Диссертация (1150106), страница 12
Текст из файла (страница 12)
В подобных случаяхцелесообразно изменить экспериментальные условия количественного анализаметодомПСДтак,чтобыизбежатьопределяемых содержаний аналитов.74стольсущественныхвариацийТаблица 4.8 Сравнение результатов количественного анализа методом последовательных стандартных добавок с использованиемразличных способов экстраполяцииАнализируемый образец17.9Заданное содержание аналита**17.5 мкг/млЛогистическаярегрессия***18.3(3); 18.4(4) [0.1]Гиперболическая (→ ∞)23.725 мкг/мл25.3(3); 25.3(4) [0.1]Гиперболическая (→ ∞)25.017.5 мкг/мл37.3(3); 37.3(4) [0.1]Гиперболическая (→ ∞)27.025 мкг/мл63.7(3); 63.7(4) [0.001]Линейная (→ 0)17.819 мкг/мл4.8(3); 16.5(4) [0.1]Гиперболическая (→ ∞)10.613.5 мкг/мл13.4(3); 13.4(4) [0.1]Гиперболическая (→ ∞)6.58.8 мг6.4(3); 8.3(4) [0.01]Гиперболическая (→ ∞)6.06.5 мг5.5(3); 5.5(4) [0.01]70.2(200), 69.3(300), 57.9(400),57.3(500)Гиперболическая (→ ∞)48.850 мкг/мл63.7(3); 63.7(4) [0.01]726(100), 634(200), 623(300)Гиперболическая (→ ∞)563600 мкг/мл660(3); 779(4) [1]11.
То же672(100), 563(200), 500(300)Гиперболическая (→ ∞)427400 мкг/мл747(3); 681(4) [1]12. Моноэтаноламин в водныхрастворах (табл. 4.5)13. То же0.23(0.375), 0.35(0.875)Линейная (→ 0)0.140.125 мкг/мл0.126(3); 0.111(4) [1]1.88(1.0), 1.84(2.0)Линейная (→ 0)1.922.0 мкг/мл1.86(3); 1.86(4) [1]1. Тест-смеси для области отсутствия инертности хроматографических систем (табл. 4.13)2. То же3. То же4. То же5. То же6.
То же7. Гидрофобный аналит вгидрофобной матрице (табл. 4.2)8. Гидрофильный аналит вгидрофильной матрице (табл.4.2)9. 3-(2,2,2-триметилгидразиний)пропионовая кислота (ТНР)в моче (табл. 4.6)10. То жеИсходные данные, Mх(Мдоб)ЭкстраполирующаяфункцияГиперболическая (→ ∞)Мэкстраполир*26.51(20.5), 25.69(41),24.76(61.5), 24.12(82)43.0(35), 40.9(52.5), 33.5(70),31.8(87.5)79.79(50), 73.03(75), 58.51(100),42.69(125)16.97(19), 17.07(38), 17.09(57),15.7(76), 15.48(95)15.77(12.5), 13.1(25), 12.63(37.5),11.72(50), 13.57(62.5)5.8(8.73), 6.2(17.46), 6.2(26.19),6.4(34.92)4.52(8.22), 5.43(16.44),5.54(24.66), 5.46(32.88)17.94(17.5), 18.89(35)****,18.26(52.5), 18.08(70)*) Жирным шрифтом выделены экстраполированные значения, совпадающие с заданным содержанием аналитов в пределах ± 15 %; **) масса (мг) иликонцентрация (мкг/мл); ***) в круглых скобках – число параметров логистической регрессии (3 или 4), в квадратных – коэффициент масштабированиянезависимой переменной; ****) курсивом выделены значения, исключенные при линейной или гиперболической экстраполяции.4.7Характеристика инертности хроматографических системПодинертностьюотсутствиесильнохроматографическойвыраженныхсистемыэффектовможносорбциипониматьаналитоввхроматографических системах, что сказывается на результатах количественныхопределений.Такиеэффектысорбцииможноклассифицировать,какнедостаточную инертность хроматографических систем, поэтому проверкаоборудования на соответствие этому критерию должна быть неотъемлемойчастью любого анализа.Изначально, как уже упоминалось, тест-смеси использовали дляхарактеристики капиллярных колонок.
Гроб и сотр. [49] обобщили требования,предъявляемые к методикам оценки колонок.Таблица4.9.КомпонентыGrobtestmixturesвпорядкеиххроматографического элюирования на колонке со стандартными неполярнымиполидиметилсилоксановыми неподвижными фазамиКомпонентRI± sRI(-)-2,3Бутандиол824±32н-Декан10001-ОктанолКонцентрацияв смеси (мг/л)Концентрация всмеси (мг/л)КомпонентRI± sRI2,6-Диметиланилин1143 ±113228Метилдеканоат1307 ±3421066 ±536Дициклогексиламин1398 ±831Нонаналь(редко)1086 ±540Метилундеканоат1408 ±342н-Ундекан110029Метилдодеканоат1507 ±4412Этилгексановая кислота1123 ±225338Алканы и метилалканоаты используют для оценки эффективностикапиллярных колонок (расчета числа теоретических тарелок) по сигналу 1октанола предложено оценивать влияние адсорбции за счет остаточныхсиланольных групп, а нонаналя- адсорбцию альдегидов не связанную свлиянием водородных связей.
Основным в оценке инертности, то естькислотных или основных свойств поверхности, хроматографических колонокявляются отношения площадей (высот) пиков слабого основания и слабойкислоты и более сильного основания и кислоты.представляетсято,чтоотношенияпараметровГлавной проблемойпиковнаединичныххроматограммах можно сравнивать только с заданным составом тест-смеси.Известные ранее принципы контроля инертности хроматографическихсистем предполагали использование определенных компонентов в смеси [48],предлагаемый [81] принцип контроля инертности систем жестко не связан скакими-либовеществами.Наборыкомпонентов,используемыхдляприготовления тест-образцов могут быть изменены в зависимости отдоступности веществ и характера конкретных задач, решаемых конкретнойлабораторией.
К основным принципам выбора тест-веществ следует отнестиминимальное число компонентов в таких образцах (три) и их химическуюприроду. Один из них (условное обозначение NP) должен обладатьминимальной полярностью, т.е. относиться к ряду алканов. В качестве второгоцелесообразно выбрать полярное соединение не имеющее активных атомовводорода (P), тогда как третье должно представлять собой полярное соединениеимеющее активные атомы водорода (PN) (предпочтительнее в составегидроксильных групп).
Разности их индексов удерживания (ИУ) должны бытьдостаточно большими, что позволит использовать такие смеси не только скапиллярными, но и с насадочными колонками. При этом для болееотчетливого выявления эффектов сорбции, компоненты должны быть неслишком низкокипящими, поскольку для относительно летучих веществ такиеэффекты выражены в меньшей степени. В соответствии с вышеуказанными77рекомендациямиавторы[81]использовалиследующиекомпоненты:бутилцеллозольв (PH), нитробензол (P), н-тридекан (NP).Такие образцы должны существовать в виде нескольких растворов сразными абсолютными концентрациями компонентов (используется серияразбавлений 1:1, 1:10, 1:100, 1:1000 при необходимости этот ряд может бытьпродолжен), поскольку сорбционные эффекты хроматографических системдолжны проявляться при минимальных содержаниях компонентов и обычномалозаметныдляконцентрированныхрастворов.Именносравнениерезультатов для нескольких тест образцов позволило авторам выявить тотуровень концентраций компонентов, при котором начинает сказыватьсяотсутствие инертности хроматографической системы.Ещеоднимпредложениемавторовколичественная обработка результатов,воспроизводимостьДостаточноабсолютныхограничитьсябылаобязательнаяпричем не нужно оцениватьплощадейоценкой[81]хроматографическихвоспроизводимостипиков.относительныхплощадей пиков, рассчитываемых внутренней нормализацией:Siотн = Si/∑Si(4.10)где Siотн – относительная площадь компонента тест-смесиТакимобразом,дляабсолютными концентрациямиотношений,имеемнаборкаждогоизтест-образцов,компонентовSiотнсприотличающихсяпостоянствесоответствующимиихстандартнымиотклонениями sSi.
Теоретически, если бы хроматографические системыобладали идеальной инертностью, все такие наборы значений должны бытьодинаковыми, но, в действительности, из-за неидеальности таких систем онистатистически значимо отличаются. При переходе к более разбавленнымрастворам в первую очередь подвержены дискриминации относительныеплощади пиков полярных компонентов, имеющих активные атомы водорода.Причиной этого является их сорбция элементами газовых линий, что особеннопроявляется при использовании приборов устаревших моделей [51].784.7.1 Оценка инертности хроматографической системы при анализесодержащих камфору фармацевтических препаратовПеред анализом содержащих камфору фармацевтических препаратовметодом ПСД, о котором говорилось в п.
4.2 основываясь на вышеуказанныхрекомендациях провели проверку инертности хроматографической системы.Физико-химическиесвойствавыбранныхкомпонентовтест-системыпредставлены в табл. 3.1 главы 3. Некоторые из них были использованы ранеекак компоненты так называемых Grob Test Mixtures (2,3-бутандиол) [49], адругие (втор.-бутилтолуол и 1-гептанол) выбраны впервые.В таблице 4.10 представлены исходные данные для контроля инертностииспользуемой хроматографической системыТаблица 4.10 Исходные данные для контроля инертности используемойдляопределениясодержащихкамфоруфармацевтическихпрепаратовхроматографической системыКомпонент2,3-Бутандиол1-Гептанолвтор.-БутилтолуолСоотношениекомпонентовпиков ± станд.отклонения, %20,5 ± 0,21:1:1(смесь без растворителя)30,2 ± 0,149,2 ± 0,219,5 ± 0,82,3-Бутандиол1-ГептанолОтносительные площадиРазбавление в 10 раз30,2 ± 0,2втор.-Бутилтолуол50,3 ± 1,02,3-Бутандиол14,1 ± 1,21-ГептанолРазбавление в 100 раз31,4 ± 0,3втор.-Бутилтолуол54,5 ± 1,42,3-Бутандиол7,0 ± 1,71-ГептанолРазбавление в 1000 развтор.-Бутилтолуол33,0 ± 1,560,0 ± 1,279Из данных таблицы 4.10 следует, что при разбавлении смеси тествеществ в 10 раз относительные площади компонентов, включая наиболееполярный 2,3-бутандиол, изменяются лишь незначительно.
Однако приразбавлении исходного образца в 100 раз они уменьшаются с 20,5 ± 0,2 % до14,1 ± 1,2 %, а при разбавлении в 1000 раз – уже до 7,0 ± 1,7 %. Следовательно,границей инертности используемой хроматографической системы по 2,3бутандиолу (как по наиболее полярному компоненту) оказался диапазонразбавлений между 1:10 и 1:100, что при дозе 2 мкл соответствует абсолютнымколичествам этого диола приблизительно от 76 до 8 мкг в пробе.При проведении конкретных определений аналогичную проверкуцелесообразно проводить непосредственно для анализируемых соединений, вданном случае камфоры. Идеальная ситуация – приготовление тест-смеси влаборатории пользователя. Тогда пользователь получал бы информацию,наилучшим образом отвечающую его нуждам.
Проверка инертности системыпо анализируемому соединению должна являться неотъемлемой частью любогохроматографического анализа.В таблице 4.11 представлены результаты такого тестирования.Таблица 4.11 Результаты анализа смесикамфора/н-тридекан дляконтроля инертности используемой хроматографической системыКомпонентСоотношениекомпонентовОтносительныеплощади пиков ± станд.отклонения, %Камфора1:188,7 ± 1,1н-Тридекан(исходный раствор)11,3 ± 1,1Камфоран-ТридеканКамфоран-ТридеканРазбавление в 2 раза88,7 ± 0,811,3 ± 0,8Разбавление в 4 раза87,3 ± 0,912,7 ± 0,980Из данных таблицы 4.11 следует, что относительные площади пиковкамфоры при разбавлении исходной пробы в четыре раза изменяютсястатистически незначимо, следовательно, хроматографическую систему вданном диапазоне концентраций по выбранному компоненту можно считатьинертной.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
