Диссертация (1151592), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Взятие образцовскелетных мышц проводили следующим образом: яйца извлекали изинкубатора,механическимпутемнарушалицелостностьскорлупы,извлекали зародыш, образцы мышц при помощи пинцета перемещали вофлакон с 10% раствором формалина. Цыплят декапитировали и производилиотбор образцов мышц.У 8-ми дневных эмбрионов оформлены лишь почки конечностей изачатки мышц формирующихся анатомических областей.
В этой связидифференцировать отдельные мышцы нам не представилось возможным.Поэтому зачатки грудных мышц отделяли совместно с грудной клеткой, атазовых — с поясом тазовой конечности.У 10-ти дневных эмбрионов изолировали тазовые конечности игрудные мышцы, поскольку подразделение на звенья и на отдельные мышцыв данный срок не выражено.Изучение гистопрепаратов, полученных от 8-ми и 10-ти дневныхэмбрионов, проводили, оценивая топографию зачатков мышцы с учётомкостных ориентиров, которые хорошо визуализируются под контролеммикроскопа.Начинаяс14-хсуток,тазоваяконечностьэмбрионовдифференцирована на три звена, что позволило выполнять тонкоеанатомическоепрепарированиечетырехглавоймышцыбедраиповерхностной грудной мышцы с целью отбора образцов.После фиксации в 10%-м растворе формалина, промывания впроточной воде, обезвоживания в спиртах восходящих концентраций,39образцы заливали в парафин по общепринятой методике [15, 54].
Срезыизготавливали на ротационном автоматизированном микротоме HM-325(Microm international GmbH, Germany) и окрашивали гематоксилином иэозином для выявления общей морфологической картины, а такжепикрофуксиномифукселиномдлядифференцировкимышечнойисоединительной ткани [15, 54]. Изучение гистологических срезов имикрофотосъемку проводили при помощи светового микроскопа Jenamed 2(Carl Zeiss, Jena, Germany), совмещённого с системой цифровой микроскопииImageScope C (ООО «Системы для микроскопии и анализа»).2.3 Микроскопическая морфометрияПри микроскопической морфометрии оценивали ряд показателей,отражающихдинамикугистогенезаизучаемыхскелетныхмышц.Исследования проводили с помощью сертифицированной программыImageScope C (ООО «Системы для микроскопии и анализа»), котораяпозволяет проводить статистическую обработку цифрового материала.Определяли следующие показатели:Толщину мышечных волокон.Толщину пучков мышечных волокон.Толщину эндомизия и перимизия.Количество мышечных волокон в поле зрения на продольномсрезе при увеличении 1000х.Площадь мышечной и соединительной тканей в поле зрения напродольном срезе при увеличении 400х.2.4 Биохимические исследования содержания метаболитов оксида азотаЭмбриональный материал помещали в гомогенизатор на 8 минут причастоте 40 фрикций в минуту и температуре 6ºC.
Для приготовлениягомогенатов мышц использовали измельчитель тканей и 158 мМ раствор40NaCl, содержащий 20 мМ фосфата калия, рН 7,4. Измерения проводили непозднее 30 минут после гомогенизации.Для выявления нитро- и нитрозосоединений в амнионе и аллантоисеэмбрионов, а также гомогенате мышц и потрошенных тушек цыплятиспользовали ферментативный метод, в основе которого лежит применениеферментногосенсора,разработанноговрезультатекомплексныхисследований с кафедрой биофизики РНИМУ и ИФХ РАН [88, 89, 90]. Оноснован на уникальной способности всех нитрозосоединений ингибироватькаталазу в присутствии галоид-ионов с примерно равной эффективностью,которая повышалась при снижении рН.
В отсутствии галоид-ионовэффективность ингибирования снижалась на 2 порядка. Способностьингибироватьферментутрачиваласьподдействием рядафакторов,специфичных для каждой группы нитрозосоединений [88, 89, 90].Для определения содержания нитрита в амнионе и аллантоисеэмбрионов и гомогенате мышц и потрошенных тушек цыплят использовалитакже классический метод Грисса [191].2.5 Методы статистической обработки результатовСтатистическую обработку морфометрических данных осуществляли спомощью программы ImageScope C (ООО «Системы для микроскопии ианализа»).Анализ результатов, полученных при биохимических исследованиях,проводили общепринятым методом с вычислением средней арифметической(M) и стандартной ошибки среднего (m) с использованием пакета программ«BioStat».
Оценку статистической значимости различий исследуемыхпоказателей осуществляли с использованием критерия Стьюдента и МаннаУитни [18, 50].413. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХОБСУЖДЕНИЕ3.1 Особенности эмбрионального и постэмбрионального гистогенезаскелетных мышц у кур мясного направления продуктивностиВ ходе проведенных исследований установлены особенности развитияскелетных мышц у кур мясного направления продуктивности.8-е сутки эмбриогенеза совпадают с началом предплодного периодаразвития и характеризуются интенсивным органогенезом, при этом зародышиспользует для построения своего тела содержимое желточного мешка ижидкой части белковой оболочки [20, 64, 69, 99, 135]. В данный срок вструктуре почки тазовой конечности (рисунок 4) и грудных мышц(рисунок 5) выявлены мышечные волокна, разделенные эмбриональнойсоединительной тканью.
Миобласты и мышечные трубочки отсутствуют.Мышечные волокна в этот срок наблюдений толще в бедренных мышцах,чем в грудных, за исключением эмбрионов Смена-8. У них мышечныеволокна дифференцируются на тонкие и толстые в обеих исследуемыхмышцах (таблица 2). По показателю площади мышечной ткани грудныемышцы опережают мышцы бедра. Сравнительный анализ количествамышечных волокон в поле зрения показал, что у эмбрионов бойцовых породкур (Малайская и Куланги) этот показатель выше в мышцах бедра посравнению с грудными мышцами.
У кроссов Смена-8, Кобб-500 и линии Б-56«Корниш» выявлена обратная картина (таблица 2).42Рисунок 4. Структурная организация зачатка бедренных мышцу 8-ми суточного эмбриона.Кросс Смена-8 (мясное направление продуктивности).А – продольный срез, Б – поперечный срез.1 — мышечные волокна и миобласты, 2 — межволоконные пространства.Гематоксилин и эозин, об.40, ок.10.Рисунок 5. Структурная организация зачатка грудных мышцу 8-ми суточного эмбриона.Кросс Смена-8 (мясное направление продуктивности).А – продольный срез, Б – поперечный срез.1 — мышечные волокна и миобласты, 2 — межволоконные пространства.Гематоксилин и эозин, об.40, ок.10.К 10-ым суткам эмбриогенеза в структуре скелетных мышцприсутствуют одиночные мышечные волокна, разделенные эмбриональнойсоединительнойтканью.Формированиепучковмышечныхволокон,эндомизия и перимизия обнаружено лишь в образцах от зародышей породыКуланги и кросса Кобб-500 (рисунки 6, 7).
По сравнению с предыдущимсроком наблюдений, в обеих мышцах возрастает показатель толщинымышечных волокон, причем более ярко это проявляется в ПГМ. Лишь у43Малайской бойцовой породы и линии Б-56 «Корниш» установленапротивоположная картина.
Гетерогенность по толщине мышечных волоконнами выявлена только у Смены-8. Площадь мышечной ткани значительноувеличивается в обеих изучаемых мышцах, при этом ПГМ превосходит ЧМБпо этому показателю. Лишь у Смены-8 и Б-56 «Корниш» выявлена обратнаякартина. При незначительном увеличении количества мышечных волокон упредставителей всех изученных пород установлено, что ПГМ по данномупоказателю опережает ЧМБ (таблица 3).Рисунок 6. Структурная организация ЧМБ у 10-ти суточного эмбриона.Порода Куланги (мясное направление продуктивности).А – продольный срез, Б – поперечный срез.1 — мышечные волокна, 2 — эндомизий, 3 — перимизий,4 — пучки мышечных волокон.Гематоксилин и эозин, об.40, ок.10.44Рисунок 7. Структурная организация ПГМ у 10-ти суточного эмбриона.Кросс Кобб-500 (мясное направление продуктивности).А – продольный срез, Б – поперечный срез.1 — мышечные волокна, 2 — эндомизий, 3 — перимизий,4 — пучки мышечных волокон.Гематоксилин и эозин, об.40, ок.10.14-е сутки эмбриогенеза соответствуют плодному периоду развития,который характеризуется интенсивным ростом органов и внутрикишечнымусвоением белка, поступающего из амниотической полости.
В этот периодэмбриогенеза, который продолжается до момента вылупления [20, 64, 69, 99,135], изучаемые мышцы оформлены в виде пучков мышечных волокон,между которыми визуализируются эндомизий и перимизий (рисунки 8, 9).Однако, мышечные волокна не изменяют своей толщины, по сравнению спредыдущим сроком. При этом ЧМБ превосходит ПГМ по этому показателю,за исключением породы Куланги и кросса Кобб-500, у которых обнаруженаобратная зависимость. Максимальное значение толщина мышечных волоконимеет в ЧМБ у Малайской бойцовой породы (таблица 4). По показателютолщины пучков мышечных волокон ЧМБ превосходит ПГМ и достигаетмаксимальных значений в обеих исследованных мышцах у Смены-8(таблица 4). Перимизий толще в ПГМ у всех пород, кроме Малайскойбойцовой, у которой видна обратная картина.
Наилучшего развитияперимизий достигает у эмбрионов кросса Смена-8 и линии Б-56 «Корниш» вобеих изученных мышцах. При этом толщина эндомизия существенныхмежпородных отличий не имеет. Лишь в ЧМБ у Малайской бойцовой породы45этот показатель превосходит таковые у других кур. Площадь мышечнойткани увеличивается, по сравнению с предыдущим сроком, во всехизученных образцах. Примечательно, что по данному показателю ЧМБпревосходит ПГМ у всех представителей мясных кур (таблицы 2-6), кромеМалайской бойцовой породы, у которой выявлена обратная картина.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
