Диссертация (1145903), страница 21
Текст из файла (страница 21)
37б) илимоликсана (рис. 38б) приводила к практически полному подавлению мобилизации Са2+ извнутриклеточных Са2+-депо, индуцированной 100 мкг/мл глутоксима или моликсана, а такжепоследующего депо-зависимого входа Са2+ из наружной среды.Кроме того, было установлено, что предварительная инкубация макрофагов с 5 мкМкаффеиковой кислоты в течение 5 мин до введения глутоксима (рис. 39б) или моликсана (рис.39б) приводила к практически полному ингибированию обеих фаз Са2+-ответов, вызванныхглутоксимом или моликсаном в макрофагах.
Предварительная инкубация макрофагов с 1 мкМдругого структурно отличного селективного ингибитора 5-ЛОГ зилеутона в течение 5 мин довведения 100 мкг/мл глутоксима вызывает значительное подавление мобилизации Са2+ из депо(в среднем по данным 7 экспериментов на 79,2±9,1 %) и последующего входа Са2+ (в среднемпо данным 7 экспериментов на 58,7±8,4%), индуцированных глутоксимом (рис. 42б). Сходныеданные получены с использованием 100 мкг/мл моликсана (рис. 43б): в среднем по данным 7111экспериментов зилеутон вызывает подавление мобилизации Са2+ из депо на 67.5% и подавлениевхода Са2+ в клетку на 70.81%.Аналогичные результаты получены и для селективного ингибитора 12-ЛОГ байкалейна.Так, предварительная инкубация перитонеальных макрофагов крысы с 5 мкМ байкалейна втечение 5 мин до введения глутоксима (рис.
39в) или моликсана (рис. 41б) вызывалапрактически полное подавление как мобилизации Са2+ из депо, так и последующего входа Са2+из наружной среды в ответ на глутоксим или моликсан.Полученные экспериментальные данные позволяют предположить, что 5-ЛОГ и 12-ЛОГи/или продукты окисления АК с участием этих ферментов играют важную роль вформировании обеих фаз Са2+-ответов, индуцированных глутоксимом или моликсаном.Кроме того, исследовано влияние ингибиторов ЛОГ на развившийся вход Са2+,индуцированный 100 мкг/мл глутоксима или моликсана в перитонеальных макрофагах крысы.Установлено, что введение НДГК (30 мкМ) (рис. 44а), каффеиковой кислоты (40 мкМ) (рис.44б), зилеутона (4 мкМ) (рис.
42а) или байкалейна (40 мкМ) (рис. 44в) на фоне развившегосявхода Са2+ вызывает частичное подавление входа Са2+, вызванного глутоксимом, с различнойэффективностью.В среднем подавление входа Са2+, вызванного глутоксимом, составило для НДГК 31,7±5,8% (по данным 7 экспериментов), для каффеиковой кислоты - 31,2±9,1% (по данным 8экспериментов), для зилеутона 41,8±9,3% (по данным 11 экспериментов), для байкалейна 60,5±8,9% (по данным 7 экспериментов).Аналогичные результаты получены для препарата моликсан. Данные о влиянииингибиторов ЛОГ на развившийся вход Са2+, индуцированный глутоксимом и моликсаном,представлены в таблице 2.Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что продукты окисленияАК с участием 5- и 12-ЛОГ играют важную роль не только в генерации, но и в поддержаниидепо-зависимого входа Са2+ в ответ на глутоксим и моликсан.1122+Рис.
37. Влияние нордигидрогуаретиковой кислоты (НДГК) на Са -ответы, индуцированные глутоксимом в макрофагахПо вертикали и горизонтали – то же, что и на рис. 33.а – после инкубации макрофагов в течение 20 мин со 100 мкг/мл глутоксима в среде, не2+2+2+содержащей Са , вход Са инициировали добавлением в наружную среду 2 мМ Са ;б – клетки инкубировали в течение 5 мин с 10 мкМ НДГК, затем добавляли 100 мкг/мл2+2+глутоксима, через 20 мин вход Са инициировали введением в наружную среду 2 мМ Са .1132+Рис.
38. Влияние нордигидрогуаретиковой кислоты (НДГК) на Са -ответы, вызываемые моликсаном в макрофагахПо вертикали и горизонтали – то же, что и на рис. 33.а – клетки инкубировали со 100 мкг/мл моликсана в течение 20 мин в среде, не содержа2+2+2+щей ионов Са , после чего вход Са стимулировали введением 2 мМ Са в наружную среду;б – клетки предварительно инкубировали с 10 мкМ НДГК в течение 5 мин до введения2+100 мкг/мл моликсана в среде, не содержащей ионов Са , через 20 мин после добавления мо2+ликсана в наружную среду вводили 2 мМ Са .114Рис. 39. Влияние байкалейна и каффеиковой кислоты на эффект глутоксима на2+[Ca ]i в макрофагахПо вертикали и горизонтали – то же, что и на рис.
33.а - макрофаги инкубировали в бескальциевой среде со 100 мкг/мл глутоксима в течение2+20 мин до введения 2 мМ Са ;б – клетки инкубировали с 5 мкМ каффеиковой кислоты в бескальциевой среде в течение5 мин до введения 100 мкг/мл глутоксима, через 20 мин после введения глутоксима в наружную2+среду добавляли 2 мМ Са ;в – клетки инкубировали в бескальциевой среде с 5 мкМ байкалейна в течение 5 мин довведения 100 мкг/мл глутоксима и через 20 мин после введения глутоксима в наружную среду2+.добавляли 2 мМ Са .1152+Рис. 40. Влияние каффеиковой кислоты на Са -ответы, индуцированные моликсаном в макрофагахПо вертикали и по горизонтали – то же, что на рис. 33.а – макрофаги инкубировали в течение 23 мин со 100 мкг/мл моликсана в номинальнобескальциевой среде. Затем вход Са2+ инициировали добавлением в наружную среду 2 мМ Са2+;б – клетки инкубировали в течение 5 мин с 10 мкМ каффеиковой кислоты, затем добавляли 100 мкг/мл моликсана и через 23 мин вход Са2+ инициировали введением в наружную среду 2 мМ Са2+.1162+Рис.
41. Влияние байкалейна на Са -ответы, индуцированные моликсаномв макрофагахПо вертикали и по горизонтали – то же, что на рис. 33.а – макрофаги инкубировали в течение 23 мин со 100 мкг/мл моликсана в номинальнобескальциевой среде. Затем вход Са2+ инициировали добавлением в наружную среду 2 мМ Са2+;б – клетки инкубировали в течение 5 мин с 10 мкМ байкалейна, затем добавляли 100мкг/мл моликсана и через 23 мин вход Са2+ инициировали введением в наружную среду 2 мМСа2+.117Рис. 42. Влияние зилеутона на Са2+-ответы, индуцируемые глутоксимомв макрофагахПо вертикали и по горизонтали – то же, что на рис.
32.а – клетки инкубировали в течение 25 мин в присутствии 100 мкг/мл глутоксима вбескальциевой среде, затем вход Са2+ инициировали введением в наружную среду 2 мМ Са2+,на фоне развившегося входа Са2+ добавляли 4 мкМ зилеутона;б – макрофаги предварительно инкубировали в течение 5 мин с 1 мкМ зилеутона вбескальциевой среде, затем добавляли 100 мкг/мл глутоксима, через 20 мин вход Са2+инициировали введением в наружную среду 2 мМ Са2+.118Рис.
43. Влияние зилеутона на Са2+-ответы, индуцируемые моликсаномв макрофагахПо вертикали и по горизонтали – то же, что на рис. 32.а – макрофаги инкубировали в течение 21 мин в присутствии 100 мкг/мл моликсана вбескальциевой среде, затем вход Са2+ инициировали введением в наружную среду 2 мМ Са2+;б - клетки предварительно инкубировали в течение 5 мин с 1 мкМ зилеутона вбескальциевой среде, затем добавляли 100 мкг/мл моликсана, через 21 мин вход Са2+инициировали введением в наружную среду 2 мМ Са2+.119Рис.
44. Влияние ингибиторов липоксигеназ на развившийся вход Са2+,индуцированный глутоксимом в макрофагахПо вертикали и по горизонтали – то же, что на рис. 32.Клетки инкубировали в течение 20 - 25 мин в присутствии 100 мкг/мл глутоксима вбескальциевой среде, затем вход Са2+ инициировали введением в наружную среду 2 мМ Са2+,на фоне развившегося входа Са2+ добавляли 30 мкМ нордигидрогуаретиковой кислоты (НДГК)(а), 40 мкМ каффеиковой кислоты (б) или 40 мкМ байкалейна (в).120Результаты экспериментов согласуются с данными, полученными ранее на кафедребиофизики СПбГУ, о влиянии ингибиторов ЛОГ на процессы Са2+-сигнализации в макрофагах.Так, установлено, что НДГК, каффеиковая кислота и байкалейн существенно подавляют депозависимый вход Са2+, вызываемый фениларзиноксидом, пуринергическими агонистами (АТФ,УТФ),атакжеингибиторамиSERCA(тапсигаргин,циклопьязониковаякислота)вперитонеальных макрофагах крысы (Крутецкая и др., 1997, Крутецкая, Лебедев, 1998;Крутецкая и др., 2000, 2003).Ингибиторы ЛОГ также подавляют депо-зависимый вход Са2+ в другие типы клеток.
Наклетках асцитной карциномы Эрлиха также было показано, что НДГК не оказывает влияния намобилизацию Са2+ из внутриклеточных депо, индуцированную АТФ, однако вызывает полноеподавление рецептор-зависимого входа Са2+ (Gukovskaya, Zinchenko, 1990).
Авторами быловыдвинуто предположение, что какой-либо из продуктов липоксигеназного пути окисления АКможет быть активатором рецептор-зависимого входа Са2+ в клетки асцитной карциномы Эрлиха(Gukovskaya, Zinchenko, 1990).Ингибиторы ЛОГ НДГК и госсипол вызывают подавление депо-зависимого входа Са2+ влейкемических базофилах крысы (клетках RBL) (Glitch et al., 2002). Авторы предполагают, чтоингибирующий эффект этих агентов может быть связан с участием продуктов ЛОГ в генерациии поддержании депо-зависимого входа Са2+, однако не исключают и прямого воздействияингибиторов на Са2+-каналы (Glitch et al., 2002).Байкалейн ингибирует депо-зависимый вход Са2+, вызванный тапсигаргином иантителами против CD3, в Т-лимфоцитах линии Jurkat (Nam et al., 2009).C использованием ингибиторов 5-ЛОГ, новых антимикотических агентов итраконазола ипозаконазола, показана важная роль липоксигеназного пути метаболизма АК в регуляции Са2+сигнализации в нейтрофилах человека (Steel et al., 2007, 2009).
Установлено, что этисоединения подавляют депо-зависимый вход Са2+ в нейтрофилы, активированные различнымихемоаттрактантами (Steel et al., 2007, 2009).Показано, что ЛТ, образующиеся в результате активации ЛОГ, могут сами индуцироватьдвухфазные Са2+-ответы (Itagaki et al., 2011). Так, продукты 5-ЛОГ ЛТ-В4 и ЛТ-D4 способныиндуцировать мобилизацию Са2+ из внутриклеточных депо и последующий депо-зависимыйвход Са2+ в дендритных клетках (Itagaki et al., 2011). Эффект ЛТ опосредован их действием наспецифические рецепторы, ассоциированные с гетеротримерными G-белками.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
