инкапсулированными ТИАУ полученной эритроцитарной лекарственной формы исследовали морфологические ифункциональные свойства in vitro. Контролем служили отмытые эритроциты, инкубируемые вфосфатном буфере.
На рис. 4 видно, что эллипсоидальная форма после загрузки не изменялась.Определение размера и физико-химических свойств эритроцитов. Оптико-микроскопические исследования показали, что инкубация эритроцитов с ТИА сопровождалась незначительными изменениями эритроцитов. При помощи метода спектральной мутности, установлено, чтодиаметр загруженных эритроцитов уменьшается на 1,0 - 1,5 мкм по сравнению с незагруженнымиэритроцитами: (d - 7,2689 ± 0,092 мкм и 8,5525 ± 0,125 мкм (Р=95%) соответственно (относительная погрешность среднего результата(ξ) не превышала 1,46%) (рис. 4).
Содержание воды в эритроцитах при инкапсулировании уменьшается приблизительно на 3% по сравнению с изолированными контрольными эритроцитами. Показано, что в процессе инкапсулирования процентное содержание сухого вещества увеличивается приблизительно на 3% по отношению к контрольнымэритроцитам, а размер эритроцитов уменьшается.17Рисунок 4. Оптическое изображение контрольных эритроцитов и загруженных ТИА эритроцитов(6Х цифровое увеличение): слева – контрольные эритроциты, справа - ТИА препараты, загруженные в эритроцитыПолученные значения показателя проницаемости мембран эритроцитов (ППМЭ) в контрольных эритроцитах составляли 1,3259 ± 0,00233 (P=95%; ξ= 0,17554%), а в ТИА инкапсулированных 1,4579 ± 0,02487% (P=95%; ξ= 1,7055%), что свидетельствует об увеличении проницаемости эритроцитарной мембраны в процессе инкапсулирования.
ЭН, инкапсулированные в модифицированной среде с ПЭГ 1:20, имеют значительно меньшие значения ППМЭ (1,44864), чем инкапсулированные в немодифицированной среде.Таким образом, получена ТИА инкапсулированная эритроцитарная форма с минимальнымиповреждениями эритроцитов.Изучение устойчивости КН к десорбции и высвобождению ТИА препаратов. В проведенном эксперименте в течение 6 ч in vitro определены характеристики высвобождения инкапсулированных препаратов из эритроцитов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
