Диссертация (1154712), страница 7
Текст из файла (страница 7)
1).В первой группе проводилась имплантация сетчатых эндопротезов вмягкие ткани поясничной области для изучения влияния материалаэндопротеза на реакцию мягких тканей, формирование соединительнойткани, протективную активность В-системы иммунитета.Во второй группе проводилось моделирование операции паховойгерниопластики с целью изучения влияния сетчатых эндопротезов на тканиорганов репродуктивной системы крыс-самцов и протективную активность Всистемы иммунитета.Третья группа являлась контрольной. Оперативные вмешательства наживотных не выполнялись.
Изучалась протективная активность В-системыиммунитета.Проводилосьморфологическоеиморфометрическоеисследование тканей репродуктивных органов.Во время исследования выполнялись заборы крови для проведенияиммунологического анализа. Забирали образцы тканей для проведенияморфологического,морфометрическогоисследований.37ииммуногистохимическогоТаблица 1. Распределение животных по группамГруппаживотныхIIIОбщееколичествоживотныхТип операцииИмплантациясетчатогоэндопротезав мягкие тканипоясничной областиМоделированиеоперациипаховойгерниопластикиIIIКоличество животных в подгруппахППТПП402020562828Контрольная10Эксперименты проведены в виварии института биоорганической химииимени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российскойакадемии наук (ИБХ РАН).
Исследованиевыполнялось с разрешенияЭтического комитета МИ РУДН в полном соответствии с законодательствомРФ (“Правила гуманного обращения с“Деонтологияпринципами,медико-биологическогоустановленнымилабораторными животными”,эксперимента”)Европейскойиконвенциейэтическимипозащитепозвоночных животных, используемых для экспериментальных и другихнаучных целей (принятой в Страсбурге 18.03.1986 и подтвержденной вСтрасбурге15.06.2006).Заборкрови,анестезиологическоепособие,оперативное вмешательство, послеоперационное ведение и эвтаназиюосуществляли по стандартным методикам.Анестезию проводили путем внутримышечного введения в бедро смесирастворов рометара 2% (ксилозина гидрохлорид) и золетила 100 из расчета 10мг/кг рометара и 20 мг/кг золетила.
Во всех случаях одной инъекциипрепаратов было достаточно для нахождения животного в состоянии наркозана протяжении всего времени выполнения оперативного вмешательства.Животное укладывалось на теплоизолирующую подстилку брюхомвниз. Дополнительных методов фиксации для проведения оперативноговмешательства не требовалось. С операционного поля методом ощипыванияудаляли шерсть с подшерстком, двукратно обрабатывали его антисептическим38раствором «АХД 2000 экспресс» и ограничивали стерильными марлевымисалфетками. Производили оперативное вмешательство.Наблюдение за животными в послеоперационном периоде проводилосьежедневно на протяжении всего срока их пребывания в виварии. В течение 40минут после операции у подопытных крыс появлялась двигательнаяактивность, отмечались некоторые нарушения координации.
К первым суткампосле операции животные активно передвигались в клетке, пили воду иупотребляли пищу. Наблюдалась удовлетворительная реакция на звук.Отмечалисьследыпослеоперационнаянормальнойранадефекации.заживалаВовсехпервичнымнаблюденияхнатяжением.Послеоперационных осложнений не наблюдалось.В сроки, установленные экспериментом, производились заборы крови издорсальной вены хвоста. Кровь забиралась в объеме 0.5 мл.Эвтаназияживотныхосуществляласьпередозировкойнаркоза.Производилось изъятие тканей.
Полученные фрагменты тканей фиксировалив 10% растворе нейтрального формалина.В первой группе 40 белых крыс линии Вистар были разделены на дверавныеподгруппыпо20животных.Впервойимплантировалиполипропиленовый сетчатый эндопротез (ПП), во второй – титанизированныйполипропиленовый сетчатый эндопротез (ТПП).Методика операции имплантации сетчатого эндопротеза в мягкиеткани (рис.1). В поясничной области по средней линии производилсялинейный разрез кожи длиной до 3 см. Тупым путем кожа и подкожнаяклетчатка отслаивались от длинной поясничной мышцы,дорсальнойкаудальной зубчатой мышцы, частично от внутренней косой мышцы животав сторону от позвоночного столба на протяжении 2 см.
В образовавшийся подподкожной клетчаткой карман помещался сетчатый эндопротез размерами1.5х1.5 см. Эндопротез фиксировался к подлежащим мышцам одним узловымшвом полипропиленовой нитью 6/0. Кожная рана ушивалась узловыми швамилавсановой нитью 2/0.39Рис.1 Имплантация сетчатого эндопротеза в мягкие ткани1.Сетчатый эндопротез 2. КожаЗаборы крови для проведения иммунологического исследованияпроизводили перед оперативным вмешательством и на 7,14,30, 90 сутки послеоперации.Забортканейдляпроведенияморфологическогоииммуногистохимического исследований производили на 7,14,30 и 90 суткипослеоперационного периода.Во второй группе 56 белых беспородных крыс линии Вистар былиразделены на две равные подгруппы по 28 животных. В обоих подгруппахпроводили моделирование операции паховой герниопластики – в первойподгруппе ПП сетчатым эндопротезом, во второй подгруппе ТПП сетчатымэндопротезом.Методика моделирования операции паховой герниопластики (рис.2).Параллельно срединной линии брюха, на 0.5 см латеральнее от отверстияпрепуциума слева производился линейный разрез кожи длиной до 2 см.Рассекались апоневрозы наружной косой, внутренней косой и поперечноймышц живота.
В рану комплексом выводился семенник, придаток семенника,семявыносящий проток. Фиксирующая семявыносящий проток висцеральная40пластина влагалищной оболочки рассекалась на протяжении 1,5 см. Насетчатый эндопротез размерами 0.5 х 0.7 см укладывался семявыносящийпроток. Концы эндопротеза сводились и фиксировались между собойполипропиленовойнитью3.0,полностьюукрываятакимобразомсемявыносящий проток. Комплекс органов погружался в брюшную полость.Кожная рана ушивалась узловыми швами лавсановой нитью 2.0.Рис.2.
Моделирование операции паховой герниопластики1. Сетчатый эндопротез 2. Семявыносящий проток 3. Придаток семенника4. СеменникЗаборы крови для проведения иммунологического исследованияпроизводили перед оперативным вмешательством и на 7,14,30,90 сутки послеоперации. Забор тканей для проведения морфометрического исследованияпроизводили на 7,14,30 и 90 сутки послеоперационного периода.41Таблица 2. Характеристика материалаГруппаживотныхГруппа IГруппа IIКоличество заборовкровиППТПП20202020151510105528282828212114147750СрокнаблюденияДо операции7143090До операции7143090Группа IIIКоличество заборовтканейППТПП00555555550077777777102.2 Методы исследованияМорфологическое и иммуногистохимическое исследования мягкихтканей выполнены на базе отделения общей патологии Центрального научноисследовательского института стоматологии и челюстно-лицевой хирургиипод руководством д.м.н., профессора, заведующего кафедрой патологическойанатомии РУДН И.И.
Бабиченко.Морфологическоеиморфометрическоеисследованиятканейрепродуктивных органов выполнены на базе патологоанатомическогоотделения ЦКБ Российской академии наук под руководством к.м.н., доцентакафедры патологической анатомии и клинической патологической анатомииРоссийскогонациональногонаучно-исследовательскогомедицинскогоуниверситета им. Н.И. Пирогова Д.С. Мельченко.Иммунологическое исследование выполнено на базе отдела пептиднобелковыхтехнологийИнститутабиоорганическойхимииРАН,подруководством к.х.н., старшего научного сотрудника Гевондян Н.М.2.2.1 Морфологический и морфометрический методыМорфологические и морфометрическиеисследования проводили сцелью изучения реакции мягких тканей, оценки изменения состояния42репродуктивных органов после выполненных оперативных вмешательств. Впервой группе иссекали лоскут мягких тканей поясничной области с сетчатымэндопротезом, во второй - производили забор органов репродуктивнойсистемы крыс самцов (семенник, придаток семенника, семявыносящий протокс фиксированным на нем эндопротезом).
В контрольной группе производилизабор органов репродуктивной системы (семенник, придаток семенника,семявыносящий проток) крыс- самцов у которых оперативные вмешательстване выполнялись.Фиксация тканей осуществлялась в 10% растворе нейтральногоформалина в течение 14 дней. Для дальнейшего проведения гистологическогоисследования иссекались кусочки тканей. В первой группе через образцы ссетчатыми эндопротезами проводили срезы, перпендикулярные плоскостиобразца. Во второй и контрольной группах через органы репродуктивнойсистемы проводили три параллельных среза перпендикулярно оси органачерез центральную часть семенника, центральную часть придатка семенника,семявыносящий проток.Послегистологическойпроводкиматериалавгистопроцессорекарусельного типа Leica TP1020 его заливали парафином.
Изготовлениепарафиновых блоков осуществляли при помощи заливочного модуля LeicaEG1160. Срезы, изготовленные при помощи ротационного микротома LeicaRM2245, окрашивали гематоксилином и эозином, а также комбинированнойокраской по Ван Гизону. Далее срезы помещали под покровное стекло сприменением среды “Bio-Mount”.Полученные гистологические препараты исследовали под световымбинокулярным микроскопом Leica DM2500.Для выявления реакции тканей органов репродуктивной системыпроизводили морфометрию тканей в полученных срезах.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
