Диссертация (1151568), страница 8
Текст из файла (страница 8)
11В), а степеньеё помутнения по шкале Войно-Ясенецкого составила от 1 до 4 баллов.АБВРис. 11. Макрокартина глаз кроликов после моделирования дефекта ивведения суспензии ЛСК на 7 сутки наблюдения.А, Б – окулярный дискомфорт и окрашивание роговицы флюоресцеином46отсутствуют, видны четкие границы трепанационной зоны, имеет местогиперемия бульбарной конъюнктивы в месте введения клеточной суспензии;В – слабоположительная флюоресцеиновая проба, сильная гиперемияпальпебральной конъюнктивы в зоне введения клеточной суспензии(стрелка)На 14 сутки после введения ЛСК окулярный дискомфорт у всехживотных отсутствовал, гиперемия конъюнктивы и явления блефаритасохранялись только у одного животного (рис.
12А,Б). Флюоресцеиноваяпроба была отрицательна. Границы зоны трепанации были нечёткими, быловыявлено лишь центральное помутнение роговицы в виде нубекулы (рис.12А,Б), а степень её помутнения по шкале Войно-Ясенецкого составила от 0до 4 баллов.АБВРис. 12. Клиническая картина глаза кроликов после введения ЛСК на 14сутки. А, Б – окулярный дискомфорт отсутствует, границы трепанационнойзоны размыты, степень помутнения по шкале Войно-Ясенецкого 2-4 балла,сохранена воспалительная реакция век (стрелка) и гиперемия конъюнктивы(стрелка); В – окулярный дискомфорт полностью отсутствует, степеньпомутнения роговицы по шкале Войно-Ясенецкого 0 баллов.3.2. Результаты морфологических исследованийПри морфологическом исследовании области повреждения через 7 сутоквыявлено полное закрытие дефекта роговицы регенератом, имеющим47соединительнотканную и эпителиальную части.
В центральной частирегенерата (рис.13 А) в структуре эпителиального пласта насчитывалось 3-4слоя уплощенных клеток, боуменова мембрана была представлена рыхлоупакованнымипучкамикровеноснымиколлагеновыхсосудами.дифференцироваласьзрелаяВволоконсобственномгрануляционнаяисрасширеннымивеществероговицыфибрознаятканьсверетеновидными фибробластами и тонкими пучками коллагеновых волокон.В периферической части регенерата (рис.13 Б) в эпителиальном пластеколичество слоёв возрастало до 8-10, они характеризовались признакамивертикальной анизоморфии.Соединительнотканная часть регенератапредставлена тонковолокнистой фиброзной тканью, богатой фибробластами.Примечательноволокон,резкоразнонаправленнаяотличающеесяориентацияотпучковхарактерногоколлагеновыхдлянормывзаимопараллельного расположения.12А48123БРис. 13.
Структурная организация роговицы кролика после введения ЛСК на7 сутки наблюдения. Центральная (А) и периферическая (Б) зоны регенерата.Толуидиновый синий, об.40, ок.10.А – эпителиальный пласт (1) с уменьшенным количеством слоев.Собственное вещество роговицы (2) сформировано плотно упакованнымипучками коллагеновых волокон, среди которых видны фибробласты.Субэпителиально видны расширенные капилляры (стрелки).Б – эпителиальный пласт с признаками вертикальной анизоморфии(1), уплотнение расположения пучков коллагеновых волокон и увеличениеколичества фибробластов в области боуменовой оболочки (2), фибрознаятканьсразнонаправленнымипучкамиколлагеновыхволоконвсобственном веществе роговицы (3).Через 14 суток наблюдений выявлено уплотнение и истончениецентральнойчастироговицыбезвыраженныхпризнаковотёка.Восстановление эпителиального пласта выражалось в присутствии 5-6 слоёв49эпителиоцитов.
Собственное вещество роговицы сформировано фибрознойтканью, в поверхностных слоях которой обнаружен диффузный клеточныйинфильтрат.В периферической зоне регенерата визуализировали эпителиальныйпласт, боуменова мембрана не обнаружена. Собственное вещество роговицыобразовано фиброзной тканью с признаками отёка и диффузной клеточнойинфильтрацией, структера десцеметовой мембраны и заднего эпителия быливосстановлены. Субэпителиально выявлена зона незрелой фиброзной ткани.1212354АБ1ВРис. 14. Состояние центральной2зоны роговицы кролика на 14 сутки послевведения ЛСК. Гематоксилин и эозин, А, Б – об.20, ок.10. В – об.40, ок.10.50А – общий вид: 1 - эпителиальный пласт, 2 – фиброзная ткань регенерата, 3 –собственное вещество роговицы, 4 – десцеметова мембрана, 5 – внутреннийэпителий.Б - в собственном веществе роговицы (2) выражен отёк и диффузная клеточнаяинфильтрация.
1 – наружный эпителий.Вобластилимбаэпителиальныйпластбылсохранен,всубэпителиальной рыхлой соединительной ткани обнаружены расширенныекровеносные и лимфатические сосуды, умеренная клеточная инфильтрация.В собственном веществе роговицы выявлены сосуды микроциркуляторногорусла, незначительный отёк межклеточного вещества и диффузная клеточнаяинфильтрация.112234А5Б51ВРис.
15. Микроморфологическая характеристика лимбальной зоныроговицы у животных на 14 сутки после моделирования дефекта ивведения суспензии ЛСК. Гематоксилин и эозин.А,В – об.20, ок.10. Б – об.40, ок.10.А – общий вид: 1 - эпителиальный пласт, 2 – субэпителиальнаясоединительная ткань, 3 – собственное вещество роговицы, 4 –десцеметова мембрана, 5 – внутренний эпителий. Кровеносные сосудыуказаны стрелками.Б – умеренная клеточная инфильтрация и отёк в субэпителиальнойсоединительной ткани (2), 1 – наружный эпителий.52Таким образом, после трансплантации ЛСК через 7 суток в 100%случаев происходила полная эпителизация дефекта роговицы, в то время какв контрольной группе сохранялся поверхностный дефект, а в 50% –персистирующая эрозия.
Через 14 суток в группе ЛСК выявленоформирование более нежного бельма роговицы по сравнению с контрольнойгруппой (5 и 10 баллов по шкале Войно-Ясенецкого, соответственно). Приэтом степень васкуляризации в группе ЛСК по сравнению с контролем,составила 1 и 3 балла, а выраженность воспалительной реакции – 0 и 1 балл,соответственно. Морфометрические характеристики роговицы представленыв таблице 3.Таблица 3 Морфометрические характеристики роговицы кролика через 14суток после нанесения травмы и применения аллогенных лимбальныхстволовых клетокПоказатели роговицыСуммарная толщина, мкмВ центральной зоне роговицыЦентралЛимбальЭпителиБоуменовСобствеДесцеметовВнутреннийьнаяная зонаальныйанноеа мембранаэпителийзонарогови-пластмембранавеществроговиццы(эндотелий)оыЛСК345,50±12,97КонтрольНорма403,40±18,75379±17,15398±19,86348,40±17,09226±21,4913,86±8,70±0,290,6119,7±6,25±0,480,4324,4±0,9210,8±0,09325±5,68±3,84±1,280,390,55*391,40±6,68±3,54±1,580,370,25*334±8,01±3,68±1,950,840,1853Все показатели сравниваемых совокупностей относительно нормыдостоверны P£0,05Примечание: * - различия между сравниваемыми величинами не достоверны4.
Заживление роговицы глаза кролика при использовании аллогенныхмезенхимных стволовых клеток жировой ткани (ММСК)4.1. Клиническая картинаНа 3 сутки после введения ММСК во всех случаях наблюдалигиперемию конъюнктивы в зоне введения клеточной суспензии. У одногоживотного был выражен блефароспазм, признаки блефаромейбомиита (рис.16В) и окрашивание роговицы флюоресцеином(рис. 16 А). Степень еёпомутнения по шкале Войно-Ясенецкого составила от 1 до 4 (рис. 16 Б)баллов.АБВРис. 16. Макроморфологическая картина глаза при использовании аллоММСК на 3 сутки эксперимента.А –. незначительный окулярный дискомфорт, имеют место четкие границызоны трепанации, слабоположительная флюоресцеиновая проба;Б – окулярный дискомфорт отсутствует, флюоресцеиновая пробаотрицательная, степень помутнения роговицы по шкале Войно-Ясенецкого– 4 балла;В –острый блефаромейбомиит, окрашивание флюоресцеином зоныповреждения отсутствует, степень помутнения роговицы по шкале Войно-54Ясенецкого равна 1 баллу;На 7 сутки эксперимента в подопытной группе животных, которымвводилиаллогенныхММСК,признакиокулярногодискомфортаотсутствовали, вместе с тем, сохранялось незначительное (на 1,5 мм в зонедефекта) окрашивание роговицы флюоресцеином.
Степень ее помутнениярпо шкале Войно-Ясенецкого соответствовала 3-5 баллам (рис. 17).Рис. 17. Клиническая картина глаза кролика после введения алло-ММСК на7 сутки наблюдения. Окулярный дискомфорт, блефароспазм, фотофобияотсутствуют. Помутнение роговицы по шкале Войно-Ясенецкого 3-5баллов. Положительная флюоресцеиновая проба в нижней частимоделированного дефекта.На 14 сутки после введения ММСК блефароспазм и признакиблефаромейбомиита были выявлены у двух животных (рис.
18 А,Б),поверхностное окрашивание роговицы флюоресцеином, диаметром1 на 1 мм- только у одного подопытного животного (рис. 18А). В одном случаенаблюдали неоваскуляризацию дефекта по его периферии и стромальный55отек (рис. 18А). Степень помутнения роговицы по шкале Войно-Ясенецкогосоставила от 2 до 6 баллов.АБРис. 18. Макрокартина глаза экспериментальных животных на 14 суткипосле введния алло-ММСК.А – воспалительная реакция век, слабоположительное окрашиваниероговицы флюоресцеином в зоне дефекта, неоваскуляризация роговицы состороны зоны введения клеточной суспензии (стрелка);Б – присутствует блефаромейбомиит, сохранен незначительный окулярныйдискомфорт, флюоресцеиновый тест – отрицательный, степень помутненияроговицы по шкале Войно-Ясенецкого 4 балла.4.2.
Результаты морфологических исследованийНа7-есуткипосле трансплантациигомологичныхмезенхимныхстволовых клеток жировой ткани в большинстве случаев наблюдалипрактически полное закрытие дефекта роговицы регенератом, структурнооформленным эпителиальным пластом и соединительной тканью.Тонкий эпителиальный пласт представлен 2-3 слоями эпителиоцитов, изкоторыхбазальныеимеликубическуюформу,аповерхностные–уплощенную. Субэпителиально располагалась грануляционная ткань с56явлениями умеренного отёка и клеточной инфильтрации. В собственномвеществе роговицы выявлены очаги деструкции.1243Рис 19. Микроморфологическая картина роговицы кролика на 7 суткипосле моделирования дефекта и введения суспендированной взвесиММСК. Толуидиновый синий.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
