Диссертация (1145903), страница 22
Текст из файла (страница 22)
ЛТ-С4 такжеиндуцирует Са2+-ответы в тучных клетках крысы, причём этот эффект практически полностьюподавляется зилеутоном (Di Capite et al., 2009).Следует отметить, что специфический ингибитор 5-ЛОГ зилеутон широко используетсяв терапии бронхиальной астмы (табл. 1). Ингибиторы ЛОГ НДГК, каффеиковая кислота и121байкалейн также, вероятно, являются фармакологическими агентами, перспективными дляиспользованиявмедицине.противовоспалительный,Внастоящеепротивоопухолевыйивремяактивноантиоксидантныйисследуютсяэффекты(табл.их1).Полученные результаты о подавлении ингибиторами ЛОГ эффектов глутоксима и моликсанасвидетельствуют о нежелательности совместного клинического применения зилеутона,каффеиковойкислоты,нордигидрогуаретиковойкислотыилибайкалейнасиммуномодуляторами на основе GSSG.4.5. Влияние ингибиторов эпоксигеназ на Са2+- ответы,индуцируемые глутоксимом и моликсаномВ отличие от циклооксигеназ и липоксигеназ, роль цитохром Р450-подобныхэпоксигеназ в макрофагах мало изучена (Bystrom et al., 2011).
В моноцитах и макрофагахчеловека экспрессируются изоформы эпоксигеназ CYP2J2 и CYP2C8. Установлено, что вмакрофагах М1 – классических участниках иммунного ответа - эндогенные продуктыэпоксигеназ (11,12-ЭЭТЕК) выступают в качестве противовоспалительных факторов иподавляют активацию траскрипционного фактора NF-κB (Bystrom et al., 2011). В макрофагахМ2, которые участвуют в восстановлении повреждённых тканей и заживлении ран, продуктыэпоксигеназ (8,9-ЭЭТЕК), наоборот, оказывают иммуномодулирующее воздействие. Такимобразом, продукты эпоксигеназ, вероятно, являются важными факторами, регулирующимиактивацию макрофагов в ходе воспаления (Bystrom et al., 2011).Для выявления возможного участия эпоксигеназного пути окисления АК в действииглутоксима и моликсана на [Ca2+]i в макрофагах использовали два структурно различныеингибитора эпоксигеназ: проадифен (соединение SKF525A) (рис.
45) и эконазол (табл. 1).Рис.эпоксигеназSKF525A)45.Структурапроадифенаингибитора(соединениеОбнаружено, что предварительная инкубация клеток с 100 мкМ проадифена в течение 5мин до введения 100 мкг/мл глутоксима приводит к практически полному подавлению как фазы122мобилизации Са2+ из депо (в среднем по данным 7 экспериментов на 95,6±6,3%), так и фазывхода Са2+ (в среднем по данным 7 экспериментов на 92,3±5,7%), вызываемых глутоксимом(рис.
46б). Сходные результаты получены при использовании 100 мкг/мл моликсана (рис. 47б).Предварительная инкубация макрофагов с 5 мкМ эконазола в течение 5 мин до введения 100мкг/мл моликсана также приводит к практически полному подавлению фазы мобилизации Са2+из депо (в среднем по данным 7 экспериментов на 87,1±5,8%) и существенному подавлениювхода Са2+ (в среднем по данным 7 экспериментов на 32,3±4,9%), вызываемых моликсаном(рис. 48б). Сходные данные получены при использовании 100 мкг/мл глутоксима.Полученные результаты свидетельствуют о том, что эпоксигеназы и (или) продуктыэпоксигеназного пути метаболизма АК участвуют в регуляции Са2+-ответов, индуцируемыхглутоксимом или моликсаном в макрофагах.Показано также, что добавление 100 мкМ проадифена на фоне развившегося входа Са2+,индуцированного глутоксимом (рис.
46а) или моликсаном (рис. 47а), приводит к существенному подавлению входа Са2+ в перитонеальные макрофаги крысы. Введение 5 мкМ эконазола нафоне развившегося входа Са2+, индуцированного моликсаном (рис. 48а) или глутоксимом (результаты не представлены), также приводит к существенному подавлению входа Са2+ в перитонеальные макрофаги крысы.В среднем подавление входа Са2+, вызванного глутоксимом, составило для проадифена37,5 ± 4,2% (по данным 5 экспериментов), а для эконазола – 35,8 ± 5,0% (по данным 6 экспериментов). Подавление входа Са2+, вызванного моликсаном, в среднем составило для проадифена38,1 ± 3,9 % (по данным 5 экспериментов), а для эконазола – 21,8 ± 4,3 % (по данным 6 экспериментов). Данные о влиянии ингибиторов эпоксигеназ на развившийся вход Са2+, индуцированный глутоксимом и моликсаном, обобщены в таблице 2.Таким образом, полученные результаты позволяют предположить, что эпоксигеназыи/или их продукты принимают участие в формировании обеих фаз Са2+-ответов, индуцируемыхглутоксимом и моликсаном в перитонеальных макрофагах крысы.
Кроме того, данные об ингибировании эконазолом и проадифеном действия глутоксима и моликсана позволяют предположить, что антимикотические агенты, ингибирующие эпоксигеназы (табл. 1), нежелательно использовать в клинической практике в комбинации с иммуномодуляторами глутоксимом илимоликсаном.Результаты согласуются с полученными ранее данными о влиянии ингибиторовэпоксигеназ на Са2+-сигналы в невозбудимых клетках. Одной из моделей депо-зависимого(емкостного) входа Са2+, является модель с участием растворимого посредника – фактора входаСа2+ (calcium influx factor, CIF), который высвобождается в цитозоль при опустошениивнутриклеточных Са2+-депо и активирует вход Са2+ в клетки (Putney et al., 2001; Крутецкая и123др., 2003). Предполагают, что роль фактора входа Са2+ может выполнять цитохром Р450,локализованный в мембране ЭР, или продукт эпоксигеназного окисления АК - 5,6-ЭЭТК(Alvarez et al., 1991, 1992; Rzigalinski et al., 1999; Xie et al., 2002; Ben-Amor et al., 2006).Так, на клетках эндотелия роговицы быка установлено, что активатор цитохрома Р450 βнафтофлавон усиливает вход Sr2+ (аналога Са2+) после опустошения внутриклеточных депо (Xieet al., 2002).
Показано также, что добавляемый с наружной поверхности мембраны метаболитцитохрома Р-450 5,6-ЭЭТК активирует вход Са2+ в эндотелиоциты. Оба эффекта блокируютсяклассическим ингибитором емкостного входа Са2+ 2-аминоэтоксидифенилборатом (Xie et al.,2002). Кроме того, обнаружено, что внеклеточная 5,6-ЭЭТК активирует депо-зависимый входСа2+ в тромбоциты человека (Ben-Amor et al., 2006). Эти результаты позволяют предположить,что продукты эпоксигеназного пути метаболизма АК могут играть роль факторов,активирующих депо-зависимый вход Са2+.В пользу этой модели также свидетельствуют данные об эффективном подавлении депозависимого входа Са2+ ингибиторами эпоксигеназ.
Так, ранее на кафедре биофизики СПбГУбыло установлено, что эконазол и проадифен практически полностью подавляют депозависимый вход Са2+, индуцируемый пуринергическими агонистами АТФ и УТФ иингибиторами эндоплазматических Са2+-АТФаз тапсигаргином и циклопьязониковой кислотойв перитонеальных макрофагах крысы (Крутецкая, Лебедев, 1998; Крутецкая и др., 2000, 2003).Показано также, что эконазол и другие имидазольные ингибиторы эпоксигеназ (миконазол,клотримазол, кетоконазол, SK&F 96365), а также проадифен являются эффективнымиингибитороми депо-зависимого входа Са2+, индуцированного широким спектром агонистов втимоцитах крысы (Alvarez et al., 1991, 1992), лейкемических клетках линий HL60 и U937(Alonso-Torre et al., 1993), эндотелиоцитах быка (Graier et al., 1995; Xie et al., 2002) и ацинарныхклетках поджелудочной железы крысы (Bruce, Elliott, 2000).В то же время установлено, что ингибиторы эпоксигеназ сами могут индуцировать Са2+ответы в клетках.
Нами показано, что проадифен (100 мкМ) вызывает в бескальциевой средепостепенно нарастающее повышение [Ca2+]i, связанное, по-видимому, с мобилизацией Са2+ извнутриклеточных депо в перитонеальных макрофагах крысы. Последующее введение в наружную среду 2 мМ Са2+ вызывает вход Са2+ в макрофаги (рис. 49). Кроме того, проадифен и эконазол вызывают небольшое увеличение [Ca2+]i (в среднем по данным 14 экспериментов на13,6±2,4% относительно базального уровня) до введения глутоксима или моликсана.124Рис.
46. Влияние проадифена на увеличение [Ca2+]i, вызываемое глутоксимом, вперитонеальных макрофагах крысыПо вертикали и по горизонтали – то же, что на рис. 32.а – клетки инкубировали с 100 мкг/мл глутоксима в номинально бескальциевой среде,затем вход Са2+ индуцировался введением в наружную среду 2 мМ Са2+. Во время входа Са2+вводили 100 мкМ проадифена.б, в – макрофаги предварительно инкубировали со 100 мкМ проадифена (б) или 5 мкМэконазола (в) в течение 5 мин в бескальциевой среде, затем добавляли 100 мкг/мл глутоксима ичерез 20 мин инициировали вход Са2+ введением 2 мМ Са2+.125Рис. 47. Влияние проадифена на Са2+-ответы, вызванные моликсаном вперитонеальных макрофагах крысыПо вертикали и по горизонтали – то же, что на рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
