Диссертация (1151568)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждениевысшего образования «Московская государственная академия ветеринарноймедицины и биотехнологии – МВА имени К.И. Скрябина»На правах рукописиВологжанина Наталья ВладимировнаМорфологическое и функциональное обоснование регенераторнойактивности клеточных продуктов разных типов на моделитравматического повреждения роговицы06.02.01 – Диагностика болезней и терапия животных,патология, онкология и морфология животныхДиссертация на соискание учёной степеникандидата биологических наукНаучный руководитель:заслуженный деятель науки РФ,доктор биологических наук,профессор Слесаренко Н.А.Москва – 2017ОглавлениеВЕДЕНИЕ .................................................................................................................

1ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ......................................................................................... 8МЕЗЕНХИМНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ................................................................... 14CТРОМАЛЬНО-ВАСКУЛЯРНАЯ ФРАКЦИЯ ............................................................... 22СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ЛИМБА .................................................................................. 25СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ..............................................................

28МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ................................................................ 28РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХОБСУЖДЕНИЕ ..................................................................................................... 33МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ РОГОВИЦЫГЛАЗНОГО ЯБЛОКА КРОЛИКА В КОНТРОЛЕ ............................................................ 332.

КЛИНИЧЕСКИЕ И МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЗАЖИВЛЕНИЯРОГОВИЦЫ ГЛАЗА У ЖИВОТНЫХ КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППЫ (САМОПРОИЗВОЛЬНОЕЗАЖИВЛЕНИЕ) .......................................................................................................... 372.1. КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА ................................................................................. 372.2. РЕЗУЛЬТАТЫ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯ ..................................... 403.

ЗАЖИВЛЕНИЕ РОГОВИЦЫ ГЛАЗА КРОЛИКА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИАЛЛОГЕННЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЛИМБА .......................................................... 45(ЛИМБАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК – ЛСК) ....................................................... 453.1. КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА ................................................................................. 453.2. РЕЗУЛЬТАТЫ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ..................................... 474.

ЗАЖИВЛЕНИЕ РОГОВИЦЫ ГЛАЗА КРОЛИКА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИАЛЛОГЕННЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЖИРОВОЙ ТКАНИ (ММСК)................................................................................................................................... 544.1. КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА ................................................................................. 544.2. РЕЗУЛЬТАТЫ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ.....................................

565. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ СТРОМАЛЬНО-ВАСКУЛЯРНОЙ ФРАКЦИИ ............ 625.1. КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА ................................................................................ 625.2. РЕЗУЛЬТАТЫ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ .................................. 65КЛИНИЧЕСКАЯ АПРОБАЦИЯ ................................................................................... 72ЗАКЛЮЧЕНИЕ .....................................................................................................

77РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ... 79СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ..... СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ................................................................................................................................... 81СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ: ....................................... 82ВЕДЕНИЕАктуальность проблемыВпоследниедесятилетиянеуклоннорастетчисложивотных,страдающих офтальмопатиями различного генеза [42]. Среди них особоеместо занимают длительно незаживающие и рецидивирующие язвыроговицы [101].

Данная патология может иметь травматическую этиологию,а также может быть вызвана снижением трофики роговицы, анатомическимлагофтальмом, ожогами и многими другими факторами, приводящими кповреждению эпителия и более глубоких слоёв роговицы.Однимизнаправленийврегенеративноймедицинеявляетсяиспользование клеточных продуктов различного происхождения с цельюзамещения дефекта в поврежденном органе. В медицине человека притяжелыхповрежденияхроговицыклеточнаятерапияпоказываетобнадеживающие результаты, как в эксперименте, так и на практике, чтоотражено во многих современных источниках [5, 6, 9, 10, 12-14, 19, 20, 23,25].Вместе с тем, большинство подобных методов находится на стадиилабораторных и клинических испытаний, но некоторые из них уже завоевалисвое место в клинической практике.

Как известно, стволовые клеткиобладают способностью оптимизировать цитокиновый статус в клеточноммикроокружении после их локальной трансплантации в органы или ткани[12, 19].Лечение животных с заболеваниями и повреждениями роговицы глазапри выраженной несостоятельности процессов регенерации, приводящей висходе к значительному снижению остроты зрения и слепоте, остаетсяактуальной проблемой ветеринарной офтальмологии [24].В настоящее время, ведется поиск эффективных способов, которыепозволили бы успешно лечить пациентов с повреждениями роговицы иконъюнктивы, фиброзирующими кератоконъюнктивитами, незаживающимиязвами роговицы, тяжелыми формами синдрома сухого глаза.Для лечения животных с подобными состояниями используют, какизвестно,комплекснуютерапию,включающуювсебяприменениеантибиотиков, противовоспалительных, противовирусных лекарственныхсредств, а также препаратов, стимулирующих репаративные процессы вповреждённом эпителии роговицы.Методомэтиотропнойтерапииявляетсяиспользованиекератопротекторов – препаратов, стимулирующих регенеративные потенциироговицы.

Однако, при поражениях роговицы, затрагивающих болееглубокие слои стромы, эффективность кератопротекторов не всегда высока,ввиду их непосредственного контакта с дегенерировавшими тканямироговицы в зоне дефекта, что приводит, к последующему рецидивированиюпатологического процесса. Это влечет за собой ряд сложных хирургическихопераций, вплоть до пересадки роговицы, однако тактика её проведениятребует достаточно глубокого наркоза, который часто противопоказанживотнымгериатрическогопериодаонтогенеза,атакжеимеющимврождённые и приобретённые системные патологии [42].Однойизновейшихметодик,представляющихальтернативукератопротекторам, является использование клеточных технологий.

Вместе стем, многие сведения в данной области медицины являются фрагментарнымиипротиворечивыми.Следуетподчеркнуть,чтовветеринарнойофтальмологии клеточные технологии до настоящего времени используюттолько в клинических исследованиях, не имеющих экспериментальногообоснования,очемсвидетельствуетпроведенныйнамианализотечественной и зарубежной литературы [75, 76, 82, 84, 94, 98, 103, 104, 118,123, 124, 127].Исходя из вышеизложенного, нами на моделях травматическогоповреждения роговицы у кролика было предпринято исследование по оценке2возможностиприменениястромально-васкулярнойфракцииклеток,мезенхимных стволовых клеток жировой ткани и лимбальных стволовыхклеток в регенеративной медицине, путём введения их суспензированнойвзвеси субконъюнктивально.Цель настоящего экспериментального исследования - установитьзакономерности и особенности заживления моделированного поврежденияроговицы у кролика при использовании разных типов клеточных продуктов.Для достижения поставленной цели было необходимо решение рядаконкретных задач:1.

В условиях моделированного повреждения роговицы у кроликавыявитьпролиферативныйпотенциалклеточныхпродуктовследующих типов: стромально-васкулярной фракции; аллогенныхстволовых клеток лимба; аллогенных стволовых клеток жировойткани.2. Установитьсравнительныеморфологическиепоказателидинамики репаративной регенерации поврежденного эпителияроговицы при использовании клеточных продуктов указанныхтипов;3. На основании клинико-морфологических данных, определить типклеточного продукта, оптимальный по регенераторным свойствам;4.

Выявить источники репаративного морфогенеза роговицы вусловияхприменениеэкспериментальногостволовыхклетокповреждениякакиобосноватьиндуктораклеточногопролиферативного потенциала ткани роговицы при замещении еедефекта;35. Провестиклиническуюапробациютерапевтическойэффективности стволовых клеток при лечении животных сповреждениями роговицы и установить целесообразность иэффективность применения их трансплантации при даннойпатологии.Научная новизнаОбоснованаиспользованияиэкспериментальноклеточныхпродуктовподтвержденаразныхтиповвозможностьвветеринарнойофтальмологии для восстановления анатомической целостности роговицы,чтоподтверждаетсяустановленнымиуподопытныхживотныхеефракциинаморфологическими характеристиками.Впервыерегенерациюоцененороговицывлияниеприеестромально-васкулярнойповрежденияхуэкспериментальныхживотных.Результаты гистологического исследования позволяют заключить, чтоскорость и качество заживления дефекта роговицы глаза у животных послеприменения клеточных продуктов превосходят таковые у животных приспонтанном заживлении, что может свидетельствовать о пролиферативныхпотенциях стволовых клеток.Теоретическая и практическая значимость исследованияУстановлено, что изучаемые типы клеточных продуктов после ихтрансплантацииэкспериментальнымживотнымвосстанавливаютанатомическую целостность и функциональную состоятельность тканейроговицы в области повреждения.

Оценено влияние клеточных продуктов иразработаны критерии оценки течения репаративного процесса.4На основании данных микроморфометрии выявлены морфологическиепоказатели, подтверждающие, что клеточные продукты могут выступать вкачестве индуктора репаративной регенерации повреждённых тканей глаза.Установленызакономерностииособенностирегенераторногопотенциала тканей роговицы в условиях моделированного повреждения споследующей трансплантацией клеточных продуктов.Сравнительный анализ регенераторного влияния изученных намиразных типов стволовых клеток показал, что эпителизация зоны дефектароговицы у животных после введения лимбальных стволовых клетокпроисходила активнее в сравнении с животными, которым вводили другиеклеточные продукты.Представлено научное обоснование терапевтической эффективностиклеточных продуктов различных типов при повреждениях роговицыразличной этиологии.Методология и методы исследованияИспользовали современный методологический подход, направленный наустановление закономерностей репаративной регенерации поврежденныхтканей в области индуцированной травмы.Полученные результаты эксперимента по применению стволовых клетокв ветеринарной офтальмологии являются базовыми для использования впрактическойветеринарноймедицинеприрегенеративнойтерапииповреждений роговицы глаза и могут быть использованы в клиническойрегенеративной медицине при восстановлении анатомической целостностироговицы в условиях ее повреждений.5Положения, выносимые на защиту:1.

Характеристики

Тип файла PDF

PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.

Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.

Список файлов диссертации