Диссертация (1154338), страница 20
Текст из файла (страница 20)
Изменение содержания NF-kB (пг/мл) под влиянием разныхконцентраций дилтиазема в ядерных экстрактах культуры Human DermalFibroblasts (Adult), производство Axol BioscienceПоказателиГруппы1-я (безлекарственныхсредствNF-kB (пг/мл)721,3±22,63-я (дилтиазем, конц.)0,00005 мл-10,0001 мл-1737,3±22,1^765,7±34,7^Примечание: ^ - достоверность различий между 2-й (верапамил, табл.19) и3-й (дилтиазем) группами (p<0,05).Таблица 21. Изменение содержания NF-kB (пг/мл) под влиянием разныхконцентраций нифедипина в ядерных экстрактах культуры Human DermalFibroblasts (Adult), производство Axol BioscienceПоказателиГруппы1-я (безлекарственныхсредствNF-kB (пг/мл)721,3±22,64-я (нифедипин, конц.)0,00005 мл-10,0001 мл-1720,2±32,1^771,1±24,5^^^Примечание: ^ - достоверность различий между 2-й (верапамил, табл.19) и4-й (нифедипин) группами (^ - p<0,05; ^^^ - p<0,001).При этом выявлены статистически значимые различия в эффективностидействия различных групп БМКК на транскрипцию NF-kB (р50/р65) дермальныхфибробластов: показатели 3-й и 4-й групп отличались, с уровнями достоверностиниже 0,05 и 0,001 соответственно, от показателей 2-й группы (табл.19, 20, 21),что свидетельствует о наличии эффекта предотвращения чрезмерной активацииNF-kB при стимуляции культуры дермальных фибробластов человека TNF-a уверапамила и его отсутствии у дилтиазема и нефидипина.122Таким образом, изучение особенностей экспрессии транскрипционногофактора NF-κB в перитонеальных и дермальных фибробластах свидетельствуетоб их значимости в патогенез воспалительного процесса, приводящего кизбыточномуростусоединительнойткани.Прииндукцииактивностиперитонеальных фибробластов in vivo (модель гемоперитонеума) и дермальныхфибробластов человека in vitro TNF-, наблюдается выраженный рост уровняактивных форм NF-κB.
Сравнение результатов действия высокоспецифичных вотношениимедленныхпроизводныхкальциевыхфенилалкиламинаканалов(верапамил),групппрепаратовбензотиазепинаБМКК:(дилтиазем),дигидропиридина (нифедипин) на ядерный фактор транскрипции NF-kB (р50/р65)в первичной культуры перитонеальных фибробластов крыскультуре дермальных фибробластов человекаи в перевиваемойпозволяет заключить, чтонаибольшей фармакологической эффективностью обладал верапамил.влияниемверапамилапроисходилостатистическидостоверноеПодугнетениеактивности NF-kB и этот эффект был отчетливо дозозависимым. Выявленныезакономерностислужатфармакодинамическимобъяснениеммеханизмаплейотропного эффекта верапамила, направленного на подавление избыточногообразования соединительной ткани.РезюмеВ результате проведенных исследований с использованием клеточныхтехнологий выявлена чрезмерная активация перитонеальных фибробластов имакрофагов, забранных у крыс с гемоперитонеумом при развитии спаечногопроцессавбрюшнойполости.Активацияфибробластовреализоваласьувеличением пролиферативной и синтетической функции клеток, избыточнаяактивностьмакрофагов проявлялась ростом макрофагальной трансформациимоноцитов и увеличением количества цитокинов TNF- и IL-1.Изучение не описанного ранее фармакологического действия БМКК наклетки соединительной тканипоказало, что верапамил и дилтиаземвконцентрациях 0,00005 мл-1 и 0,0001 мл-1 оказывали дозозависимое влияние на123усиленнуюасептическимвоспалениембрюшиныпролиферативнуюисинтетическую функцию фибробластов и макрофагов.
Наиболее выраженныймодулирующий эффект в культуре клеток наблюдался в присутствии в ростовойсреде верапамила в концентрации 0,0001 мл-1. В культурах фибробластов имакрофагов, инкубируемых с верапамилом, активность митотического процессауменьшалась более значимо, чемс дилтиаземом. Синтез белковосвязанногооксипролина, гиалуроновой кислоты, TNF- и IL-1 в культуре активированныхклеток при действии верапамила также был ближе к показателям в культуреклеток интактных крыс, чем при действии дилтиазема. У нифедипина эффектавлияния на клетки соединительной ткани (чрезмерную пролиферативную исинтетическую активность перитонеальных фибробластов и макрофагов) выявитьнеудалось.Однимизмолекулярныхмеханизмов,лежащихвосновеантифиброгенного действия БМКК, можно считать подавляющее действиеверапамила, в меньшей степени дилтиазема, на активность транскрипционногоядерного фактора NF-kB фибробластов.
Сравнениерезультатов действияверапамила, дилтиазема, нифедипина на NF-kB (р50/р65) в первичной культурыперитонеальных фибробластов крысфибробластовэффективностьчеловекаи в перевиваемой культуре дермальныхподтвердиловерапамила.наибольшуюВыявленныефармакологическуюзакономерностисоздаютэкспериментальную предпосылку для клинического использования верапамила вкачестве регулятора фиброгенеза не только при спайкообразовании, но и на местеповреждения кожного покрова.124ГЛАВА 5ВЕРАПАМИЛ КАК СРЕДСТВО ПРОФИЛАКТИКИПЕРИТОНЕЛЬНОГО СПАЙКООБРАЗОВАНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ5.1.
Подбор дозового режима интраперитонеального введения верапамилаУчитывая, что традиционной областью применения БМКК являетсякардиология, а наличие выраженного кардио- либо ангиотропного действияверапамила минимизировало бы значимость предполагаемого его влияния наформирование соединительной ткани и делало бы проблематичным клиническоеиспользование верапамила для предотвращения избыточного спайкообразования,нами в экспериментах серии III (группы 9а, 9б, 9в, 10) изучено влияниеубывающих доз верапамила (0,4; 0,2; 0,1 мг/кг массы тела животного) насистемную кардио- и гемодинамику белых крыс при интраперитонеальномвведении препарата.
В результате исследований выявлено, что наиболееотчетливоевлияниенагемодинамикуоказывалверапамил,вводимыйвнутрибрюшинно в дозе 0,4 мг/кг массы тела животного, в течение первых двухчасов наблюдения (9а группа, табл.22).При этом регистрировался достоверный отрицательный хронотропныйэффект препарата, выражавшийся в снижении ЧСС через 15 минут и 2 часа послевведения верапамила. Кардиодепрессивный эффект верапамила в указанной дозепроявлялся также уменьшением сердечного выброса: УО был статистическизначимо снижен через 15 минут; 2 и 4 часа после интраперитонеального введенияпрепарата.
Сочетание отрицательного хроно- и инотропного эффектов препарата125Таблица 22. Влияние верапамила на кардио- и гемодинамику крыс приинтраперитонеальном введении 0,4 мг/кг (M±m)ПоказателиВремяисследованияисходноечерез 15 минЧСС уд/мин.через 2 ччерез 4 чисходноечерез 15 минАД. мм рт. ст.через 2 ччерез 4 чисходноеАДчерез 15 миндиастолическое,через 2 чмм рт. ст.через 4 чисходноеАД среднее, мм рт. через 15 минст.через 2 ччерез 4 чисходноечерез 15 минУО, млчерез 2 ччерез 4 чисходноечерез 15 минМОК, млчерез 2 ччерез 4 чисходноеОПСС, дин∙смчерез 15 мин5/103через 2 ччерез 4 чГруппа животных ( 9-а)0,4 мг/кг401,6±5,1317,8±10,0329,6±4,2390,4±3,4130,8±2,7110,8±2,3117,3±2,2122,1±2,4100,8±3,389,3±4,190,7±3,394,6±1,3110,8±2,896,5±2,999,6±2,1103,7±1,40,12±0,0050,09±0,0050,10±0,0040,11±0,00546,8±2,328,8±1,932,1±1,441,8±2,20,27±0,020,18±0,010,19±0,010,25±0,01Достоверностьразличийp<0,05p<0,05p>0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p<0,05p>0,05вызвало закономерное снижение МОК через 15 минут; 2 и 4 часа после введенияверапамила, степень снижения которого была существенно выше, чем УО и ЧСС126в отдельности.
Ангиотропное действие верапамила в дозе 0,4 мг/кг массы телаживотного оказалось также выраженным в значительной степени. Так, по даннымреовазографии, показатель ОПСС был снижен через 15 минут; 2 и 4 часа послевведения верапамила. Таким образом, наличие выраженных сердечно-сосудистыхэффектов верапамила в дозе 0,4 мг/кг массы тела животного свидетельствует отом, что для достижения поставленной цели данная доза оказалась избыточной.Верапамил в дозе 0,2 мг/кг массы тела животного также оказывал влияниена кардио- и гемодинамику, выраженность которого была существенно ниже, чемпри дозе 0,4 мг/кг и регистрировалась только в течение первых двух часовэксперимента (9б группа, табл.23).
Однако,наличиесердечно-сосудистыхэффектов верапамила в дозе 0,2 мг/кг массы тела животного делало данную дозудля достижения поставленной цели также избыточной. И лишь при введенииверапамила в дозе 0,1 мг/кг массы тела животного показатели, характеризующиеработу сердца и состояние кровообращения, оставались неизменными исопоставимыми с исходными данными в течение всего срока наблюдения (9вгруппа, табл. 24, рис. 15, 16, 17).Рисунок 15.
Динамика частоты сердечных сокращений (ЧСС) крысы послевнутрибрюшинного введения раствора верапамила в дозе 0,1 мг/кг127Таблица 23. Влияние верапамила на кардио- и гемодинамику крыс приинтраперитонеальном введении 0,2 мг/кг (M±m)ПоказателиВремяисследованияисходноечерез 15 минЧСС уд/мин.через 2 ччерез 4 чисходноечерез 15 минАД. мм рт. ст.через 2 ччерез 4 чисходноеАДчерез 15 миндиастолическое,через 2 чмм рт. ст.через 4 чисходноеАД среднее, мм рт. через 15 минст.через 2 ччерез 4 чисходноечерез 15 минУО, млчерез 2 ччерез 4 чисходноечерез 15 минМОК, млчерез 2 ччерез 4 чисходноеОПСС, дин∙смчерез 15 мин5/103через 2 ччерез 4 чГруппа животных ( 9-б)0,2 мг/кг342,1±5,7302,6±8,6340,8±5,1338,0±2,9126,0±2,8127,1±2,7119,3±2,4123,1±2,999,1±3,0103,2±4,3104,7±3,8102,1±1,5123,0±2,6126,0±2,5127,1±1,8125,3±1,30,12±0,0050,11±0,0050,12±0,0030,11±0,00645,9±2,639,1±2,040,9±1,343,8±2,50,28±0,010,24±0,010,25±0,020,25±0,01Достоверностьразличийp<0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p>0,05p<0,05p>0,05p>0,05p<0,05p>0,05p>0,05128В данной дозе основные фармакологические свойства верапамила непроявлялись:показатели,характеризующиеработусердцаисостояниекровообращения, оставались на уровне исходных данных в течение 15 минут, 2 и4 часов после инъекции препарата.Рисунок 16.
Динамика систолического артериального давления (АД сист.) крысыпосле внутрибрюшинного введения раствора верапамила в дозе 0,1 мг/кгдин∙см-5/103Рисунок 17. Динамика общего периферического сопротивления сосудов (ОПСС)крысы после внутрибрюшинного введения раствора верапамила в дозе0,1 мг/кг129Таблица 24. Влияние верапамила на кардио- и гемодинамику крыс приинтраперитонеальном введении 0,1 мг/кг (M±m)ПоказателиВремяисследованияисходноечерез 15 минЧСС уд/мин.через 2 ччерез 4 чисходноечерез 15 минАД.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
