Диссертация (1151568), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Об.10. Ок.10.1 – эпителиальный пласт, 2 – грануляционная ткань, 3 – ткань основноговещества роговицы, 4 - очаг дистрофических изменений.На 14 сутки центральная часть дефекта по структурному оформлениюбыла неоднородной. Так, в самом центре этой зоны (рис.20 А,Б) наблюдалипризнаки фиброза, здесь, в эпителиальном пласте количество слоёвувеличилось до 4-5, клетки имели кубическую форму. Субэпителиальновизуализировалась фиброзная ткань, сформированная плотно упакованнымипучками коллагеновых волокон, богатая фибробластами и содержащаякровеносныесосуды.Собственноевеществороговицы,десцеметовамембрана и внутренний эпителий хорошо структурированы.По периферии дефекта обращает на себя внимание область, в которойпод эпителиальным пластом находилась зрелая грануляционная ткань,богатая кровеносными капиллярами, с признаками клеточной инфильтрации.57В подлежащем собственном веществе роговицы был выражен слабый отёк иумеренная клеточная инфильтрация.112243БА11223ВГРис.
21. Структурное состояние центральной зоны роговицы на 14 суткипосле введения ММСК. Гематоксилин и эозин. А – об.10, ок.10, В – об.20,ок.10, Б,Г – об.40, ок.10.А, Б – область с фиброзными изменениями: 1 – регенерировавшийэпителиальный пласт, 2 – фиброзная ткань, 3 – собственное веществороговицы, 4 – десцеметова мембрана, 5 – внутренний эпителий.В,Г – область с грануляционной тканью: 1 – эпителиальный пласт, 2 –зрелая грануляционная ткань с умеренной клеточной инфильтрацией, 3 –58собственное вещество роговицы.В лимбальной зоне зональность роговицы была сохранена (рис.22 А). Вместес тем, отмечали признаки отёка и неравномерную клеточную инфильтрацию(рис.22 Б,В,Г).
Наряду с умеренной диффузной наблюдали плотнуюдиффузную и очаговую инфильтрацию. Кровеносные сосуды при этом былирасширены.59112234АБ52112ВГРис. 22. Микроструктура лимбальной зоны роговицы глаза у животных,после введения ММСК на 14 стуки наблюдений. Гематоксилин и эозин. А –об.10, ок.10, Б,В,Г – об.40, ок.10.А – общий вид: 1 - поверхностный эпителий, 2 – субэпителиальнаясоединительная ткань с признаками клеточной инфильтрации ирасширенными кровеносными сосудами, 3 – собственное веществороговицы с явлениями отёка, 4 – десцеметова мембрана, 5 – внутреннийэпителий.Б – область с выраженной диффузно-очаговой лимфоцитарномакрфагальной инфильтрацией субэпителиальной соединительной ткани(2). 1 - поверхностный эпителий.60В - область с очаговой лимфоцитарно-макрфагальной инфильтрациейсубэпителиальной соединительной ткани (2). 1 – поверхностный эпителий.Стрелками показаны кровеносные сосуды.Г – область с умеренной диффузной клеточной инфильтрациейсубэпителиальной соединительной ткани (2).
1 – поверхностный эпителий.Стрелками показаны кровеносные сосуды.Таблица 4 Морфометрическая характеристика роговицы кролика через 14суток после применения аллогенных мезенхимальных стволовых клетокжировой тканиПоказатели роговицыСуммарная толщина, мкмВ центральной зоне роговицыЦентраЛимбаЭпителиБоуменоСобственноДесцеметовВнутреннийльнаяльнаяальныйвае веществоа мембранаэпителийзоназонапластоболочк(эндотелий)аММСК330,2±45,34Контроль403,40±18,75Интактная379±17,15407,6±19,45348,40±17,09226±21,4920,06±0,3419,7±0,4324,4±0,9215,33±0,496,25±0,4810,8±0,09296,40±6,47±4,73±1,380,320,41391,40±6,68±3,54±1,580,370,25*334±8,01±3,68±1,950,840,18роговица61Все показатели сравниваемых совокупностей относительно нормыдостоверны P£0,05Примечание: * - различия между сравниваемыми величинами не достоверныПосле субьконъюнктивального введения ММСК в области поврежденияроговицы выявлен активный регенераторный процесс с неоваскуляризацией,сопровождающийся острой воспалительной реакцией у 8 подопытныхживотных из 10.
В зоне дефекта наблюдали область с фибрознымиизменениями, в её эпителиальном пласте количество слоёв увеличилось до 45, а сами клетки имели кубическую форму. Субэпителиально обнаруженафибрознаяткань,сформированнаяплотноупакованнымипучкамиколлагеновых волокон, богатая фибробластами и содержащая кровеносныесосуды,чтосвидетельствуетоформированиинепрозрачногорубцароговицы.5. Результаты применения стромально-васкулярной фракции5.1.
Клиническая картинаНа7суткинаблюденияблефароспазм,эпифораифотофобияотсутствовали, вместе с тем, признаки конъюнктивита сохранялись.Окрашивание роговицы флюоресцеином в зоне дефекта достигало диаметра1,5-3 мм (рис. 23 А,Б), а степень её помутнения по шкале Войно-Ясенецкогосоставляла 5 баллов.62АБРис. 23.
Макроморфологическая картина состояния глаз животных на 7сутки после моделирования дефекта и введения суспендированной взвесистромально-васкулярной фракции.А – блефароспазм, эпифора и фотофобия отсутствуют, положительноеокрашивание флюоресцеином в центральной зоне повреждения;Б – отсутствие окулярного дискомфорта при положительномфлюоресцеиновом окрашивании роговицы, видны четкие границы зонытрепанации, незначительная гиперемия век.На 14 сутки у всех кроликов подопытной группы регистрировализаживление дефекта роговицы, при отсутствии признаков воспаленияконъюнктивы, блефароспазма, слезотечения и светобоязни. У всех особейроговица была прозрачная, отсутствовала ее неоваскуляризация, границытрепанационной зоны были четкими.
Степень помутнения роговицы пошкале Войно-Ясенецкого составляла 0-3 баллов.Исключение составил один случай, в котором наблюдали локальноепрокрашивание роговицы диаметром 1 на 1,5 мм. Несмотря на это, у данногоживотного признаков окулярного дискомфорта не наблюдали (рис. 27Б).63АБРис. 24. Картина глаза после введения СВФ на 14 сутки наблюдения.А – видны четкие границы трепанации при отсутствии окрашиванияфлюоресцеином, степень помутнения роговицы по шкале ВойноЯсенецкого 1 балл;Б – положительное окрашивание дефекта флюоресцеином (1 на 1,5 мм) приотсутствии окулярного дискомфорта, степень помутнения роговицы пошкале Войно-Ясенецкого 3 балла.645.2. Результаты микроскопических исследованийНа 14 сутки после введения стромально-васкулярной фракции вцентральнойзонероговицыотмечалиэпителизациюдефектаисубэпителильно - формирование фиброзной ткани с плотно упакованнымипучками коллагеновых волокон, богатой фибробластами (рис.25).
Основноевеществороговицыпредставленоплотнорасположеннымипучкамиколлагеновых волокон, без явлений отёка.1122334АБРис. 25. Микроморфологическая картина роговицы глазаэкспериментального животного после введения СВФ на 14 суткинаблюдений. Центральная зона роговицы, область с явлениями фиброза.Гематоксилин и эозин, А–об.10, ок.10. Б – об.10, ок.20.1-наружный эпителий, 2 – фиброзная ткань регенерата с явлениямимакрофагально-фибробластической инфильтрации, 3 – основное веществороговицы, 4 – десцеметова мембрана.По периферии от центральной области была сформирована зона ссубэпителиальными созревающими грануляциями (рис.26), при этом как вгрануляционной ткани, так и в собственном веществе роговицы быливыражены признаки отёка.65121324А5Б3Рис. 26. Микроструктура центральной зоны роговицы глаза у животныхпосле введения СВФ на 14 сутки наблюдений.
Область с созревающимигрануляциями. Гематоксилин и эозин, А–об.10, ок.10. Б – об.10, ок.20.1-наружный эпителий, 2 – созревающая грануляционная ткань, 3 –основное вещество роговицы с признаками отёка, 4 – десцеметовамембрана, 5 – внутренний эпителий.В лимбальной зоне роговицы обращает на себя внимание склерозсубэпителиальной рыхлой соединительной ткани, с умеренным отёком идиффузной клеточной инфильтрацией. Собственное вещество роговицыхарактеризуется признаками умеренного отёка и незначительной диффузнойклеточной инфильтрацией. Десцеметова мембрана и внутренний эпителийзонально дифференцированы (рис.27).661234А51213БВ2Рис.
27. Структурное состояние лимбальной зоны роговицы у животных,после введния СВФ на 14 сутки наблюдений. Гематоксилин и эозин, А –об.10, ок.10, Б – об.10, ок.20, В – об.40, ок.10.А - общий вид: 1 – наружный эпителий, 2 – субэпителиальнаясоединительная ткань с явлениями фиброза, 3 – собственное веществороговицы с признаками умеренного отёка, 4 – десцеметова мембрана,5 – внутренний эпителий.Б – область с умеренной клеточной инфильтрацией и признаками67прогрессирующего фиброза. 1 – наружный эпителий, 2 - субэпителиальнаясоединительная ткань с явлениями фиброза, 3 – собственное веществороговицы.В – область с выраженными склеротическими изменениямисубэпителиальной соединительная ткани (2), 1 - наружный эпителий.Стрелками показаны кровеносные сосуды с признаками склероза стенки.Морфометрическая характеристика роговицы представлена в таблице 5.Таблица 5.
Морфометрические характеристики роговицы кролика через 14суток после применения стромально-васкулярной фракцииПоказатели роговицыСуммарная толщина , мкмЦентральная зонаСВФЦентралЛимбаЭпителиБоуменовСобственноДесцеметовВнутренниьнаяльнаяальныйае веществоа мембранай эпителийзоназонапластоболочка225,81±432,5±12,35±7,75±0,5418,74КонтрольИнтактная403,40±18,75379±17,1519,62348,40±17,09226±21,490,4419,7±6,25±0,480,4324,4±0,9210,8±0,09(эндотелий)219,80±5,06±3,93±1,600,510,51*391,40±6,68±3,54±1,580,370,25*334±8,01±3,68±1,950,840,18роговицаВсе показатели сравниваемых совокупностей относительно нормыдостоверны P£0,0568Примечание: * - различия между сравниваемыми величинами не достоверныТаблица 6. Сравнительная оценка скорости эпителизации роговицы отЛСКММСКСВФКонтроль3-5 суток5,3±1,15,1±13±0,5*3,5±0,77 суток6,2±1,25,9*±1,24,5±1,15,1±114 суток6,4±0,16,3±0,26,1±0,34,5±1,5периферии к центру (мм)Все показатели сравниваемых совокупностей относительно контролядостоверны P£0,05Примечание: * - различия между сравниваемыми величинами не достоверныТаблица 7.
Сравнительная оценка результатов применения стволовыхклеток различных типов в зависимости от степени помутненияроговицы по шкале Войно-Ясенецкого (срок 14 суток)Степень помутнения роговицыЛСК2±2ММСК4±2СВФ2,5±2Контроль6,25±3Все показатели сравниваемых совокупностей относительно контролядостоверны P£0,0569Таблица 8. Сравнительная оценка толщины слоевтканей роговицы кролика1 Контроль2 ММСК3СВФЦентральная зонаЛимбальная зонаЭпителиальный слойБоуменова оболочкаСтромаДесцеметова403,40±18,75348,4 ±17,0919,79 ±0,436,25 ±0,48381,4 ±1,486,68±0,49мембранаЭндотелиальныйслой3,54 ±0,25*46 (норма)ГЛСК330,20225,81345,50±45,34±18,74±12,97407,60432,50398,00±19,45±19,62±19,8620,0612,3513,86±0,34±0,44±0,6115,337,758,70±0,49±0,54±0,29296,40219,80325±1,38±1,60±1,286,475,065,68±1,32±0,51±0,394,733,933,84±0,41±0,51*±0,55*379 ±17,15226 ±21,4924,4 ±0,9210,8 ±0,09334 ±1,958,01 ±0,843,68 ±0,18Все показатели сравниваемых совокупностей относительно нормыдостоверны P£0,05Примечание: * - различия между сравниваемыми величинами не достоверны70Клиническая апробацияПрименение мезенхимных стволовых клеток нами было апробированона пяти собаках породы метис с незаживающими эрозиями роговицы послеотсутствия положительной динамики на медикаментозное лечение.Пациентам с данной патологией, после удаления патологическогоэпителия вводили субьконъюнктивально суспендированную взвесь ММСК.Результаты учитывали в первые, третьи и седьмые сутки при помощифлюоресцеинового теста и биомикроскопии переднего отрезка глаза щелевойлампой фирмы Shin.На седьмые сутки дефект был полностью эпителизирован у всехпациентов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
