Диссертация (1154377), страница 17
Текст из файла (страница 17)
Динамическуювязкость рассчитывали (η, мПа·с) по формуле:119 = (1 ‒ 2 )·где:,k — постоянная вискозиметра, мм2/с2; ρ1— плотность шарика, г/см3; ρ2 —плотностьиспытуемойжидкости,г/см3,полученнаяумножением20относительной плотности (20) на 0,9982; t — среднее время падения шарикамежду крайними метками, в секундах.2.16.
БИОЛОГИЧЕСКИЕМЕТОДЫИССЛЕДОВАНИЯ.МЕТОДSPIROTOX«Оптимальнымлабораторииметодомявляетсяоценкиприменениебиотоксичностиметоданавосновехимическойисследованияиндивидуальной и комбинированной биологической активности клеточногобиосенсора — инфузории Spirostomum ambiguum, свободноживущей в«объемной» воде (Spirotox-test)» [255,256] (табл. 28, рис. 26).Таблица 28. Биологическая систематикаSpirostomum ambiguumНадцарствоEukaryotaЦарствоMetazoaТипProtozoaПодтипCiliophoraКлассCiliataПодклассEuciliataОтрядHeterotrichaСемействоSpirostomidaeРодSpirostomumВидSpirostomum ambiguum MüllerИнфузория Spirostomum ambiguum имеет лентовидную, уплощеннуюформутела,около2-3ммдлиной(рис.35).Находясьвсреде120обитания/питательной среде инфузории высоко подвижны, совершаютсвободноепередвижениепообъемусреды,чтохарактеризуетсяспецифичным чередованием сжатия и растяжения клетки.Рисунок 26. Внешний вид S.ambiguum.Будучи потревоженным механическим или химическим воздействием,клетка сокращается, останавливается или меняет траекторию движения.Нами обнаружено образование в процессе лиганд-индуцируемой гибели S.ambiguum промежуточного состояния с «изменением морфометрическиххарактеристик,оптическихсвойств,зернистостицитоплазмы,эквивалентного комплексу фермента с субстратами/продуктами реакции.Особенностью этой схемы является тот факт, что клеточные переходывызываются лигандами самого различного происхождения, как заведомотоксичными соединениями» [257], так и «природными метаболитами» [258].Гибель клетки фиксировали по разрыву мембраны с выходомсодержимого протоплазмы наружу или в результате полного обездвиживанияс отсутствием сократительной реакции на раздражение клетки.
Дляхарактеристик токсичности/биологической активности водных образцованализировали диаграммы концентрация‒время жизни («доза-ответ») играфикизависимостивременижизниинфузорииS.ambiguumоттемпературы. «Полученные результаты позволили получить параметрэнергии активации процесса клеточного перехода или гибели, не зависящегоот состояния культуры клеток и находящегося во взаимно-однозначномсоответствии с химическим составом исследуемого водного образца. Видтемпературных зависимостей по сохранению или нарушению линейности варрениусовских координатах может также указывать на неаддитивные121эффекты (сигнергизма или антагонизма) при комбинированном действиимногокомпонентных смеси загрязняющих веществ» [255].Установка метода Spirotox включает следующие блоки: 5-луночнуютермостатируемую ячейку; термостат ‒производитель Lauda AlphaA 6;бинокуляр МБС-10; лампа (~ 10 Вт) дневного света для освещения полянаблюдения.Методика. В 5-луночную термостатируемую ячейку вносили аликвотуанализируемого образца V~300 мкл и 3-5 особей тест-культуры, используяпипетку с диаметром носика более 1 мм для избежания травматизмаинфузорий.
За время жизни клетки (tL) принимали интервал от моментаподсадки клеток в иследуемый раствор до их гибели, как среднее из 4-7измерений.2.17. АТОМНО-АБСОРБЦИОННАЯ СПЕКТРОМЕТРИЯ (ААС)В связи с тенденцией к усовершенствованию и гармонизациифармакопей в конце 2014 г. членами ICH (The International Conference ofgarmonization) был принят документ «Guideline for elemental impurities»,регламентирующий процедуру определения примесных элементов в ЛС. Всвязи с рекомендацией ICH основными инструментальными методамидолжны выступать: атомно-эмиссионная спектроскопия с индуктивносвязанной плазмой(АЭС-ИСП), атомно-абсорбционнаяспектроскопия(ААС), масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой (МС‒ИСП) идр.
[259].Определение содержания микроэлементов в исследуемых водныхобразцахпроводили,используя«методААСсэлектротермическойатомизацией и зеемановской коррекцией фона по протоколу фирмы "Varian"и принимая участие в международных интерколибрациях с Лабораторией поизучению морской природной среды (MESL IAEA MEL, Монако)» [260,261].122В таблице 9 приведен состав референс-образца для элементного анализа,полученный как результат успешных интеркалибраций в системе МАГАТЭ(Международное агентство по атомной энергии).Таблица 29.
Содержание элементов в референс-образце IAEA-405.1232.18. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВДля численного и графического анализа экспериментальных результатовсприменениемпервичныхивторичныхметодовматематико-статистического анализастатистической обработки полученных результатовиспользовали пакет программ фирмы Origin Lab Corporation.2.18.1. Представление результатов анализаНами проведена следующая последовательность обработки результатовпрямых измерений в условиях повторяемости и воспроизводимости (табл.30)[262].Таблица 30.
Аналитические характеристики метода.МетрологическийпараметрСреднеезначениеопределяемой величины,Стандартное отклонение,SФормула для расчета124Относительноестандартное отклонение,RSDПолуширинудоверительного интервалаОтносительная(процентная) ошибкасреднего результата,Вработерезультатыпредставленныхметодикоцененыпрецизионности (повторяемости) и лабораторной воспроизводимости.по125ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕСовершенствованиесистемыподтверждениясоответствиякачествалекарственных средств гетерогенной и гомогенной природы нормативнойдокументации является целью детального исследования свойств дисперсныхсистем.Актуальныепроблемыфармацевтическогосекторароссийскойэкономики ‒ низкий уровень инноваций и технологий ‒ способствуют развитиюинновационной сферы научно-технологического сектора для разработки,производства и контроля качества фармацевтической продукции [263].
Взадачи работы входило создание, описание и метрологические характеристикиизмерительного комплекса для обеспечения единства измерений дисперсныхсвойств жидких сред в фармации методами лазерного светорассеяния.3.1. МЕТРОЛОГИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ МЕТОДОВ ЛАЗЕРНОГОСВЕТОРАССЕЯНИЯНоменклатура лекарственных средств отечественных и зарубежныхпроизводителейширокопредставленагетерогеннымилекарственнымисредствами − высокодисперсными порошками, суспензиями, эмульсиями [264].Важнейшими характеристиками дисперсности являются размер, форма,концентрация, функция распределения частиц [265]. При стандартизации ипроизводстве жидких лекарственных средств применяют различные методыпрямогоикосвенногогранулометрическогоанализа:оптическуюмикроскопию, седиментационный и ситовой анализ, нефелометрию (см.
Главу1.1.4). Однако трудоемкость и длительность, малая выборка (микроскопия),значительное количество образца (ситовой метод) ограничивают их массовоеприменение в контроле качества готовой фармацевтической продукциивотличие от методов лазерного светорассеяния, используемых, в том числе, вРоссийском Государственном национальном метрологическом комплексе126определения параметров нано- и микрочастиц для обеспечения единства иточности измерений [266, 267, 268 ].В качестве приборов нового поколения выступают лазерные измерителидисперсности,основанныекакнастатическом,такидинамическомсветорассеянии, и применяемые нами для исследования жидких лекарственныхсредств гомогенной и гетерогенной природы [269].
Для осуществлениягармонизации требований Европейской фармакопеи, Фармакопеи США иЯпонской фармакопеи к качеству ЛС разработана и впервые введена в ГФ РФXII ОФС «Определение распределения частиц по размеру методом лазернойдифракциисвета»экспериментальной[270].работы,Этосталовозможнымпроводимойнаоснованиисотрудникамикафедрыфармацевтической и токсикологической химии РУДН, по применению методалазерной дифракции света для гранулометрического анализа растворов ЛС,аэрозолей и порошков [4].Разработка ЛС с заданными свойствами ‒ относится к наиболее значимымнаправлениям развития современной фармации, решаемым, в том числе, спомощьюнанотехнологий.Актуальнойзадачейстановитсяразвитиеметрологии измерительных методов в нано−, микро− масштабах и созданиегосударственных эталонов физических величин для получения выверенныхрезультатов [271, 272, 273].Наше участие в Государственной поверочной схемеизмерения параметров дисперсности продемонстрировано в следующих этапах:разработкасобственногоизмерителядисперсностипараметроввзвесей(ИДЛ−1), испытание собственного портативного счетчика аэрозольных частиц(А−2), создании рабочих эталонов порошкообразных материалов и эталоноввзвесей частиц (в схеме выделено закрашенными квадратами) (рис.
27).Рассматриваемая схема объединяет метрологические задачи в обеспеченииединства измерений, включающие установление единиц физических величин,государственные эталоны, методы и средства измерения и контроля, разработкуметодов передачи размеров единиц от эталонов рабочим средствам измерений.127Рабочие средстваизмеренийРабочие эталоныГосударственныеэталоныРисунок 27.
Государственная поверочная схема измерения параметров дисперсности и метрологического обеспеченияаналитических методов (закрашенные квадраты демонстрируют собственное участие в системе).Государственный первичный эталон единиц дисперсныхпараметров аэрозолей, взвесей порошкообразныхматериаловМетод прямыхизмеренийНепосредственноесличениеЭталонные взвесичастиц в жидкостяхЭталонные наборыпорошкообразныхматериаловСличение спомощьюкомпаратораМетодпрямыхизмеренийГенераторы частицаэрозолейГосударственный специальный эталон единицы массовойконцентрацииСчётчик частиц ивзвесей (А-2)Метод косвенныхизмеренийЭталонные счетчикичастиц аэрозолей ивзвесейЭталонные измерителипараметров аэрозолей,взвесей ипорошкообразныхматериаловНепосредственноесличениеЭталонныерадиоизотопныеизмерители массовойконцентрацииаэрозолейНепосредственное сличениеИзмерительдисперсныхпараметров взвесей(ИДЛ-1)ИзмерителидисперсныхпараметровпорошковИзмерителипараметровмутности128Таким образом, современные научные подходы к определению характеристикнано‒ и микросистем требуют разработки единых стандартов и методов дляунификации выполняемых исследований в области стандартизации дисперсныхсистем [274, 275].3.1.1.
Измерение дисперсных параметров порошкообразных материалов ивзвесей частиц в жидкостяхВ настоящем разделе описаны способы определения значений измеряемыхвеличин ‒ размера (диаметра) частиц, концентрации и функции распределенияпо размеру (размерные спектры).дисперсныхпараметровГосударственный эталонаэрозолей,взвесейи«единицпорошкообразныхматериалов» использует оптические методы для определения измеряемыхзначений [276, 278 279, 280].В качестве средства измерения выступает видеоизмеритель дисперсныхпараметров, состоящий из микроскопа, соединенного с видеокамерой икомпьютером.Определение значения размера частиц (эквивалентного диаметра, D)осуществляетсяизмерениемсреднегопроектированногодиаметра,представляющий собой диаметр круга, площадь которого равна площадиизображения проекции частицы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
