Диссертация (1154347), страница 15
Текст из файла (страница 15)
ст.)Стандартные бикарбонаты (SB,ммоль/л)Лактат (ммоль/л)II группа (n=98)7,30-7,35III группа (n=51)7,10–7,3030,0±0,4*32,0±0,6*4,3±0,8*5,4±0,9*50,0±3,9*54,0±5,1*23,5±4,3*25,5±6,2*20,0±0,3*29,0±0,7*4,50±0,05*6,50±0,07*Примечание — *Результаты представлены в виде средних значений (M±m)92Считая хорошо известным, что плазматическая мембрана человека являетсянатриевой мембраной, мы оценивали участие возможных АТФ-аз в сигналстимулируемом плазмамембранном синтезе АТФ (Na+/K+ –АТФ-аза). Повышениеконцентрации Na+ стимулировало синтез АТФ, максимум которого наблюдалсяпри физиологической концентрации Na+ в среде (Рисунок 24).Рисунок 24 — Уровень стимулируемого инсулином синтеза АТФ (∆ АТФ)плазматическими мембранами эритроцитов человека при различныхконцентрациях Na+ в среде у пациентов с компенсированной формой ПКА (1)и декомпенсированной формой ПКА (2)Увеличение уровня синтеза плазмамембранного короткоживущего сигналтрансдуцирующего АТФ у больных c декомпенсированной формой ПКАсвидетельствовало об активности энергозатратного метаболизма эпителиальнойклетки нефрона.933.2.2 Значение агрегатометрии в обосновании патогенеза уролитиазаЗначительнымдостижениемвпониманиипатогенетическихосновкамнеобразования явилось использование метода агрегатометрии, позволяющегомоделировать патологический процесс in vitro.
Современный диагностическийметод дает возможность оценить агрегацию кристаллов в пересыщеннойлитогенными веществами моче.Нами проведена оценка параметров агрегации в группах больных,стратифицированныхпотипунарушенияобменанаоснованиихроматографической индикации литогенных веществ (Таблица 15).Таблица 15 — Соотношение показателей агрегации при различных формахуролитиазаПараметрыагрегацииСкоростьагрегации(3,66±0,31 с)Размерыагрегатовмкм (<1,0)Формы МКБ (n=316)1 группа2 группа3 группа4 группа (n=59), «смешанные формы»(n=78),(n=75),(n=104),оксалатно- мочекисло- оксалатноиндуктор – индуктор – индуктор – фосфатный фосфатный мочекислыйщавелевая фосфорнаямочевая(n=18)(n=27)(n=14)кислотакислотакислота7,42±6,40±4,22±7,94 ±0,087,1±0,070,0850,0754,06 ±0,050,055р <0,01*р <0,01*р <0,01*р <0,5*14,6-19,18,3-11,24,2- 6.816,3-20,110,1-12,36,6- 8,2Времяагрегации(0,65±0,07 с)9,67±0,0810,61±1,334,88±0,618,19±0,7610,21±1,074,88±0,6110,12±0,678,73±0,795,13±0,67рН мочи6,0-6,87,67 - 8,084,2– 5,56,01±0,63щавелеваяк-та8,11±0,09фосфорнаяк-та5,09±0,63мочеваяк-таФазностьпроцессаОднофазнаяагрегацииПримечание — * по сравнению со значениями без индуктораОптимальнымиусловиямидлякристаллизацииДвухфазнаяагрегатовявляютсядопустимые значения кислотности мочи.
Так, для агрегации солей мочевойкислоты необходимы показатели рН мочи до 5,5, диапазон колебаний кислотности94для солей щавелевой кислоты составил 6,0–6,8; для солей фосфорной кислоты —выше 7,0.Отмечено изменение скорости агрегации и размере агрегатов в моче больныхс высоким уровнем литогенных веществ.
При «смешанных формах» отмеченыследующие изменения скорости агрегации: вевеллит-брушит — 4,06±0,05 с,вевеллит-мочевая кислота — 7,1 ±0,07 с, вевеллит-ведделлит — 7,94±0,08 с.При этом размер агрегатов для «смешанных» форм составил: кальцийфосфатный фрагмент — 10,1 – 12,3 мкм, кальций-оксалатный — 16,3 – 20,1 мкм,оксалатно-мочекислый — 6,6–8,2 мкм.Оценивая полученные показатели в ходе агрегатометрии, нами отмеченоналичие двухфазного типа агрегатограмм у больных со «смешанными формами»уролитиаза и однофазной агргеатограммы у больных с мономинеральнымикамнями (Рисунок 25 а, б.)Рисунок 25 а — АгрегатограммаРисунок 25 б — Агрегатограммабольной С.
(и/б №19364)больного К. (и/б №30124)с кальций-оксалатной формойс оксалатно-фосфатной формойуролитиазауролитиазаАнализируя возможности метода агрегатометрии, нами проведена детальнаяоценка основных параметров агрегации с построением приоритетного ряда.Исследуемые показатели расположились следующим образом: размер агрегатов;фазность агрегатограмм; угол α; максимальное время агрегации; угол β; скорость95агрегации.Оценкудиагностическойэффективностиосновныхпараметровагрегатометрии у пациентов с различными формами уролитиаза мы проводили сучетом порядка, определенного в приоритетном ряду (Таблица 16).Таблица 16 — Диагностическая эффективность агрегатометрии при кальций–оксалатной форме уролитиаза (n=78)Основные параметрыагрегацииРазмер агрегатовФазность агрегатограммУгол αМаксимальное времяагрегацииУгол βСкорость агрегацииПоказатели диагностической эффективности (%)ДЧДСДП+ДПДЭ83,450,390,932,880,691,061,191,760,485,881,971,690,154,479,976,266,684,254,573,378,970,555,546,175,063,160,055,570,060,0Достоверно высокий процент ДЧ и ДС зарегистрирован при анализефазности агрегатограмм у больных с кальций–фосфатной формой уролитиаза(87,9% и 75,6% соответственно), размеров агрегатов (76,9% и 60,4%), показателейугла α (75%) и максимального времени агрегации (71% и 74,8%).
ДЭ превалировалав показателях фазности (84,9%), размерах угла α (76%) и величины агрегатов (75%).ДЭ параметров агрегации при уратном уролитиазе представлена в Таблице 17.Таблица 17 — Диагностическая эффективность агрегатометрии при мочекислойформе МКБ (n=104)Основные параметрыагрегацииРазмер агрегатовФазность агрегатограммУгол αМаксимальное времяагрегацииУгол βСкорость агрегацииПоказатели диагностической эффективности (%)ДЧДСДП+ДПДЭ74,075,190,934,272,485,374,891,760,482,674,860,083,750,172,474,055,583,341,669,465,068,162,557,968,464,758,862,663,864,196Обоснованно высокий процент ДЧ и ДС зарегистрирован при анализепоказателей агрегации у больных «смешанными» формами МКБ: размерыагрегатов (>80% и >60% соответственно), максимальное время агрегации (76% и80%), угол α (75,9% и 74,5%), фазность агрегатограмм (77,6% и 52%) и скоростьагрегации (72,4% и 72,8%).
Максимальная ДЭ составила 77% при оценке фазностиагрегатограмм и 75% при анализе размеров агрегатов.При комплексной оценке параметров агрегатометрии было выявлено, чтодиагностическая чувствительность метода (ДЧ) метода составляет 73,5%, адиагностическая предсказуемость (ДП) комплекса параметров 80,7%. При этом ДЧотдельных параметров агрегации составила: для величины агрегатов — 73,3%;величины угла α — 74,6%; фазности агрегатограмм — 85,7%; максимальноговремени агрегации — 74,0%; величины угла β — 65,0%; скорости агрегации —68,4%. ДП положительных результатов для исследуемых параметров имеласледующие процентные соотношения: для величины агрегатов — 91,6%; величиныугла α — 83,3%; фазности агрегатограмм — 92,6%; максимального времениагрегации — 83,2%; величины угла β — 68,4%; скорости агрегации — 65,0%.В заключении раздела следует отметить, что показатели агрегации,полученные в ходе моделирования камнеобразования, индуцированного введениемчистых химических соединений (фосфорнокислый кальций, щавелевая и мочевыекислоты) в концентрациях, установленных при хроматографической индикациилитогенных веществ, наряду с графическими параметрами агрегатограмм,характеризующими фазность патологического процесса, позволяют использоватьметодику агрегатометрии при прогнозировании развития определенных формуролитиаза.
Принимая во внимание чувствительность и предсказуемостьпредложенного метода, а также факт совпадения результатов структурного анализамочевых камней с данными, полученными в ходе моделирования процессовкамнеобразования, представляется оправданным использование агрегатометриипри оценке риска развития литогенеза, установлении типа камнеобразования ипрогнозировании течения клинических форм МКБ.973.2.3 Феномен «кооперативной чувствительности» и его рольв прогнозировании тяжести течения мочекаменной болезниВ научных публикациях последних лет все чаще обсуждается способностьнекоторых микроорганизмов общаться и координировать своё поведение за счётсекреции молекулярных сигналов, проявляя тем самым «чувство кворума»(«quorum sensius») или феномен «кооперативной чувствительности». Возможностьхроматографической индикации сигнальных низкомолекулярных соединений,обеспечивающих «коллективное агрессивное поведение бактерий», добавляетинтерес к изучению этого феномена.
Представителями данных групп соединенийявляются лактоны, хинолоны, короткие пептиды и фурановые эфиры (фуранозилдиэфир бора и др.) [101, 126].Наряду с детальным изучением мочи, нами проведен анализ активаторов«кооперативной чувствительности» в сыворотке крови больных уролитиазом. Сэтойцельюхроматографическиидентифицированыактиваторы,соответствующие следующим классам соединений:•лактоны—бутиролактон,альдонолактоны,пропинолактон,бутаноиллактон и 3-оксододекоиллактон;•хинолоны—этилхинолон,дигидроизохинолон,хинонимины,тетрагидро-изохинолон;•фурановыеэфиры—тетрагидрофуран,2-фуранметанамин,2-фуранметанол, фуракозилдиэфир бора.Для определения специфичности тестов хроматографической индикациисигнальных соединений использованы две группы контроля.Первойгруппойконтролябыличистыебульонныекультурыграмотрицательных бактерий Pseudomonas aeruginosa с титром >107 КОЕ/мл,грамположительных бактерий S.
aureus с титром >107 КОЕ/мл, а также смесьграмположительных и грамотрицательных бактерий с титром каждой культуры всмеси 104 КОЕ/мл (т. е. суммарно более 107 КОЕ/мл) (Таблица 18).98Таблица 18 — Показатели содержания сигнальных соединений в чистых культурахбактерийКонцентрациямикробов,КОЕ/млКонтроль> 107>107P. aeruginosaS. aureusPseudomonasaeruginosa иS. aureusСигнальные соединения (M±m),ммоль/лфурановыелактоныхинолоныэфиры0,115±0,002 0,023±0,003 0,010±0,002Не выявлены0,085±0,0090,038±0,004 0,029±0,0031040,015±0,002Вторым контролем служила кровь больных уролитиазом без выраженныхинфекционныхосложнений(пациентыскомпенсированнойисубкомпенсированной формами ПКА; Таблица 19).Таблица 19 — Показатели содержания сигнальных соединений в крови больныхуролитиазом с компенсированной и субкомпенсированной формами ПКАСигнальные соединения(суммарно)Лактоны, ммоль/лХинолоны, ммоль/лФурановые эфиры, ммоль/лI группа (n=167), M±mII группа (n=98), M±m0,003±0,00020,004±0,0003<0,002<0,0020,004±0,00030,005±0,0004В зависимости от типа оксикислот, образующих лактоны, различают β, γ, δ иε-лактоны.
На основании характеристических ионов лактонов нами был проведенанализ сыворотки крови больных с декомпенсированной формой ПКА(Таблица 20).Индикациялактоновпроводиласьхромато-масс-спектрометрическимметодом, а также методами высокоэффективной жидкостной хроматографии. НаРисунке26представленчувствительности».масс-спектрактиватора«кооперативной99Таблица 20 — Показатели содержания лактонов и их субъединиц в сывороткекрови больных с декомпенсированной формой ПКА (n=51)Лактоны и их субъединицыγ-бутиролактон*3-оксододекоиллактон*Альдонолактоны**Бутаноиллактонβ-пропиолактонАльдоновые кислоты***Значение показателя (M±m), ммоль/л0,008±0,00070,004±0,0005> 0,0020,006±0,00070,008±0,0007> 0,002Примечание:* — субъединицы 3-оксододекоил-лакто-L-гомосерина;** — субъединицы бутаноил-лакто-L-гомосерина;*** — субъединицы альдонолактоновРисунок 26 — Масс-спектр бутиролактона — активатора «кооперативнойчувствительности» из группы лактонов(селективные ионы — массовые числа 28 m/Z, 41 m/Z, 69 m/Z, 97 m/Z)В группе больных с осложненными формами МКБ выявлены хинолоны,группы дигидроизохинолонов, а также субъединицы хинолонов и метаболитыгруппы хинониминов (Таблица 21, Рисунок 27).100Таблица 21 — Показатели содержания хинолонов и их субъединиц в сывороткекрови больных с осложненным течением уролитиазаХинолоны и их субъединицыЗначение показателя (M±m), ммоль/лТетрагидроизохинолон0,006±0,0005Дигидроизохинолон0,005±0,0004Хинонимины<0,002N-этилхинон0,004±0,0003Наряду с определением концентраций лактонов и хинолонов в сывороткебольных III группы нами проведен анализ содержание фурановых соединений и ихсубъединиц.Рисунок 27 — Масс-спектр 2-хинолин карбоксиловой кислоты — активатора«кооперативной чувствительности» из группы хинолонов(селективные ионы — массовые числа 63 m/Z, 89 m/Z, 145 m/Z, 189 m/Z)Концентрация фуранозил-диэфира бора в исследуемой группе варьировалаот 0,002 до 0,004 ммоль/л (Таблица 22, Рисунок 28).101Таблица 22 — Показатели содержания фурановых соединений и их субъединиц всыворотке крови больных с осложненным течением уролитиаза (n=51)Фурановые соединения и их субъединицы2-фуранметанол2-фуранметанамин*ТетрагидрофуранФурандион*N-N-диметилметанаминтригидроборал**Значение показателя (M±m),ммоль/л0,003±0,00020,003±0,0002<0,0020,004±0,00030,004±0,0003Примечание:* — субъединицы фуранозилдиэфира бора;** — метаболиты фуранозилдиэфира бораРисунок 28 — Масс-спектр 2-фуранметанола — активатора «кооперативнойчувствительности» из группы фурановых эфиров бора(селективные ионы — массовые числа 41 m/Z, 53 m/Z, 81 m/Z, 98 m/Z)Пороговыезначениясодержанияактиваторов«кооперативнойчувствительности» составили для больных с осложненным течением МКБ:• для лактонов 0,011±0,002 ммоль/л,• для хинолонов 0,008±0,0009 ммоль/л,• для фурановых эфиров 0,006±0,0007 ммоль/л.Приэтомуровеньсодержанияактиваторов«кооперативной102чувствительности» у больных этой же группы суммарно составил для лактонов0,026±0,0013 ммоль/л, для хинолонов 0,015±0,0012 ммоль/л, для фурановыхэфиров 0,018±0,0010 ммоль/л.Таким образом, пороговые значения превышены для лактонов в 2,36 раза, дляхинолонов в 1,87 раза, для фурановых эфиров в 3,0 раза, что свидетельствовало остепени выраженности сопутствующего калькулезного пиелонефрита.В Таблице 23 представлены данные о диагностической значимостихроматографическойиндикациисигнальныхсоединенийнаоснованииунифицированных критериев пригодности лабораторных тестов.Таблица 23 — Диагностическая значимость хроматографических методов поискаактиваторов «кооперативной чувствительности» микробов у больных уролитиазомс осложненным течением МКБКлинические иХроматографическиеЛожноЛожномикробиологическиеданныеположительные отрицательныеданные+ –+–+–Лактоны16 1112744Хинолоны16 1110863Фурановые16 1114625эфирыДиагностическаязначимостьхроматографическихметодовпоискасигнальных соединений активаторов «кооперативной чувствительности» микробову больных с осложненным течением МКБ и соответственно декомпенсированнойформой ПКА составила:• для лактонов: ДЧ 66,6%, ДС 42,8%, ДП положительная 66,6%, ДПотрицательная 42,8%;• для хинолонов: ДЧ 70,0%, ДС 25,0%, ДП положительная 40,0%, ДПотрицательная 62,5%;• для фурановых эфиров: ДЧ 64,2%, ДС 66,6%, ДП положительная 85,7%,ДП отрицательная 16,6%.Резюмируя результаты проведенного обследования, мы склонны считать, что103мочеваяинфекция,вызывающаявоспалительныезаболеванияоргановмочевыделительной системы, действует патогенетически созданием определенныхусловий для камнеобразования — нарушением транспорта литогенных веществ втубулярной системе почек за счет нефросклероза, нарушением транспорта мочи(уростаз) в мочевых путях.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
