Диссертация (1145858), страница 21
Текст из файла (страница 21)
Повторность опыта – шестикратная. После 7 дней роста растения опрыскивалибактериальной суспензией штаммов-антагонистов с титром 106 КОЕ/мл. Томаты выращивали14 дней в фитотроне, после чего извлекали из песка, отмывали; отмечали число растений,пораженных черной пятнистостью.2.6.5. Изучение ростстимулирующей активности штаммов in plantaВ условиях микровегетационного опыта растения томатов выращивали в сосудах объемом 3 л,в качестве субстрата использовался смесь нестерильного торфогрунта (марка «Терравита»,производитель ЗАО «Фарт», Россия) и дерново-подзалистой почвы с опытного поля ГНУВНИИСХМ в соотношении 1:1.
Растительными объектами для изучения служили следующиесельскохозяйственные культуры: томаты Solanum lycopersicum (сорт «Персей», агрофирма«Дом семян», Санкт-Петербург), редис Raphanus sativus L. var. radicula (сорт «Дуро»,агрофирма «Дом семян», Санкт-Петербург).Растения выращивали в течение 30 дней в условиях летних вегетационных домиках ГНУВНИИСХМ, где температура и влажность определялась погодными условиями на широте г.Санкт-Петербурга. По истечению периода вегетации растения извлекали из всосудов,отмывали от остатков почвы и определяли разницу в сырой массе и длине корешков,проростков по сравнению с контрольным вариантом.2.6.6.Изучениескоростиразложениясоломыцеллюлозолитическоймикробнойассоциацией (ЦМА).Для определения стабильности целлюлозолитической ассоциации, выделенной по п.
2.3.1,провели 10 последовательных пассажей культуры, для чего по 100 мкл первоначальнойсуспензии вносили в новые колбы с 200 мл среды Гетченсона и 5 граммами измельченнойфильтровальной бумаги инкубировали 7 суток при 20˚С и 220 об/мин, отмечали изменения вцвете и консистенции фильтровальной бумаги.Полученную культуру, представляющую из себя смесь бактериальной массы и остатковполудеградированых волокон целлюлозы исследовали под микроскопом («Ломо», Россия) вживых и окрашенных препаратах (п.
2.4.1.). Целлюлазную активность сообщества определялипо методике Кассана (п. 2.4.7.) в сравнении с жидкой культурой B. subtilis Ч-13 из коллекции89лаборатории технологии микробных препаратов ГНУ ВНИИСХМ, обладающей целлюлазнойактивностью. Для разделения ассоциации и выделения доминантнах форм в чистые культуры,суспензию методом последовательных серийных разведений высевали на поверхностьагаризованой минеральной среды с 1% микрокристаллической целлюлозы и инкубировали 7суток при 20˚С. Отдельные колонии бактерий отсевали на свежие чашки Петри и пробирки соскошенным агаром, описывали культурально-морфологические свойства выросших изолятовбактерий.
Физиолого-биохимические свойства выделенных изолятов бактерий исследовалиметодом мультисубстратного анализа с помощью системы GEN III Microplate (BioLog, США).Исследованиявлиянияцеллюлозолитическойассоциациинапроцессыразложениярастительных остатков и баланс гумуса в почве проводили в лабораторном экспериментеЛаборатории микробной экотехнологии ГНУ ВНИИСХМ и микрополевом опыте, заложенномосенью 2011 г.
после уборки ячменя на опытном поле ГНУ ВНИИОУ (Отчет об испытаниях,приложение 2).2.7. Создание и апробация лабораторных образцов микробиологических препаратов2.7.1. Условия культивирования перспективных штаммовСостав питательной среды оптимизировали при наращивании бактериальной культуры вкачалочных колбах объемом 500 мл с рабочим объемом 150 мл. За основу были взятыпитательные среды 5 различных составов, для изготовления которых, прежде всегоиспользуется дешевое сырье. Культуры наращивали в течение 3-х суток при температуре 28°Си перемешивании - 200 об/мин, затем методом последовательных серийных разведений ивысевом на агаризованую среду R2A определяли титр культуры.Оптимизацию параметров культивирования проводили с использованием универсальногогазо-вихревого биореактора «Торнадо» объемом 10 л и коэффициентом наполнения 0,5.
Вкачестве основных параметров определяли показатели температуры, pH, концентрациирастворенногокислорода.Плотностькультурыоцениваликолориметрическинаспектрофотометре «КФК-2» при длине волны 540 нм и ширине кювет 5 мм.2.7.2. Создание оптимальной композиции лабораторного образца микробиологическогопрепаратаДля создания стабильного в хранении и консистенции прототипа биопрепарата использовалиразличные композиции добавок.
Основу данной композиции составляли следующие основныеингредиенты: культура клеток, разбавленная стерильной водой в зависимости от плотности,90до титра 1,5×109; стабилизатор консистенции; краситель зеленого цвета; консервант.Различные вариации концентраций и сочетаний указанных добавок тестировали насовместимость с культурами изучаемых штаммов бактерий. Определяли оптимальный составкомпозиции прототипа биопрепарата, стабильный по консистенции и срокам хранения.Стабильность численности бактериальной культуры и ее свойств в композиции биопрепаратаопределяли через 7, 14, 30, 60, 90 сут. хранения.2.7.3. Апробация лабораторных образцов микробиологических препаратов в полевыхэкспериментахЛабораторные образцы были апробированы на базе Карабалыкской сельскохозяйственнойопытной станции (Республика Казахстан) в 2012 году на масличных культурах: масличныйлен, подсолнечник масличный.Культура – лен масличный, подсолнечник масличный.
Почва- чернозем обыкновенный,среднегумусный, тяжелосуглинистый, гумус 3-4%, pH=7,1. Предшественник- яровая мягкаяпшеница, культуры высевались в четырехпольном севообороте последней культурой, сроксева – 23 мая 2012, посев проведен сеялкой точного сева CRC-6-10, с порционнымвысевающим аппаратом, уборка проведена малогабаритным комбайном «Винтерштайгер».Вид опыта – полевой- мелкоделяночный, производственный, площадь делянок – 25 м2 втрехкратной повторности.Варианты опыта: 1.
Лабораторный образец препарата на основе штамма Pseudomonas brenneriRM14B – обработка семян 2 л/т, обработка по вегетации 1 л/га; 2. Лабораторный образецпрепарата на основе штамма Pseudomonas asplenii RF13H – обработка семян 2 л/т, обработкапо вегетации 1 л/га; 3. - Лабораторный образец препарата на основе штамма Flavobacterium sp.RM14A – обработка семян 2 л/т, обработка по вегетации 1 л/га; 4. Биопрепарат «Бинорам» - порекомендации производителя; 5. Контроль – без обработки.Учет урожая проводился методом взвешивания семян со всех трех повторностей,высчитыванием среднего показателя, пересчетом урожайности на 1 га.91ГЛАВА 3.
Результаты исследований и обсуждение3.1. Характеристика и география отбора образцов сфагновых мховВ представленной диссертационной в качестве объектов исследований были выбраны два видасфагнового мха, которые занимают различные экологические ниши в болотных экосистемах,но в то же время распространены довольно широко и часто встречаются вместе в одних и техже биотопах - Sphagnum fallax (H. Klinggr.) H. Klinggr. и S. magellanicum Brid., (названиявидов приводятся по Ignatov et al., 2006):- Sphagnum magellanicum Brid.
(Сфагнум магелланский, секция Sphagnum, Приложение 1,фотография 1). Дерновники красноватые, пурпурно-фиолетовые, иногда с сизо-зеленоватожелтым оттенком. Склеродермис стебля от красноватого до пурпурного, стеблевые листья 0,82,0 мм дленной и 0,5-0,8 мм шириной, языковидно-лопаточковидные, к верху расширенные, спорами в водоносных клетках. Веточные листья черепитчатые, широкояйцевидные.Хлорофилоносные клетки на срезе эллиптические, центрированные. Гигрофит, режегидрофит. Распространен преимущественно на открытых облесненных верховых болотах сдревесным ярусом из сосны, с более или менее развитым ярусом болотных кустарников.Обычно на кочках и грядах, в грядово-мочажинных озерковых комплексах, реже в межкочьяхи мочажинах, а также в заболоченных хвойных и смешанных лесах, по берегам рек и озер. ВЕвропе один из главных торфообразователей, характерный и распространенный членкомплексных сфагновых ассоциаций.
Непосредственного участия в затягивании воднойповерхности не принимает, но широко распространен в ассоциациях ряда сухопутногозаболачивания.-Sphagnum fallax (H. Klinggr.) H. Klinggr. (Сфагнум обманчивый, секция Cuspidata,Приложение 1, фотография 2). Дерновники обычно высокие и рыхлые, жестковатые, от серои желто- зеленых до буроватых. Гиалодермис стебля 2-4 слойный, не ясно или местами болееясно ограниченный. Склеродермис зеленоватый или желтоватый. Стеблевые листья мелкие0,1-1,0 мм длинной, коротко равнобедренные или равносторонне треугольные, заостренные,обычно без волокон или пор, с сильно расширенной к низу каймой. Веточные листья сухие,волнистые, не блестящие вогнутые, ланцетовидные, постепенно суженые в более менеедлинную верхушку, на наружной поверхности с немногими кольчатыми порами в боковыхуглах и с верхушечными порами, более крупными у основания листа.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
