Диссертация (1151568), страница 7
Текст из файла (страница 7)
2. Структура интактной роговицы кролика. Центральная зона.Гематоксилин и эозин, А - об.10,ок.10, Б - об.20,ок.10.1 – наружный эпителий, 2 - наружная (боуменова) мембрана, 3 –собственное вещество, 4 – внутренняя (десцеметова) мембрана, 5 –внутренний эпителий.В лимбальной зоне отличительной особенностью cтроения являетсяотсутствиебоуменовоймембраныиналичиехорошоразвитогосубэпителиального слоя из рыхлой соединительной ткани, в которойрасположены кровеносные и лимфатические сосуды, многочисленныефибробласты,атакжестволовыеклетки,являющиесяисточникомрегенерации роговицы[55].3521354А12БРис.
3. Структура интактной роговицы кролика. Лимбальная зона.Гематоксилин и эозин, А - об.10, ок.10, Б - об.20, ок.10.1 – наружный эпителий, 2 – рыхлая соединительная ткань, 3 - собственноевещество, 4 – внутренняя (десцеметова) мембрана, 5 – внутреннийэпителий. Сосуды микроциркуляторного русла показаны стрелками.Морфометрические характеристики роговицы представлены в таблице 1.Таблица 1 Морфометрическая характеристика интактной роговицы кролика36Показатели роговицыСуммарная толщина, мкмЦентральная зона роговицыЦентральЛим-Эпите-Боуме-СобствеДесцеметовВнутреннеи-ная зонабальнаялиальнынованноеай эпителийзонай пластМембрана(эндотелия)334±8,01±3,68±1,950,840,18роговицырогови-мембранвеществоацыЗначения379±17,15226±21,424,4±910,8±0,090,922.
Клинические и морфологические особенности заживления роговицыглаза у животных контрольной группы (самопроизвольное заживление)2.1. Клиническая картинаНа 3 сутки наблюдения у кроликов контрольной группы наблюдаливыраженныйокулярныйдискомфортспризнакамиблефароспазма,фотофобии и эпифоры. Имели место острый отек конъюнктивы (рис. 4А,указатель), ее гиперемия (рис. 4В, указатель), блефаромейбомиит (рис. 4).Роговица в зоне дефекта была воспалена и отечна, у одного животногоприсутствовала кератомаляция (рис. 4А), а также признаки реактивногоиридоциклита.
Окрашивание роговицы флюоресцеином наблюдали у всехживотных, степень её помутнения по шкале Войно-Ясенецкого составила от4 до 10 баллов.37БАВРис. 4. Состояние роговицы у животных контрольной группы через 3 сутокпосле нанесения дефекта (Самопроизвольное заживление). А –кератомаляция в зоне дефекта, отек конъюнктивы, блефаромейбомиит; Б –Блефароспазм, положительная флюоресцеиновая проба, отек роговицы взоне повреждения; В –положительная флюоресцеиновая проба, острыйблефаромейбомиит с гиперемией бульбарной и пальпебральнойконъюнктивыНа7дискомфортасуткиэкспериментауменьшаласьпостепеньсравнениювыраженностисокулярногопредыдущимисрокаминаблюдения. Наряду с этим на фоне сохранения умеренной гиперемииснижались признаки отёка век и конъюнктивы (рис.
5А, Б). Признакиреактивного увеита были сохранены (рис. 5А, В), а у животного скератомаляциейнаблюдалиформированиерубцовойткани(рис.5А).Поверхностное окрашивание роговицы флюоресцеином имело место почти увсех контрольных особей. Степень помутнения роговицы по шкале ВойноЯсенецкого составила от 3 до 10 баллов.АБВ38Рис. 5. Состояние роговицы у животных контрольной группы через 7 сутокпосле нанесения дефекта (Самопроизвольное заживление).А – уплотнение воспаленных тканей роговицы в зоне повреждения,формирование лейкомы, Блефаромейбомиит сохранен (синяя стрелка),реактивный иридоциклит сохранен (зеленая стрелка);Б – неоваскуляризация роговицы медиального сектора с периферии (синийуказатель), гиперемия пальпебральной конъюнктивы (зеленая стрелка),положительная флюоресцеиновая проба; В – слабоположительноепрокрашивание флюоресцеином, инъекция сосудов радужной оболочки(зеленый указатель)На14суткинаблюденийукроликовсохранялисьокулярныйдискомфорт и блефаромейбомиит (рис.
6 А,Б,В), а также гиперемияконъюнктивы (рис. 6В). В то же время, в сравнении с предыдущими сроками,уменьшаласьстепеньвыраженностипризнаковреактивногоувеита.Поверхностное окрашивание роговицы флюоресцеином было сохранено удвух особей (рис. 6 А,Б). У всех животных идентифицировались границытрепанационной зоны, а степень помутнения роговицы по шкале ВойноЯсенецкого составила от 3 до 9 баллов.АБВРис. 6. Состояние роговицы у животных контрольной группы на 14 сутки39наблюдений (самопроизвольное заживление).А – положительное флюоресцеиновое прокрашивание, формированиерубца по типу лейкомы, сохранение блефаромейбомиита (зеленыйуказатель); Б – положительное флюоресцеиновое прокрашивание вцентральной зоне дефекта, воспаление и отечность век (зеленый указатель);В – формирование рубца в зоне повреждения по типу нубекулы, гиперемияи отек пальпебральной и бульбарной конъюнктивы (зеленый указатель).2.2. Результаты морфологических исследованияПо результатам морфологических исследований на 7 сутки отмечалиэпителизацию периферических зон дефекта.
В собственном веществероговицы наблюдали отёк, лейкоцитарно-фибробластическуюинфильтрацию, присутствие большого количества фибробластов спризнаками биосинтезирующей активности (обширная цитоплазма, светлоеядро с ядрышком), а также неоваскуляризацию в поверхностных слояхосновного вещества роговицы.132Рис. 7. Микроморфологическая картина состояния центральной зоныроговицы глаза у кролика контрольной группы через 7 суток после нанесения40дефекта. Толуидиновый синий, об.40, ок.10.1 – эпителиальный пласт, наползающий на соединительнотканный регенератосновного вещества роговицы (2), кровеносный сосуд (3).Через 14 суток у всех животных, за исключением одной особи,наблюдали эпителизацию центральной области дефекта.
Здесь в структуререгенерата роговицы был обнаружен истонченный эпителиальный пласт,представленный 2-3 слоями клеток. Субэпителиально располагалась зрелаягрануляционная ткань с признаками умеренной клеточной инфильтрации,содержащая кровеносные сосуды, а под ней - фиброзная ткань с плотноупакованными,параллельнорасположеннымипучкамиколлагеновыхволокон и очагами дезорганизации. Далее индентифицировали десцеметовумембрану и внутренний эпителий.В случаях отсутствия эпителизации дефекта наблюдали слой зрелойгрануляционной ткани, сформированный тонкими рыхло упакованнымипучкамиколлагеновыхволокон,богатыйфибробластамиихорошоваскуляризованный. Под ним располагалась фиброзная ткань.112233АБ4541123В1212ГДРис.
8. Структурное состояние центральной зоны роговицы кроликаконтрольной группы на 14 сутки после нанесения дефекта. Гематоксилин иэозин, А, Г - об.10, ок.10. Б, В, Д – об.40, ок.10.А – общий вид: эпителиальный пласт(1), созревающая грануляционная ткань(2), основное вещество (3).Б, В – эпителиальный пласт (1), 2 – созревающая грануляционная ткань (2),очаги дезорганизации стромы (3), десцеметова мембрана (4), внутреннийэпителий (5).42Г, Д – случай с отсутствием эпителизации: зрелая грануляционная ткань (1),фиброзная ткань (2).В лимбальной зоне эпителиальный пласт был сохранен, в субэпителиальнойсоединительной ткани наблюдали расширение сосудов микроциркуляторногорусла и умеренную клеточную инфильтрацию (рис.9).1212АБ112В2ГРис. 9. Структурная организация лимбальной зоны роговицы у кроликаконтрольной группы на 14 сутки наблюдения.
Гематоксилин и эозин, А, В об.20, ок.10. Г, Д – об.40, ок.10.43А,Б – эпителиальный пласт (1), субэпителиальная соединительная ткань (2) срасширенными сосудами микроциркуляторного русла (стрелки) ипризнаками выраженной клеточной инфильтрации.В, Г – область, пограничная между лимбальной и центральной: расширениесосудов и клеточная инфильтрация субэпителиальной зоныТаблица 2 Морфометрические показатели роговицы кролика контрольнойоперированной группы (самопроизвольное заживление)Показатели роговицыСуммарная толщина, мкмЦентральная зона роговицыЦентЛимбалЭпителиБоуменоваСобственноДесцеметовВнутренниральньнаяальныймембранае веществоа мембранай эпителийаязонапластзонарогови-роговроговицы(эндотелий)цыицыЗначе-403,4348,40±ниz0±17,09контр19,7±6,25±0,480,43391,40±6,68±3,54±1,580,370,25*334±8,01±3,68±1,950,840,1818,75ольЗначения379±17,15226±21,4924,4±0,9210,8±0,09интактнойроговицы44Все показатели сравниваемых совокупностей относительно нормыдостоверны P£0,05Примечание: * - различия между сравниваемыми величинами не достоверны3.
Заживление роговицы глаза кролика при использовании аллогенныхстволовых клеток лимба(лимбальных стволовых клеток – ЛСК)3.1. Клиническая картинаНа 3 сутки после введения гомологичных ЛСК у животных былвыраженный блефароспазм, сочетающийся с острым блефаромейбомиитом(рис. 10Е) и гиперемия конъюнктивы в зоне введения клеточной суспензии(рис. 10Б). Сильный окулярный дискомфорт наблюдали только в одномслучае, у остальных животных признаки болезненности и фотофобииотсутствовали. Окрашивание роговицы флюоресцеином было слабойвыраженности, а степень помутнения роговицы по шкале Войно-Ясенецкогосоставляла от 1 до 4 баллов.АГБВДЕ45Рис. 10. Макроморфология глаза животных после введения суспензиилимбальных стволовых клеток на 3 сутки наблюдения.А, В – видны четкие границы трепанационной зоны, флюоресцеиноваяпроба отрицательная, степень помутнения роговицы по шкале ВойноЯсенецкого 1-2 балла; Б – гиперемия пальпебральной и бульбарнойконъюнктивы в зоне введения клеточной суспензии (стрелка); Г, Д –слабоположительная флюоресцеиновая проба в зоне повреждения, степеньпомутнения по шкале Войно-Ясенецкого 2-4 балла; Е – слабоположительноефлюоресцеиновое окрашивание, отек роговицы в зоне повреждения, острыйблефаромейбомиит (стрелка).На 7 сутки после введения ЛСК степень выраженности воспаленияпальпебральной конъюнктивы была менее выражена, чем в предыдущиесроки наблюдения, но гиперемия в зоне введения ЛСК сохранялась (рис11Б,В,стрелки).дискомфортаЯвленияблефарита,нивелировались.атакжеПоверхностноестепеньокрашиваниеокулярногороговицыфлюоресцеином наблюдали только у одного животного (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
