Диссертация (1150384), страница 15
Текст из файла (страница 15)
При этом в случае инсулинанаблюдается увеличение параметров миграции и уменьшение эффективности, чтоможет быть вызвано возможными взаимодействиями с молекулами полимеров129PEI-Mal.Таблица 14. Сравнительные оценочные характеристики методов КЗЭ иКЭХ при определении белковКЭХМетодКЗЭ0,1М фосфатный буферРабочий электролит15.(рН 2,2),(рН 2,2)10% CH3CN-20кВ, ток -84-97мкАУсловия КЭТаблицаPLOTметакрилатныеколонки0,1М H3PO4PLOT-PEI-MalколонкиУФ: λ=214 нмСопоставлениеаналитическиххарактеристикприэлектрофоретическом разделении белков методами КЭХ и КЗЭ.КонтролируемыйпараметрКЗЭЭффективность10-15разделения (т.т./м)тыс.Предел обнаружения,мг/млВремя анализа, минФактор селективности(α)Полые колонки КЭХМетакр.56 тыс.PEI-Mal50÷70тыс.МонолитныеколонкиМЭКХА и В:25÷35тыс.10÷30 тыс.С: до 105 .1 – 0,50,005-0,0005 –А и В:(без0,0010,0001конц.)(с конц.)(с конц.)102520101,0-1,31,031,05÷1,101,5÷2,11,01÷1,042,81,81,01,50,80,02÷0,060,08÷0,10С: 0,005А и В: 12С: 30Воспроизводимостьпараметров миграции(RSD, %)130ЗАКЛЮЧЕНИЕ1.Методом электрокинетической хроматографии установлено, чтосверхразветвленные полиэтиленимины с различной массой ядра и степеньюфункционализациимодифицируютмальтозой,стенкипсевдостационарнойвведенныекварцевогофазы,чтовсоставкапилляраповышаетрабочегоибуфера,выполняютрольвоспроизводимость параметровмиграции и селективность разделения белков (альбумина, миоглобина, инсулина,лизоцима).2.Выявлен эффект on-line концентрирования белков, сопровождаемыйобращением электроосмотического потока и увеличением эффективности до4×105 т.т./м, при использовании в составе рабочего буфера (рН 2,2) дендритногополимера с наименьшей функционализацией мальтозой (PEI-Mal С).3.ПредложенатехнологияизготовленияPLOT-колонокдлякапиллярной электрохроматографии с использованием в качестве стационарныхфаз метакрилатных и дендритных полимеров на основе полиэтиленимина смальтозной оболочкой, обеспечивших высокую селективность разделения ивоспроизводимость параметров миграции белков (RSD%: 0,5-1,8)4.внутреннейПоказано, что в качестве оценочного контроля сорбции белков наповерхностиPLOT-колонок,модифицированныхдендритнымполимером, может быть использован метод эллипсометрии.
Установлено, чтоколичество адсорбированного белка не превышает 1 мг/м2, что соответствует <0,1% (pH=2,2) и 4 мг/м2, или 0,4% (pH=8,5) от общего содержания белка врастворе.5. Выявлены возможности различных вариантов on-line концентрированияальбумина,лизоцима,модифицированныхинсулинаиолигосахариднымимиоглобинапроизводныминаPLOT-колонках,сверхразветвленногополиэтиленимина. Установлено, что сочетание электростэкинга и стэкинга сбольшим объемом вводимого образца обеспечивает концентрирование белков сфакторами концентрирования 900 – 1320.1316.Предложен электрофоретический способ определения альбумина вмоче и сыворотке крови (предел обнаружения 0,1 мкг/мл, N = 80000т.т./м).132СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ТЕРМИНОВ2DGE–двумерныйгель-электрофорез(two-dimensionsGelElectrophoresis)AIBN–азо-бис-изобутиронитрилDPPH–1,1-дифенил-2-пикрилгидразилGMA–глицидилметакрилатFASI (Field amplified sample injection)–электростэкингFASS (field-amplified sample stacking)–стэкинг с усилением поляHC-FASS (head -column field-amplified sample stacking)–стэкингсусилением поля с водной пробкойLVSS (large volume sample stacking) –MTS–стэкинг с большим объемом образца(триметоксисилил)пропиловый эфир метакриловой кислоты–OT (open-tubular)–Pamam-SBDполая (колонка)полиамидоаминный дендримерPEI–полиэтилениминPEI-Mal–сверхразветвленныйполиэтиленимин,модифицированныймальтозойPEI-Mal A5 – сверхразветвленный полиэтиленимин (Mw 5000 Да, Mn 3600 Да),степень функционализации мальтозой 90%PEI-Mal A25–сверхразветвленный полиэтиленимин (Mw 25000 Да, Mn9600 Да), степень функционализации мальтозой 90%133PEI-Mal В5 – сверхразветвленный полиэтиленимин (Mw 5000 Да, Mn 3600 Да),степень функционализации мальтозой 40%PEI-Mal В25–сверхразветвленный полиэтиленимин (Mw 25000 Да, Mn9600 Да), степень функционализации мальтозой 40%PEI-Mal С5 – сверхразветвленный полиэтиленимин (Mw 5000 Да, Mn 3600 Да),степень функционализации мальтозой 20%PEI-Mal С25– сверхразветвленный полиэтиленимин (Mw 25000 Да, Mn 9600Да), степень функционализации мальтозой 20%pH-mediated stackingPLOT––стэкинг с изменением pHколонки с иммобилизованным пористым слоем (porous-layeropen-tubular)PLOT-PEI-Mal–капиллярные колонки с иммобилизованным тонким слоемполиэтиленимина, модифицированного мальтозойSEF (stacking efficiency factor)–факторконцентрированияБМА–бутилметакрилатБФАДМА –бис-фенолдиметакрилатВЭЖХ–высокоэффективная жидкостная хроматографияГХ–газовая хроматографияДДСН–додецилсульфат натрияДМСО–диметилсульфоксидДМФА–N,N-диметилформамидэффективности134КЗЭ–капиллярный зонный электрофорезКЭХ–капиллярная электрохроматографияМЭКХ–мицеллярная электрокинетическая хроматографияМЭС–моно-(2-(метакрилоилокси)-этилсукцинатаOT-КЭХ–капиллярная электрохроматография на полых колонкахПАУ–полициклические ароматические углеводородыПАВ–поверхностно-активные веществаПоли-ε-НУЛ–СРПсверхразветвленные полимеры–ЭДМА (EGDMA) –ЭОП–поли- ε-натрий-ундеканоиллизинатэтиленгликольдиметакрилатэлектроосмотический потокOn-line концентрирование: внутрикапиллярное концентрированиеSweeping–свипинг:концентрированиеаналитовпсевдостационарнойфазой (мицеллами или комплексообразующими веществами), которая проникает взону образца, не содержащую мицелл.Дендриграфты: разветвленная полимерная архитектура, промежуточная междудендримерами и СРПДендример: высокоорганизованные, трехмерные, монодисперсные полимеры сдеревообразной, глобулярной структурой и большим числом функциональныхгруппМикроальбуминурия: появление в моче небольшого уровня альбумина (более20мг/л).135Протеомика: наука, основным предметом изучения которой являются белки, ихфункции и взаимодействия в живых организмах, в том числе — в человеческом.Эллипсометрия:высокочувствительныйоптический методисследованияповерхностей и границ раздела различных сред (твердых, жидких, газообразных),основанный на изучении изменения состояния поляризации света послевзаимодействия его с поверхностью границ раздела этих сред.136СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.Бессонова Е.А., Поликарпов Н.А., Карцова Л.А., Потолицына В.Е.Исследование возможностей новых сверхразветвленных полимеров в качествепсевдостационарных фаз в электрокинетической хроматографии при определениибелков // Ж.
Вестник СПбГУ. 2011. Сер. 4, вып. 1. С. 100-106.2.Capillary electrochromatography of peptides and proteins. Review / Y. Li[et al.] // Electrophoresis. 2004. V. 25. P. 2242–2256.3.Capillary Electrochromatography: A Review / M.M. Robson [et al.] // J. ofMicrocolumn Separations. 1997. V.9. P. 357-372.4.WenE.,AsiaieR.,HorvathCs.Dynamicsofcapillaryelectrochromatography: II. Comparison of column efficiency parameters in microscalehigh-performance liquid chromatography and capillary electrochromatography // J.Chromatogr. A. 1999.
V. 855. P. 349–366.5.Preparation and characterization of monolithic polymer columns forcapillary electrochromatography / T. Jiang [et al.] // J. Chromatogr. A. 2001. V. 923. P.215–227.6.Xiang R., Horvath Cs. Fundamentals of capillary electrochromatography:migration behavior of ionized sample components // J. Anal. Chem. 2002. V. 74.
P.762–770.7.Rathore A.S., Horvath Cs. Separation parameters via virtual migrationdistances in high-performance liquid chromatography, capillary zone electrophoresisand electrokinetic chromatography // J. Chromatogr. A. 1996. V. 743. P. 231–246.8.Vissers J.P.C., Claessens H.A., Coufal P. Calculation of retention factors incapillary electrochromatography from chromatographic and electrophoretic data // J.High Resol. Chromatogr. 1995. V. 18. P. 540–544.1379.Bowser M.T., Chen D.D.Y. The effect of complexation additives onanalyte migration behavior in capillary electrochromatography // J.
Electrophoresis.1998. V. 19. P. 1452–1460.10.Zhang J., Zhang S., Horvath Cs. Capillary electrochromatography ofpeptides on a column packed with tentacular weak cation-exchanger particles // J.Chromatogr. A. 2002. V. 953. P. 239-249.11.Zhang J., Zhang S., Horvath Cs. Rapid separation of peptides and proteinsby isocratic capillary electrochromatography at elevated temperature // J. Chromatogr.A. 2001. V.
914. P. 189-200.12.Xiang R., Horvath Cs. Fundamentals of capillary electrochromatography:migration behavior of ionized sample components // J. Anal. Chem. 2002. V. 74. P.762-770.13.Schweer C., Kenndler E. Electrophoresis in fused-silica capillaries: theinfluence of organic solvents on the electroosmotic velocity and the zeta potential // J.Anal. Chem. 1991. V.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
