Диссертация (1154746)
Текст из файла
РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВНа правах рукописиСтоляров Антон АнатольевичИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОСТИ ПЕПТИДГИДРОЛАЗ ВЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ ЧЕЛОВЕКА03.01.04 – БиохимияДиссертация на соисканиеученой степени кандидатамедицинских наукНаучный руководитель:доктор биологических наук,доцент Калинина Е.В.Научный консультант:доктор медицинских наук,профессор Бабиченко И.И.МОСКВА 20172СОДЕРЖАНИЕСПИСОК СОКРАЩЕНИЙ………………………………………………..4ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………… 6Глава I. ФЕРМЕНТЫ ОБМЕНА РЕГУЛЯТОРНЫХ БЕЛКОВ ИПЕПТИДОВ …...............................................................................................
121.1. Энзимологические основы образования, модификации идеградации регуляторных пептидов …………………………………....... 131.2. Характеристика протеолитических ферментов обменарегуляторных пептидов……………………………………..…………....... 151.2.1. Дипептидилкарбоксипептидазы………….………………………… 171.2.1.1. Пептидил-дипептидаза А…………………………...…………...... 171.2.2. Карбоксипептидазы……………………….………..……………...... 201.2.2.1.
Карбоксипептидаза Е……………………………….………..……. 201.2.2.2. Фенилметилсульфонилфторид-ингибируемаякарбоксипептидаза …………………...…………………………….……… 231.2.3. Аминопептидазы…………………………………………………….. 251.2.3.1. Лейциламинопептидаза……………………………..….…………. 251.2.4. Кислые протеазы. Катепсин D ………………….………………….. 261.3. Роль пептидогидролаз в обмене регуляторных белков ипептидов………………………………………………….…………………291.3.1. Общая характеристика регуляторных пептидов…………………..…..
291.3.2. Регуляторные белки………………………………………………..... 301.3.2.1. Гормоны белковой природы…………………………………..….. 301.3.2.2. Нейротрофические и ростовые факторы……………….………... 311.3.2.3. Цитокины………………………………………………….……….. 411.4. Роль пептидергической системы в этиологии и патогенезезлокачественных новообразований…………………………..…………… 43Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ……………… 5232.1. Материал и условия проведения исследований…………….……….. 522.2. Методы исследования……………………………………………..….. 532.2.1.
Определение активности карбоксипептидазы Е……………….….. 532.2.2. Определение активности фенилметилсульфо-нилфторидингибируемой карбоксипептидазы…….…………………………….….... 542.2.3. Определение активности пептидил-дипептидазы А……………… 542.2.4. Определение активности лейцин-аминопептидазы………………. 552.2.5. Определение активности кислых протеаз и катепсинаD……………………………………………………....................................... 562.2.6.
Метод определения белка……………………….………………….. 562.2.7. Методы статистической обработки………………….…………....... 57Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ….. 583.1. Изучение активности кислых протеаз………………………..……… 583.2. Изучение активности катепсина D………………………….………..623.3. Изучение активности карбоксипептидазы Е…………………..…….. 673.4. Изучение активности фенилметилсульфонилфторидингибируемой карбоксипептидазы…………………………………..…… 713.5. Изучение активности пептидил-дипептидазы А………………......... 753.6. Изучение активности лейцил-аминопептидазы…………….……….783.7.
Корреляционный анализ активности кислых протеаз, катепсина D,карбоксипептидазы Е (КПЕ), ФМСФ-ингибируемойкарбоксипептидазы (ФМСФ-КП), пептидил-дипептидазы А (ПДА) илейцинаминопептидазы (ЛАП) в злокачественных новообразованияхмолочной железы, желудка, кишечника, почек, печени и легкихчеловека…………………………………………………………………….. 82Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ………. 86ЗАКЛЮЧЕНИЕ……………………………………………………………..
95СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………………. 974СПИСОК СОКРАЩЕНИЙАКТГ –адренокортикотропный гормонБСА –бычий сывороточный альбуминВИП –вазоактивный интестинальный пептидГРФ –гонадотропин-рилизинг-факторГЭБ –гематоэнцефалический барьерГЭМЯК – гуанидиноэтилмеркаптоянтарная кислотадансил –5-диметиламинонафтален-1-сульфонилДИФФ –диизопропилфторфосфатДНФ –динитрофторбензолДТТ –дитиотреитолкбзкарбобензокси–КОС –кислотно-основное состояниеКПA –карбоксипептидаза AКПB –карбоксипептидаза BЛАП –лейцинаминопептидазаЛКП –лизин-карбоксипептидазаЛКПB –лизосомальная карбоксипептидаза BМСГ –меланоцитостимулирующие гормоныПДА –пептидил-дипептидаза АПОМК –проопиомеланокортинПХМБ –п-хлормеркурийбензоатПХМФС – п-хлормеркурийфенилсульфонатСТГ –соматотропный гормонТ-3–трийодтиронинТ-4–тироксинТТГ –тиреотропный гормонТХУ –трихлоруксусная кислотаФМСФ –фенилметилсульфонилфторид5ФМСФ-КП –фенилметилсульфонилфторид-ингибируемаякарбоксипептидазаЭДТА –BE–этилендиаминтетрауксусная кислотаизбыток буферных оснований кровиBDNF –нейротрофический фактор мозгаCANP –кальций-активируемая нейтральная протеиназаCNTF –цилиарный нейротрофический факторDBI –ингибиторы связывания диазепамаDSIP –дельта-сон индуцирующий пептидMec –метилкумаридNEP –нейтральная эндопептидаза 24.11PC–прогормонконвертазаPTP –тиоловая прогормонконвертазаTGF –трансформирующий фактор ростаIGF –инсулинподобный фактор ростаEGF –эпителиальный фактор роста6ВВЕДЕНИЕИзучениемеханизмовканцерогенезапозволитзначительноусовершенствовать диагностику злокачественных заболеваний и снизитьсмертность от рака путем повышения эффективности лечения.
К настоящемувремени имеется достаточно большое количество экспериментальных работ,раскрывающихрольрегуляторныхпептидовибелковвразвитиизлокачественных новообразований в организме человека [68, 288, 304].Описано участие ростовых факторов в процессе роста и дифференцировкиопухолевых клеток [4, 44, 303], участие пептидных и белковых гормонов вперестройке метаболизма [157], участие цитокинов и иммуномодулирующихпептидов в регуляции функции иммунной системы при развитии опухоли[136].
Тем не менее, остаются вопросы о механизмах роста концентрацийактивных форм пептидов при развитии злокачественных новообразований. Врядеработпоказанопредшественникиувеличениепептидныхэкспрессиимолекул[280],генов,однакокодирующихконцентрациябиоактивных форм пептидов зависит не столько от работы генома, сколькоот активности ферментов их обмена и модификации [296].
Интерес кизучению активности протеолитических ферментов в злокачественных идоброкачественных новообразованиях вызван их комплексным участием впроцессах канцерогенеза путём процессинга, модификации или инактивациирегуляторных пептидов и ростовых факторов, вовлеченных в этиологию ипатогенеззлокачественныхновообразований[208].Предполагаетсяисключительно высокая роль пептидгидролаз в инвазии опухолевых клеток[304]. Тем не менее, значение пептидгидролаз в механизме канцерогенеза недо конца выяснено. Большая часть исследований выполнена на лабораторныхживотных[22].исследованиеВролисвязисвышесказанным,пептидгидролазновообразований человека.вактуальнымразвитииявляетсязлокачественных7Цель исследования – исследование роли пептидгидролаз в развитиизлокачественных новообразований на основании изучения закономерностейизменения активности ферментов обмена регуляторных пептидов – кислыхпротеаз, катепсина D, карбоксипептидазы Е (КПЕ), ФМСФ-ингибируемойкарбоксипептидазы(ФМСФ-КП),пептидил-дипептидазыА(ПДА)илейцинаминопептидазы (ЛАП) в опухолях молочной железы, желудка,кишечника, почек, печени и легких человека.Задачи исследования:1.Изучитьактивностидоброкачественныхпептидгидролазновообразованияхвздоровыхмолочнойжелезы,тканяхижелудка,кишечника, почек, печени, легких человека;2.Изучитьактивностипептидгидролазвзлокачественныхновообразованиях молочной железы, желудка, кишечника, почек, печени,легких человека;3.Провести корреляционный анализ полученных результатов длякомплексной оценки участия пептидгидролаз в развитии злокачественныхновообразований.Научная новизна работыВпервые изучено распределение активности ФМСФ-КП в тканяхчеловека.
Показано повышение активности протеаз в доброкачественныхопухолях, которое приводит к утрате тканеспецифического характерараспределения активности ферментов, характерного для здоровых тканей.Впервые продемонстрирован рост активности комплекса пептидгидролаз взлокачественныхновообразованияхразличныхорганов.Установленозначительное, более чем на порядок, повышение активности ферментовпроцессинга пептидов – КПЕ и ФМСФ-КП в кишечнике, желудке, молочнойжелезеипочкахчеловека.Наоснованииданныхобизменениитканеспецифического характера распределения, высоком росте активностей и8усилении корреляционных связей катепсина D, КПE, ФМСФ-КП сделанвывод о важности вклада протеолитических процессов, катализируемыхэтими ферментами, в развитие злокачественных новообразований.Теоретическая и практическая значимостьРезультатыработызначительнорасширяютфундаментальныепредставления о роли пептидгидролаз в канцерогенезе.
Практическийинтерес представляют собой данные о существенном росте активностикислыхпротеаз,катепсинаD,КПЕ,ФМСФ-КП,ПДА,ЛАПвзлокачественных новообразованиях, что даёт возможность разработкиметодовдиагностикиингибиторовиферментов.леченияНасиспользованиемоснованииспецифическихполученныхврамкахпредставленного исследования данных показана возможность применениябиохимических тестов по определению активности пептидгидролаз вдиагностике.Полученные сведения об активности протеолитических ферментов взлокачественных новообразованиях молочной железы, желудка, кишечника ипочек человека включены в программу спецкурсов «Химия и биохимияпротеолитических ферментов», «Биохимия и молекулярная биология»,«Энзимология», «Современные методы в биохимии» и специальногопрактикума по биохимии для бакалавров и магистров по профилюподготовки «Биохимия» в Пензенском государственном университете.Методология и методы диссертационного исследованияПри выполнении диссертационной работы были проанализированыопухолевые новообразования и здоровые ткани 160 человек, извлеченные входе хирургических операций в ГБУЗ Пензенский областной онкологическийдиспансер.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
