Диссертация (1151568), страница 10
Текст из файла (страница 10)
У одного животного была сохранена нубекула на месте бывшейэрозии роговицы.Полученныерезультатыдоказываютэффективностьприменениястволовых клеток при лечении животных с индолентными язвами и эрозиямироговицы, как альтернативы медикаментозному лечению, поверхностнойкератоэктомии и другим методикам, которые применяют при даннойпатологии.АБРис. 28. Клиническая картина глаза собаки с хронической эрозией роговицы,которой вводили ММСК. А – состояние роговицы глаза в день введения71клеточной суспензии – обширная эрозия роговицы, положительноеокрашивание флюоресцеином; Б – состояние роговицы глаза на 7 сутки –отсутствуют признаки окулярного дискомфорта, флюоресцеиновый тестотрицательный, нубекула в зоне бывшей эрозии.Врезультатепроведенныхклиническо-офтальмологическихиморфологических исследований выявлено, что у животных, которым вводиликлеточные продукты, окулярный дискомфорт после нанесения дефекта вдинамике наблюдения был менее выражен, чем у их контрольных аналогов.При проведении биомикроскопии роговицы щелевой лампой установлено,что в группе животных, с локальной трансплантацией гомологичныхстволовых клеток лимба, эпителизация дефекта происходила быстрее истепень ее помутнения была наименее выражена, чем в других подопытныхгруппах.У животных, которым вводили аллогенные ММСК в 2 случаях отмечалинеоваскуляризациюдефекта,чтоподтверждаетихпроангиогеннуюактивность за счет стимуляции фактора роста эндотелия сосудов[33, 43].
Увсех животных этой группы присутствовала выраженная воспалительнаяреакция конъюнктивы в месте введения клеточной суспензии, но в меньшейстепени,чемвконтрольнойгруппеживотных,чтоговоритоиммуносупрессивных свойствах ММСК[2, 118]. На 14 сутки отмечалиформированиецентральногорубцароговицыввиденубекулы,интенсивность которой по шкале Войно-Ясенецкого варьировала от 3 до 7баллов.В группе животных, с трансплантированной локально стромальноваскулярной фракцией, воспалительная реакция конъюнктивы глаза в зоневведения суспензии была менее выражена, чем у их аналогов из другихподопытных групп и окулярный дискомфорт практически отсутствовал. Приоценке клинического состояния глаз животных на 14 сутки, наблюдали72закрытие дефекта роговицы эпителием, за исключением одного животного, укоторого сохранялось окрашивание флюоресцеином 1 на 1,5 мм в диаметре,при отсутствии блефароспазма, фотофобии и эпифоры.
Степень помутненияроговицы была минимальной (от 0 до 3 баллов), при этом, центрально,визуализировали ее истончение. Есть основание полагать, что локальноеприменениеаутологичнойстромально-васкулярнойфракциивызываетменьшую воспалительную реакцию, чем другие типы сравниваемыхклеточных продуктов за счет гистосовместимости, а так же положительновлияет на репаративные процессы в тканях роговицы за счет своейсекреторной активности и способности дифференцироваться[96, 8].Уконтрольныхживотныхотмечаливыраженныйокулярныйдискомфорт на начальных сроках наблюдения. Присутствовала выраженнаявоспалительная реакция роговицы, при относительно спокойным состояниемконъюнктивы глаза.
В 3 случаях регистрировали острый реактивныйиридоциклит и в одном случае – кератомаляцию. У подопытных животных,которымвводиликлеточныепродукты,данныеофтальмопатииненаблюдали. На 14 сутки наблюдений у животных контрольной группыотмечали формирование рубцовой ткани в зоне моделированного дефекта иэпителизацию центральной зоны, практически во всех случаях. Степеньпомутнения была наибольшей интенсивности, в сравнении с их опытнымианалогами и составляла от 5 до 10 баллов по шкале Войно-Ясенецкого.Анализ полученных данных позволил сделать заключение, что уживотных,которымсубэпителиальновводилипроисходилостромально-васкулярнуюформированиефибрознойфракцию,ткани,безпризнаков межволоконного отека, а в лимбальной зоне были выражены отек,диффузная клеточная инфильтрация с признаками склероза в собственномвеществе роговицы.
У животных группы ММСК заживление проходило потипу острой воспалительной реакции и неоваскуляризацией дефекта ссубэпителиальным образованием грануляционной ткани, умеренным отеком73и диффузной и очаговой клеточной инфильтрацией, а так же вазодилятациейв лимбальной зоне.Уживотных,которымвводилилимбальныестволовыеклеткиэпителиальный пласт был восстановлен и количество эпителиальных слоевбыло приближено к норме. Собственное вещество роговицы сформированофиброзной тканью, в её поверхностных слоях обнаружен диффузныйклеточный инфильтрат, в то время как в контроле сохранялись дефектыэпителия и стромы. Кроме того, в группе контроля через 14 суток у всехживотных, за исключением одного, наблюдали эпителизацию центральнойобласти дефекта.
Здесь в структуре регенерата роговицы присутствовалистонченный эпителиальный пласт, представленный 2-3 слоями клеток.Субэпителиально располагалась зрелая грануляционная ткань с признакамиумеренной клеточной инфильтрации, содержащая кровеносные сосуды, а подней-фибрознаярасположеннымитканьпучкамисплотноколлагеновыхупакованными,волоконипараллельнодеструктивнымиочагами.Сравнительный анализ регенераторного влияния изученных намиразных типов стволовых клеток показал, что эпителизация зоны дефектароговицы у животных после введения лимбальных стволовых клетокпроисходила активнее и в более короткие сроки в сравнении с животными,которым вводили другие клеточные продукты.Лидером по степени прозрачности роговицы явились особи, которымвводили гомологичные стволовые клетки лимба.По количеству слоев в центральной части роговицы опережали особи,которым вводили СВФ, а в группе животных с трансплантированнымигомологичными стволовыми клетками лимба морфометрические показателироговицы были наиболее приближены к норме, чем во всех остальныхслучаях.74Обращает на себя внимание увеличение толщины роговицы влимбальной зоне по морфометрическим показателям у животных, которымвводиликлеточныепродукты,засчетувеличенияклеточногомикроокружения в субэпителиальных слоях роговицы, в сравнении сконтрольной и интактной группами, что может говорить об активацииклеточной пролиферации и стимуляции регенеративных процессов послеиспользования стволовых клеток и стромально-васкулярной фракции.На сегодняшний момент, наши исследования направлены на выяснениетонких механизмов регуляции процессов дифференцировки стволовыхклеток, после трансплантации их на поверхность глаза.
После подтвержденияэффективности и безопасности нового метода лечения станет возможным егоприменение у пациентов с тяжелыми заболеваниями и повреждениями глаз,ранее неизбежно приводивших к значительному снижению зрительноговосприятия и утрате зрительных функций.При некоторых заболеваниях органа зрения нет острой необходимостиприбегать к клеточной терапии, однако при ожоговой болезни глаз или прирецидивирующей эрозии роговицы стандартное лечение зачастую неприводиткжелаемымрезультатам.Болеетого,позднеезакрытиеэпителиального повреждения заканчивается необратимыми изменениями втканях роговицы. Поэтому в данных случаях трансплантация стволовыхклеток не только желательна, но и необходима, ведь их внедрение в организмприводит к снижению помутнения роговицы, стимуляции процессоврепаративногогистогенеза,затуханиювоспалительногопроцессаинормализации кровотока в конъюнктиве.Положительный эффект от внедрения стволовых клеток дают такиесодержащиеся в них элементы, как цитокины, интерлейкины и факторыроста, именно их наличие активизирует восстановительные процессы иподдерживает жизнедеятельность клеток в тканях.
Проведение процедурытрансплантациистволовыхклетокпациентуотличаетчрезвычайная75простота, атравматичность и отсутствие необходимости хирургическоговмешательства.76Заключение1. На основании проведенных исследований экспериментальнообоснована возможность использования разных типов клеточныхпродуктоввкоррекцииветеринарнойповрежденийустановленнымиофтальмологиироговицы,намиеедлячтолечебнойподтверждаетсяклинико-морфологическимихарактеристиками у животных.2.
Вэкспериментальныйпериоднаблюденийуживотных,подвергшихся регенеративной терапии клеточными продуктами,воспалительная реакция на травму была менее выражена, чем вконтроле,вповрежденныхтканяхактивнопротекалипролиферативные процессы, что косвенно указывает на индукциюих заживления стволовыми клетками.3.
Результаты гистологического исследования позволяют заключить,что скорость и качество заживления дефекта роговицы глаза уподопытных животных превосходили таковые у контрольных, чтосогласуется с морфологическими линейными показателями егоэпителизации у экспериментальных животных на 14 суткинаблюдений (от 6,1±0,3 в подопытной группе против 4,5±1,5 мм вконтрольной), что может свидетельствовать о пролиферативныхпотенциях стволовых клеток.4. Сравнительный анализ регенераторного влияния разных типовстволовых клеток показал что эпителизация зоны дефектароговицыуживотныхпослевведениялимбальныхСКпроисходила активнее и в более короткие сроки в сравнении сживотными, которым вводили другие клеточные продукты.Лидером по количественному представительству эпителиальныхслоёв явились особи, которым вводили стромально-васкулярнуюфракцию (5 слоев клеток в центральной части роговицы, прианатомической норме – 6 слоев), а по толщине роговицы в зоне77повреждения – стволовые клетки лимба (345±12,97 в опыте и379±17,15 у интактных животных).5.
Клиническое наблюдение животных в динамике позволилоустановить, что после введения стволовых клеток лимба былоболее интенсивное развитие воспалительной реакции, раннеесозревание грануляционной ткани, быстрая трансформациея ее всоединительную, активизация процесса эпителизации дефекта,формирование органоспецифического регенерата и сокращениеобщих сроков заживления.6. Установлено, что после трансплантации стромально-васкулярнойфракцииэкспериментальнымполнослойныйструктурнойдефектживотнымроговицыполноценности.Всвосполняютвосстановлениемобластиееиндуцированногоповреждения при трансплантации стволовых клеток по сравнениюссамопроизвольнымзаживлением,уменьшаетсястепеньвыраженности воспалительной реакции, ускоряется процессвосстановления поврежденных тканей и прозрачности роговицы.Наилучший результат по степени прозрачности роговицы после еевосстановлениявыявленуживотныхслокальнойтрансплантацией стволовых клеток лимба ( от 0 до 4 баллов пошкале Войно-Ясенецкого).7.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
