Диссертация (1145858), страница 26
Текст из файла (страница 26)
HPLC-анализ ауксинов в культуральной жидкости при выращивании на среде R2A сL-триптофаном при 28˚C на качалке в течениии 4 сут. А. – культуральная жидкость штаммаBurkholderia bryophila AM31A (объем анализируемого образца 1 мкл); Б. – культуральнаяжидкость P. fluorescens RF14J (объем анализируемого образца 5 мкл). ILA – Индолил-3молочная кислота (ИМК), ICA – Индолил-3-карбоновая кислота (ИКК), IAA – Индолил-3уксусная кислота (ИУК).
EU – интенсивность флуоресценции (единицы эмиссии – EmissionUnits).115Таблица 3.5. Степень конверсии L-триптофана в ауксины исследуемыми штаммами бактерий.23,44± 1.01Сумма37,69± 1.621.0,10,01 ±0.00126,72 ±1.987,96,9200,35± 14.8311,1235,50± 17.430,0030,14 ±0.0170,36± 3.5920,758,933,23± 1.7069,3103,87± 5.300,040,42 ±0.0320,41± 1.106,07,59 ±0.432,29,830,99± 1.679,146,62± 2.6630,651,42± 2.7815,154,35± 3.10нМ/млУтилизация Lтриптофана, %ИУКПримечание.0,28 ±0.01нМ/млнМ/мл0,10,71 ±0.0428,90 ±1.718,513,70,72 ±0.0415,930,04 ±1.77RF14JУтилизация Lтриптофана, %3,8ИКК2,5нМ/млRF11DУтилизация Lтриптофана, %12,95± 0.561,31 ±0.06нМ/млRM13DУтилизация Lтриптофана, %8,43 ±0.62ИМКнМ/млУтилизация Lтриптофана, %0,4нМ/млУтилизация Lтриптофана, %нМ/млАуксинИсследуемый штаммAM24ARF14DRM12FУтилизация Lтриптофана, %AM31AУтилизация Lтриптофана, %RF13H0,21,81 ±0.100,548,94 ±2.8914,410,70 ±0.603,20,20,23 ±0.010,10,36 ±0.020,18,849,88 ±2.9414,712,86 ±0.723,8суммарное содержание L-триптофана в среде R2A с L-триптофаном, определенное хроматографически –340 нМ/мл (69,4мкг/мл).
В исходной среде R2A без внесения дополнительного L-триптофана его количество составляло 123,6 нМ/мл (25,2 мкг/мл).116Не менее важным является оценка ростстимулирующего эффекта при взаимодействиикультуры бактерий с проростками сельскохозяйственных растений. Так, фито-тест,проведенный на проростках редиса, показал, что разбавленные культуры исследуемыхштаммов бактерий способны стимулировать развитие растений in vitro (табл.3.6). Особенновыраженный стимулирующий эффект оказали штаммы RF13H, RF11D, RF14J, AM24A,который проявился в достоверном увеличении длинны корешков редиса по сравнению сконтрольным вариантом без обработки.Таблица 3.6.
Стимулирующий эффект, оказываемый изучаемыми штаммами бактерий, насельскохозяйственные растения in vitro.Исследуемый штаммКонтроль (без обработки)Стимуляция проростков редиса in vitroСредняядлинаОбщая сырая массакорешка, ммпроростка, мг13,150,5Pseudomonaschlororaphis228(контрольныйштаммизколлекции ВНИИСХМ)17,251,3Pseudomonas brenneri RM14B18,8P.
poae RF11D28,5*P. aspleni RF13H31,1*P. fluorescens RF14J24,8Serratia plymuthica AM24A30,0*Flavobacterium sp. RM14A13,8P. sp. RF14D23,6Collimonas sp. RF14С22,5НСР0512,3Примечание. *Различия достоверны на уровне НСР0555,059,364,7*59,669,4*50,159,668,4*10,53.3.5.Растворениемалорастворимыхнеорганическихсоединенийфосфораиферментативная активностьПо результатам скрининга на способность растворять ортофосфат кальция и фосфоритнуюмуку было отобрано 8 наиболее активных изолятов. Некоторые из них, кроме этого,обладали антифунгальной активностью и способностью к продукции ауксинов.Характеристикаферментативнойактивностиизучаемыхизолятовбактерийсвидетельствовала о наличии у них довольно активных гидролитических ферментов,выявлены штаммы, наиболее активно выделявшие протеиназы, амилазы, липазы ицеллюлазы.1173.3.6.
Таксономическое положение, культурально-морфологическая и физиологобиохимическая характеристика отобранных перспективных штаммовPseudomonasaspleniiRF13H.Мелкиесильноукороченные,почтиовальныеграмотрицательные палочки длинной около 1,5 мкм. Каталазо- и оксидазоположительный.На среде R2A образуют кожистые колонии серого цвета, полупрозрачные, с неровным краеми конусообразным профилем, диаметр колоний 5-7 мм через 48 ч культивирования.Оптимальная температура роста 28˚С, рост отсутствует при +37˚С, штамм способен к роступри +40С, оптимум pH 6,0. Строгий аэроб. В качестве источников углерода использует:глюкозу, маннозу, фруктозу, галактозу, ксилозу, инозитол, манитол, арабитол, глицерол.
Вкачестве источников азота использует: пептон, триптон, дрожж. экстракт, гидролизатказеина, соли аммония; слабо использует: желатин, казеин; не использует: нитраты; набезазотных средах не растет. Обладает протеазной и липазной активностью. Продуцируетауксины на среде с L-триптофаном. Обладает сильной фунгицидной активности противгрибов р. Fusarium, Alternaria, Pythium, хорошей бактерицидной активностьюпротивErwinia carotovora, Pseudomonas syringae, Clavibacter michiganensis, Xantomonas.Pseudomonas poae RF11D. Мелкие, укороченные прямые грамотрицательные палочки.Каталазо-иоксидазоположительный.НасредеR2Aобразуютбыстрорастущиекремообразные колонии серого цвета, полупрозрачные, с неровным краем и плоскимпрофилем, диаметр колоний 15-20 мм через 48 ч культивирования.
Оптимальнаятемпература роста 28˚С, рост отсутствует при +37˚С и +40С, оптимум pH 6,0. Строгий аэроб.В качестве источников углерода использует: глюкозу, арабинозу, сахарозу, ксилозу, лактозу,мальтозу, дульцитол, инозитол, манитол, глицерол, сорбитол. В качестве источников азотаиспользует: пептон, триптон, дрожжевой экстракт, казеин, гидролизат казеина, желатин;слабо использует: соли аммония, нитраты; на безазотных средах не растет. Обладаетпротеазной активностью. Продуцирует ауксины на среде с L-триптофаном. Способен кмобилизации малорастворимых соединений фосфора. Обладает сильной фунгициднойактивности против грибов р.
Fusarium, Alternaria, Pythium, хорошей бактерициднойактивностью против Erwinia carotovora, Pseudomonas syringae, Clavibacter michiganensis,Xantomonas.PseudomonasbrenneriRM14B.Мелкие,укороченныепрямыеграмотрицательныепалочки1,5-2 мкм. Каталазо- и оксидазоположительный. На среде R2A образуют кожистые,радиально-складчатые к краю колонии серого цвета, полупрозрачные, с неровным краем иконусообразным профилем, диаметр колоний 8-10 мм через 48 ч культивирования.Оптимальная температура роста 28˚С, рост отсутствует при +37˚С, способен к росту при+40С, оптимум pH 6,0. Строгий аэроб.
В качестве источников углерода использует: глюкозу,118арабинозу, сахарозу, ксилозу, лактозу, мальтозу, дульцитол, инозитол, манитол, глицерол,сорбитол. В качестве источников азота использует: пептон, триптон, дрожжевой экстакт,гидролизат казеина, желатин; слабо использует: казеин, соли аммония, нитраты; набезазотных средах не растет. Обладает протеазной и липазной активностью.
Продуцируетауксины на среде с L-триптофаном. Способен к мобилизации малорастворимых соединенийфосфора. Обладает сильной фунгицидной активности против грибов р. Fusarium, Alternaria,Pythium, хорошей бактерицидной активностьюпротив Erwinia carotovora, Pseudomonassyringae, Clavibacter michiganensis, Xantomonas.Pseudomonas fluorescens RF14J. Мелкие овальные палочки с закругленными концами,грамотрицательные. Каталазо- и оксидазоположительный. На среде R2A образуюткожистые, радиально-складчатые к краю колонии серого цвета, полупрозрачные, с неровнымкраем и конусообразным профилем, диаметр колоний 8-10 мм через 48 ч культивирования.Оптимальная температура роста 28˚С, рост отсутствует при +37˚С, способен к росту при+40С, оптимум pH 6,0.
Строгий аэроб. В качестве источников углерода использует: глюкозу,арабинозу, сахарозу, ксилозу, мальтозу, манитол, глицерол, сорбитол. В качестве источниковазота использует: пептон, триптон, дрожжевой экстакт, гидролизат казеина, желатин; слабоиспользует: казеин, соли аммония, нитраты; на безазотных средах не растет. Обладаетпротеазной и липазной активностью. Продуцирует ауксины на среде с L-триптофаном.Способен к мобилизации малорастворимых соединений фосфора. Обладает сильнойфунгицидной активности против грибов р. Fusarium, Alternaria, Pythium.Pseudomonas. sp. RM13D.
Мелкие укороченные или овальные грамотрицательныепалочки длинной 1,5-2,0 мкм. Каталазо- и оксидазоположительные. На среде R2Aобразуют кожистые, радиально-складчатые к краю колонии серого цвета, полупрозрачные, снеровным краем и плоским профилем, диаметр колоний 10-15 мм через 48 чкультивирования. Оптимальная температура роста 28˚С, рост отсутствует при +37˚С и +4˚С,оптимум pH 6,0. Строгий аэроб. В качестве источников углерода использует: глюкозу,арабинозу, сахарозу, ксилозу, мальтозу, дульцитол, инозитол, манитол, глицерол.