Диссертация (1144791), страница 25
Текст из файла (страница 25)
Ко 2-м суткам реперфузионногопериода полная обратимая 10-минутная глобальная ишемия головного мозга укрыс и обратимая 7-минутная ишемия переднего мозга у песчанок монгольскихприводила к повреждению нейронов во II и III мелкоклеточных слоях корыголовного мозга. При увеличении реперфузионного периода до 7 сут дефицитморфологически неизмененных нейронов нарастал в верхнем этаже коры – вслоях II и III и обнаруживался в нижнем – в слое V.
Существует несколькоисследований, в которых показано, что пирамидные нейроны слоя V корыголовного мозга при ишемии-реперфузии подвергаются дистрофическим инекробиотическим изменениям существенно позже, чем нейроны слоев II и III(Поташев Д.Д., 2006; Pulsinelli W.A., Buchan A.M., 1988). Объяснением данногоявления может быть наличие различий в размере и численной плотности133нейронов, а также в значении нейро-глиального индекса различных слоев корыголовного мозга.Применение трех ишемических стимулирующих воздействий по 15 среперфузии и 15 с реокклюзии непосредственно после 10-минутной глобальнойишемия головного мозга у крыс и 7-минутной ишемии переднего мозга упесчанокмонгольскихприводилокувеличениючисламорфологическинеизмененных нейронов в слоях II и III в раннем реперфузионном периоде и вслоях II, III и V - в отдаленном.
Наиболее выраженный нейропротективныйэффектотпримененияишемическихпосткондиционирующихстимуловпроявлялся в мелкоклеточных слоях II и III коры для крыс и песчанокмонгольских.Обнаруженный цитопротективный эффект при применении ИПостК можнообъяснить несколькими обстоятельствами. Во-первых, под влиянием короткихишемических воздействий в нейронах происходит стимуляция и перестройкаметаболическихкомпенсаторно-восстановительныхпроцессов.Во-вторых,можно предположить, что ишемические стимулирующие воздействия головногомозга оказывают действие не только собственно на нейроны, но и могутмодулировать активность других клеток нервной ткани, в частности, астроцитов,микроглии и эндотелия.
Не исключено, что эффекты ИПостК на эти типы клетокстоль же важны для формирования устойчивого нейропротективного ответа, каки его эффекты на нейроны. В-третьих, наблюдаемое сохранение количестванейронов, в частности, в коре и полях гиппокампа может происходить за счетобразования и последующей миграции новых нейронов из прогениторных клетокприприменениипосткондиционирующихстимулов.Известно,чтовпостнатальном онтогенезе у млекопитающих зафиксировано образование новыхнейронов из резидентных прогениторных клеток, в основном локализованных взубчатой извилине гиппокампа и в субвентрикулярной зоне боковых желудочков.На модели окклюзии СМА у крыс показано, что после прекондиционирующейишемии (10 минут) пролиферация прогениторных клеток усиливается в 2,7 раза,тогда как после тестовой ишемии (60 минут) пролиферация усиливается в 3,9 раза134(Naylor M.
et al., 2005). ПреК с помощью 5-минутной аноксии не сопровождалосьгибелью нейронов у новорожденных крыс, но приводило к усилениюпролиферации нейронов в зубчатой извилине и субвентрикулярной зоне втечение 3 недель после ишемии, причем вновь образованные клетки мигрировалив определенные высокочувствительные к ишемии зоны головного мозга, такиекак поле СА1 гиппокампа (Pourie G. et al., 2006). Нейрогенез и миграциянейробластов из субвентрикулярной зоны в стриатум и неокортекс наблюдалисьтакже у мышей после 8-минутной билатеральной окклюзии ОСА (Li Y. et al.,2010).Таким образом, на различных экспериментальных моделях глобальнойишемии головного мозга, примененный протокол ИПостК в виде 3-хишемических воздействий по 15 с реперфузии и 15 с реокклюзии способствовалсохранению числа морфологически неизмененных нейронов коры и гиппокампа.При этом степень нейропротективного эффекта зависела от локализации нейронаи чувствительности данной области головного мозга к ишемическому иреперфузионному повреждению, а также от длительности реперфузионногопериода.4.1.3.2 Активность окислительно-восстановительных ферментов в нейронахголовного мозга при применении ишемического посткондиционированияОценка изменения активности ферментов, катализирующих окислительновосстановительные реакции в нейронах, позволяет судить об интенсивностипроцессов, происходящих в самой клетке, и разрабатывать эффективные способывлияниянаэтипроцессы.Изменениеактивностиэтихферментоввспинномозговой жидкости и сыворотке лишь косвенно отражают степеньметаболических нарушений в нервной ткани и могут зависеть от ряда другихфакторов, не связанных с ишемией.Можно предположить, что главным механизмом, лежащим в основенейропротективного эффекта ИПостК, является воздействие ишемических135стимулов на энергетический баланс клетки путем влияния на ключевые ферментыокислительно-восстановительных реакций.В связи с этим, было изучено изменение активности ключевых ферментовэнергетического обмена - ЛДГ и СДГ в цитоплазме морфологическинеизмененных нейронов различных структур головного мозга.4.1.3.2.1 Активность лактатдегидрогеназыпри применении ишемического посткондиционирования4.1.3.2.1.1.
Влияние ишемического посткондиционирования на активностьлактатдегидрогеназы в нейронах корыпри полной глобальной ишемии-реперфузии головного мозга у крысВ данном фрагменте представлены результаты, полученные при изученииизменения активности ЛДГ в цитоплазме морфологически неизмененныхнейронов различных слоев коры при полной глобальной ишемии-реперфузииголовного мозга у крыс, а также при применении ИПостК.При изучении активности ЛДГ в нейронах анализируемых слоев корыголовного мозга установлено, что активность ЛДГ, регистрируемая в цитоплазменейронов слоев II, III и V коры головного мозга не различается в двух группахложнооперированных животных – «ЛО 2б» и «ЛО 7б» (рис.
4.4). Минимальнаяактивность ЛДГ в группах «ЛО 2б» и «ЛО 7б» была обнаружена в цитоплазменейронов слоя V при сравнении с таковой в слоях II, III (P<0,01). Активность ЛДГв цитоплазме нейронов животных ложнооперированных групп зависела отпринадлежности нейрона к определенному слою коры и распределялась вследующем порядке: II слой и III слой > V слой (P<0,01).136Рис. 4.4. Активность лактатдегидрогеназы в морфологически неизмененных нейронах слоев II,III и V коры мозга крыс в различные периоды реперфузии после полной глобальной ишемииголовного мозга с последующим применением ишемического посткондиционирования.По горизонтальной оси – группы животных; по оси ординат – оптическая плотность (отн. ед.).
Различия значимы: #по сравнению с показателями в слоях внутри группы при Р<0,01; ## при Р<0,05; * по сравнению с показателем вгруппе «ЛО 2б» при Р<0,01; + по сравнению с показателем в группе «ЛО 7б» при Р<0,01; α по сравнению споказателем в группе «Ишемия 2б» при Р<0,05; β по сравнению с показателем в группе «Ишемия 7б» при Р<0,05.Активность ЛДГ в цитоплазме морфологически неизмененных нейроновслоев II, III и V окципитальной области коры головного мозга по-разномуизменялась в зависимости от длительности реперфузионного периода (рис. 4.4). Вцитоплазме нейронов слоя II коры ко 2-м суткам реперфузионного периода(группа «Ишемия 2б») наблюдалось значимое понижение активности ЛДГ на22,2% (до 0,21±0,007 отн.
ед.) при сравнении с активностью, регистрируемой вгруппе«ЛО2б»(P<0,01).К7-мсуткамреперфузионногопериодаферментативная активность ЛДГ в группе «Ишемия 7б» была на 14,8% ниже, чемв группе «ЛО 2б» (P<0,01), но несколько увеличивалась (до 0,23±0,009 отн. ед.)по сравнению с таковой в группе «Ишемия 2б» (P=0,12).
В цитоплазме нейроновслоя III – наружных пирамидных нейронов, ко 2-м суткам реперфузионного137периода (группа «Ишемия 2б») наблюдалось значимое снижение ферментативнойактивности ЛДГ на 26,9% при сравнении с таковой в группе «ЛО 2б» (P<0,01). К7-м суткам реперфузионного периода (группа «Ишемия 7б») ферментативнаяактивность ЛДГ значимо уменьшалась на 22,2% при сравнении с аналогичнымпоказателем в группе «ЛО 7б» (P<0,01), но при этом наблюдалось некотороеповышение на 10,5% при сравнении с группой «Ишемия 2б» (P=0,07). Изменениеактивности ЛДГ в нейронах слоя V коры головного мозга ко 2-м суткамреперфузии характеризовалось уменьшением активности ЛДГ на 18,2% до0,18±0,005 отн. ед. при сравнении с активностью, регистрируемой в группе «ЛО2б» (P<0,01), которое также наблюдалось к 7-м суткам реперфузионного периода(рис.
4.4). Характер изменения активности ЛДГ в морфологически неизмененныхнейронах в ответ на обратимую ишемию головного мозга распределялся вследующем порядке: II слой > III слой > V слой, при этом достоверные различиябыли установлены между слоями II и V (P<0,05) и существенным образом независел от длительности реперфузионного периода. Однако наблюдалисьразличия в степени уменьшения активности ЛДГ в зависимости от длительностиреперфузионного периода в пределах каждого слоя (рис.
4.4).Применение ИПостК ко 2-м суткам реперфузионного периода приводило кувеличению активности ЛДГ в цитоплазме морфологически неизмененныхнейронов во всех анализируемых слоях коры головного мозга (рис. 4.4). Присравнении этого показателя в нейронах слоев II, III и V в группах «Ишемия 2б» и«ПостК 2б» в последней группе наблюдалось его увеличение на 19 (P<0,05), 10,5(P<0,05) и 11,1% (P<0,05) соответственно. К 7-м суткам реперфузии послеобратимойишемииипримененияишемическихпосткондиционирующихстимулов (группа «ПостК 7б») активность ЛДГ в цитоплазме неизмененныхтолько в слоях II и V была значимо выше, чем в группе «Ишемия 7б» (P<0,05).Применение ИПостК в ранний и отдаленный реперфузионный период неизменилохарактерараспределенияактивностиЛДГвзависимостиотпринадлежности нейрона к слою коры головного мозга крысы; активность ЛДГраспределялась в следующем порядке: II слой >III слой > V слой (P<0,01).1384.1.3.2.1.2 Влияние ишемического посткондиционирования на активностьлактатдегидрогеназы в нейронах коры и гиппокампа при глобальной ишемииреперфузии переднего мозга у монгольских песчанокВ данном фрагменте исследования представлены результаты измененияактивности ЛДГ в цитоплазме морфологически неизмененных нейронов внескольких структурах головного мозга монгольских песчанок: в слоях II, III и Vкоры мозга и в полях СА1, СА2, СА3 и СА4 гиппокампа.В анализируемых слоях коры головного мозга песчанок монгольских такженаблюдались свои особенности распределения нейронов с разной активностьюЛДГ (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
