Диссертация (1154746), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Активность данного фермента во всехтканях в 2-3 раза выше, чем активность КПЕ, которая присутствует всоматических тканях в следовых количествах. Подобное распределениесходно с таковым у других млекопитающих [35, 31, 23], что подтверждаетпредположение о более широких функциях ФМСФ-КП, принимающейучастие, в отличие от КПЕ, не только в процессинге регуляторных пептидови белков, но и в обмене и деградации других белковых молекул.3.1.
Изучение активности кислых протеазРезультаты исследования показали увеличение активности кислыхпротеаз в злокачественных новообразованиях молочной железы (инвазивнаяпротоковая карцинома) на 35 %, желудка (аденокарцинома) на 115 %, почек(аденокарцинома) на 140%, печени(аденокарцинома)%на30по(аденокарцинома)сравнениюновообразованиями в этих же органах (рис. 1).силегкихдоброкачественными590,80,60,40,201,52*+0,50121,5*10,50121,5*10,50132Почки2,53++21,5*10,5013Легкие++23Молочная железа1Желудок2,53нмоль/мин на мг белканмоль/мин на мг белканмоль/мин на мг белка*11нмоль/мин на мг белка3Кишечникнмоль/мин на мг белканмоль/мин на мг белка1,223Печень1,5+*10,50123Рис.
1. Активность кислых протеаз (нмоль/(мин*мг белка) вздоровых тканях (n=11) и доброкачественных и злокачественныхновообразованиях кишечника (n=12 и 14 соответственно), желудка (n=16и 16), молочной железы (n=12 и 15),почек (n=12 и 11), легких (n=11 и 11)ипечени (n=11 и 13) человека.1 – здоровые ткани, 2 – доброкачественные новообразования, 3 –злокачественные новообразования, M±m, *** – Р < 0,001 по сравнению создоровыми тканями,+ – Р < 0,01, ++ – Р < 0,001 по сравнению сдоброкачественными опухолями.60Акишечникжелудок18%17%молочная железа18%15%11%21%почкилегкиепеченьБ16%13% 10%17%13%16%17%17%17%27%25%12%Рис.
2. Активность кислых протеаз в здоровых тканях (А),доброкачественных (Б) и злокачественных (В) новообразованиях61Так,значениеактивностикислыхпротеазвзлокачественныхновообразованиях желудка и почек в 3 раза превышает активность кислыхпротеаз в доброкачественных новообразованиях, а в злокачественныхновообразованиях молочной железы, легких и печени в 1,5 раза.Достоверныхзлокачественныхотличиймеждуновообразованийактивностьюкишечникакислыхипротеазвсоответствующихдоброкачественных новообразований не обнаружено.Длякомплексногоанализахарактераобнаруженныхизмененийактивности кислых протеаз первичный экспериментальный материал быподвергнут дисперсионному анализу (таблица 1).Таблица 1. Дисперсионный анализ активности кислых протеазвздоровых тканях и новообразованиях органов человека (значенияотношения Фишера Fф).*Исследуемый органFфкишечник12,4**желудок11,83**молочная железа18,05***почки11,67**легкие13,13**печень13,72**p<0,01, **p<0,00162Таблица 2.
Постдисперсионный анализ Шеффе активности кислыхпротеазвздоровыхтканяхиновообразованияхоргановчеловека(величина критерия Шеффе Fш в порядке сравнения Ньюмена-Кейлса).Исследуемый орган*Fш2-13-23-1кишечник14,9***2,516,9***желудок14,4***18,1***20,03***молочная железа17,17***6,21*18,35***почки13,9***14,71***18,03***легкие14,63***7,02*16,2***печень13,95***9,14**16,91***p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001Результаты дисперсионного анализа показывают чрезвычайно высокиеотличия с высокой степенью достоверностью между активностью кислыхпротеаз злокачественных новообразований и доброкачественных опухолей,что дает возможность применять определение активности данных ферментовв тканях как диагностическую процедуру.3.2. Изучение активности катепсина DУстановленновообразованияхростактивностивсехкатепсинаисследованныхDоргановвзлокачественныхпосравнениюсдоброкачественными опухолями (рис.
3). При этом значение активностикатепсина D в злокачественных новообразованиях желудка и почек посравнениюсактивностьюкатепсинаDвдоброкачественныхновообразованиях была выше в 6 раз, в злокачественных новообразованияхкишечника в 2 раза, а в злокачественных новообразованиях легких, печени имолочной железы в 3 раза.630,6*0,40,20нмоль/мин на мг белка11,5Молочная железа+021,5+1*0,50121,51*0,50132Почки2,53+21,51*0,503Легкие+23*0,5Желудок2,5311нмоль/мин на мг белка2нмоль/мин на мг белка0,8+3нмоль/мин на мг белкаКишечник1нмоль/мин на мг белканмоль/мин на мг белка12Печень1,53+1*0,50123Рис. 3. Активность катепсина D в здоровых тканях (n = 11),доброкачественных и злокачественных новообразованиях кишечника (n= 12 и 14 соответственно), желудка (n = 16 и 16 соответственно),молочной железы (n = 12 и 15 соответственно), почек (n = 12 и 11соответственно), легких (n = 11 и 11 соответственно) и печени (n = 11 и 13соответственно) человека.1 – здоровые ткани, 2 – доброкачественные новообразования, 3 –злокачественные новообразования, M ± m; * – р < 0,001 по сравнению создоровыми тканями, + – р < 0,001 по сравнению с доброкачественнымиопухолями.64Акишечникжелудок22%молочная железа20%почки13%19%9%легкие17%печеньБ17%17%13%16%17%Рис.14% 8%16%4.26%17%Активность26%катепсинаDв13%здоровыхтканяхдоброкачественных (Б) и злокачественных (В) новообразованиях.(А),65Результаты нашего исследования показывают, что активность кислыхпротеаз в злокачественных новообразованиях желудка и кишечника былавыше, чем в клетках доброкачественных опухолей.
Активность катепсина Dбыла значительно выше во всех исследуемых группах злокачественныхновообразований, чем у контрольной группы.ВовсехдоброкачественныхопухоляхактивностькатепсинаDсоставляла не более 50% от активности кислых протеаз, тогда как в раковыхопухолях всех исследованных тканей активность катепсина D составляла от82 до 100 % от общей активности кислых протеаз, что указывает напреобладающую роль данного фермента среди ферментов со сходнымифизико-химическимисвойствамивпроцессахзлокачественногоновообразования (таблицы 3-5).Результатыдисперсионногоанализа активности катепсина D висследуемых образцах представлены в таблицах 6-7.Таблица 3.
Соотношение активности катепсина D и общейактивности кислых протеаз в здоровых тканях.ЗдоровыетканиКишечникЖелудокМолочная железаПочкиЛегкиеПеченьАктивностькислых протеаз0,50,530,650,340,440,55Активностькатепсина D0,230,210,190,10,150,25Процентноеотношениекатепсина D ккислым протеазам46%39%29%29%34%45%Таблица 4.
Соотношение активности катепсина D и общейактивности кислых протеаз в доброкачественных новообразованиях.ДоброкачественныеновообразованияКишечникЖелудокМолочная железаПочкиЛегкиеПеченьАктивностькислых протеаз0,850,830,880,850,810,82Активностькатепсина D0,350,350,350,350,350,35Процентноеотношениекатепсина D ккислым протеазам41%42%39%41%43%42%66Таблица 5.
Соотношение активности катепсина D и общейактивности кислых протеаз в злокачественных новообразованиях.ЗлокачественныеновообразованияАктивностькислых протеазКишечникЖелудокМолочная железаПочкиЛегкиеПечень0,912,31,152,41,21,2Активностькатепсина D0,752,31,152,351,191,18Процентноеотношениекатепсина D ккислым протеазам82%100%100%97%99%98%Таблица 3. Дисперсионный анализ активности катепсина D вздоровых тканях и новообразованиях органов человека(значенияотношения Фишера Fф).*Исследуемый органFфкишечникжелудокмолочная железапочкилегкиепечень14,4**15,0**16,3**14,36*13,9**14,05*p<0,01, ** p<0,001Таблица 4. Постдисперсионный анализ Шеффеактивностикатепсина D в здоровых тканях и новообразованиях органов человека(величина критерия Шеффе Fш в порядке сравнения Ньюмена-Кейлса).Исследуемый органкишечникжелудокмолочная железапочкилегкиепечень*p<0,0012-115,2*14,7*15,15*13,8*15,5*14,0*Fш3-213,9*15,25*14,2*15,05*16,7*18,1*3-119,9*22,1*20,05*19,09*19,2*20,9*673.3.
Изучение активности карбоксипептидазы ЕРезультаты исследования (рис. 5) показали значительное увеличениеактивности КПЕ в злокачественных новообразованиях молочной железы,кишечника, желудка и почек по сравнению с доброкачественныминовообразованиями в этих же органах.Значение активностиКПЕвклеткахнизкодифференцированнойаденокарциномы желудка более чем в 50 раз превышает активность КПЕ вдоброкачественных новообразованиях желудка, почек – в 40 раз, молочнойжелезы и кишечника – более, чем в 10 раз.
В злокачественныхновообразованиях печени и легких активность карбоксипептидазы Е неотличаласьотзначений,наблюдаемыхвдоброкачественныхновообразованиях.Дисперсионный анализ активности карбоксипептидазы Е в исследуемыхобразцах показал высокие отличия между активностью исследуемогофермента в злокачественных новообразованиях и доброкачественныхопухолях (таблицы 8-9).+0,15*0,10,050нмоль/мин на мг белка10,22*0,0502**0,1023Почки+0,40,30,2*0,10123Печень0,1*0,080,060,060,040,040,020,020Рис.0,23Легкие0,080,31нмоль/мин на мг белканмоль/мин на мг белка1+0,40,5+0,1Желудок0,53Молочная железа0,15нмоль/мин на мг белкаКишечникнмоль/мин на мг белканмоль/мин на мг белка68125.Активность3КПЕ01вздоровых2тканях3(n=11),доброкачественных и злокачественных новообразованиях кишечника (n= 12 и 14 соответственно), желудка (n = 16 и 16 соответственно),молочной железы (n = 12 и 15 соответственно), почек (n = 12 и 11соответственно), легких (n = 11 и 11 соответственно) и печени (n = 11 и 13соответственно) человека.1 – здоровые ткани, 2 – доброкачественные новообразования, 3 –злокачественные новообразования, M ± m; * – р < 0,001 по сравнению создоровыми тканями, + – р < 0,001 по сравнению с доброкачественнымиопухолями.69Таблица 8.
Дисперсионный анализ активности карбоксипептидазы Ев здоровых тканях и новообразованиях органов человека (значенияотношения Фишера Fф).*Исследуемый органFфкишечник15,9**желудок21,3**молочная железа18,35**почки24,15*легкие10,55*печень8,7*p<0,01, ** p<0,001Таблица 9. Постдисперсионный анализ Шеффе активности КП Е вздоровых тканях и новообразованиях органов человека (величинакритерия Шеффе Fш в порядке сравнения Ньюмена-Кейлса).Исследуемый орган*Fш2-13-23-1кишечник14,8*14,4*17,5*желудок16,45*19,1*23,0*молочная железа16,2*18,7*19,4*почки19,0*24,5*24,2*легкие13,5*1,914,1*печень14,0*2,714,4*p<0,00170Акишечникжелудок14%15%молочная железа14%19%14%почкилегкие24%печеньБ17%5%5% 9%16%17%16%17%17%35%34%12%Рис. 6. Активность карбоксипептидазы Е в здоровых тканях (А),доброкачественных (Б) и злокачественных (В) новообразованиях713.4.Изучениеактивностифенилметилсульфонилфторид-ингибируемой карбоксипептидазыФМСФ-КП в опухолевой ткани человека показывает схожее с КПЕКишечник ++1,51*0нмоль/мин на мг белка11,51*020,5*0,40,30,20,1012132Почки0,63++*0,40,203Легкие++*0,8++0,5Желудок765432103Молочная железа1нмоль/мин на мг белка2нмоль/мин на мг белка0,51нмоль/мин на мг белканмоль/мин на мг белка2нмоль/мин на мг белкараспределение активности (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
