Диссертация (1141415), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Метрологические характеристики методики определения кальция вЛРС методом комплексонометрического титрования в пересчете на сухое сырьёОбъектисследованийПараметрыТрава горцапочечуйногоТрава горцаперечногоТрава горцаптичьегоПлоды арониичерноплодной±ΔXε, %0,060 2,570,114,90,0230,013 2,570,044,030,00220,0460,027 2,570,066,40,00060,0240,014 2,570,0310,5fxS2S41,2510,0100,10641,0510,000541,0740,316Sχt(p,f)Таблица 33. Метрологические характеристики методики определения магнияв ЛРС методом комплексонометрического титрованияОбъектисследованийТрава горцапочечуйногоТрава горцаперечногоТрава горцаптичьегоПараметры±ΔXε, %0,008 2,570,192,60,0190,110 2,570,0354,70,0040,003 2,570,0062,15fxS2S40,5390,00020,01440,750,000440,07492·10-4Sχt(p,f)Таблица 34.
Метрологические характеристики методики определения магния вЛРС методом комплексонометрического титрования в пересчете на сухое сырьёОбъектисследованийТрава горцапочечуйногоТрава горцаперечногоТрава горцаптичьегоПараметрыfxS2SSχt(p,f)±ΔXε, %40,033 3,3·10-6 0,00180,0012,570,00331040,007 6,6·10-8 0,0003 0,00022,570,00056,340,009 7,7·10-8 0,0003 0,00022,570,00055,394Выводы к главе 51. В траве горца почечуйного изучен полный элементный состав и определеносодержание тяжелых металлов (свинца (0,62±0,130 мкг/г), кадмия (0,017±0,0060мкг/г), ртути (0,004±0,001 мкг/г) и мышьяка (0,032±0,008 мкг/г)) пестицидов ирадионуклидов. Показано, что трава горца почечуйного не концентрируетполютанты.2. При изучении элементного состава травы горца почечуйного выявлено наличие67 элементов.
23%(от общего количества) приходится на энергичнонакапливаемые элементы, 23% - элементы сильного накопления, 22% элементы слабого накопления и среднего захвата, 17% - элементы слабогонакопления и очень слабого захвата. Трава горца почечуйного в большихколичествах накапливает калий и фосфор, остальные элементы в изучаемомобъекте не кумулируются.3. Разработана оригинальная методика комплексонометрического определениякальция и магния в траве горца почечуйного после озоления (заявка наизобретение №2015102880 от 28.01.15).95Глава 6. Разработка методик стандартизации травы горца почечуйногоТак как флавоноиды являются основной группой метаболома горцапочечуйного,былипроведеныисследованияпоразработкеметодикиколичественного определения суммы флавоноидов в траве горца почечуйного.Заосновубылавзятафармакопейнаяметодикаколичественногоопределения суммы флавоноидов в траве зверобоя (ГФ XI, ч.
2, ст. 52 ) [30].6.1.Разработка показателя «Экстрактивные вещества» для травы горцапочечуйногоЭкстрактивные вещества – это весь комплекс БАВ, получаемыйизвлечением растворителями (спирт, вода, эфир, глицерин, а также их смесями)лекарственных веществ из сырья растительного происхождения. Степень ихизвлечения зависит от природы растворителя, продолжительности, условийэкстракции (время, температура) и размера частиц экстрагируемого материала[17,94].Методикиопределенияэкстрактивныхвеществопределяютсялекарственной формой, получаемой из ЛРС.Длясырья,используемогодляиспользуют методику ОФС ГФ XIIIизготовлениянастоек,экстрактов[25]: Около 1,0 (точная навеска)измельченного ЛРС, просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм,помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 50 мл экстрагента,указанного в соответствующей ФС или НД на ЛРС, колбу закрывают пробкой,взвешивают и оставляют на 1 ч.
Затем колбу соединяют с обратнымхолодильником, нагревают в течение 2 ч. После охлаждения колбу с содержимымвновь закрывают той же пробкой и взвешивают. Потерю в массе содержимогоколбы восполняют тем же экстрагентом. Содержимое колбы перемешивают ифильтруют через бумажный фильтр в колбу объемом 150 200 мл. 25,0 мл96фильтрата пипеткой переносят в высушенную до постоянной массы и точновзвешенную фарфоровую чашку и выпаривают содержимое на водяной банедосуха.
Чашку с сухим остатком сушат при температуре от 100 до 105 °С допостоянной массы, охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе.Содержание экстрактивных веществ в абсолютно сухом лекарственномрастительном сырье/препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:где m - масса сухого остатка в граммах; m1 - масса сырья в граммах; W - потеря вмассе при высушивании сырья в процентах.Для сырья, используемого для изготовления водных извлечений (настои иотвары) показанацелесообразность использования методики определенияэкстрактивных веществ, максимально приближенной ее к технологии полученияводных извлечений: навеску сырья в 10,0 г заливают 100 мл воды очищенной инагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин, затем настаивают 45 минпри комнатной температуре, фильтруют и объем полученного извлечения доводятводой до 100 мл; 5 мл водного извлечения выпаривают в стеклянном бюкседосуха и взвешивают [79].Так как трава горца почечуйного используется для изготовления настоя иполучения водно-спиртовых жидких лекарственных форм, в качестве экстрагентаиспользовали: воду, спирт этиловый в концентрациях 30, 50, 70, 90 %.
Длядальнейшей разработки методики количественного определения был рассмотренпереход БАВ в органические растворители: этилацетат, хлороформ, гептан (табл.35.).97Рис.19.Зависимостьсодержанияэкстрактивныхвеществтравыгорцапочечуйного от полярности растворителяПолученные данные показали, что с увеличением полярности (Р)растворителя увеличивалось и количество извлекаемых БАВ (рис.19).Наибольшеесодержаниеэкстрактивныхвеществнаблюдалосьприиспользовании в качестве экстрагента воды и водно - спиртовых смесей.
Вкачестве оптимального экстрагента, позволяющего выделить максимальноеколичество БАВ травы горца почечуйного целесообразно использовать спиртэтиловый в концентрации 50%.Современные требования на ЛРС требуют проводить определение врастительном сырье содержания основной группы действующих веществ.
Так какосновными действующими веществами травы горца почечуйного являютсяфлавоноиды,вполученныхизвлеченияхбылоопределеносодержаниефлавоноидов [9,38,110], использовали методику для травы зверобоя [30]: 1 млполученного извлечения, переносили в колбу на 25 мл, добавляли 1 мл 2%спиртового раствора AlCl3, доводили 96% этиловым спиртом до метки иоставляли для созревания окраски на 40 мин.Раствор сравнения готовилиследующим образом: 1 мл извлечения доводили 96% этиловым спиртом в колбена 25 мл до метки.
По истечении 40 мин проводили измерение оптическойплотности на спектрофотометре Hitachi U 1900 при длине волны 412±2 нм. В98качестве сравнения использовали 0,05% раствор стандартного образца ГСОрутина (табл. 6.).Таблица 35. Влияние полярности растворителя на содержание флавоноидов иэкстрактивных веществ в траве горца почечуйногоЭкстрагентРВодаЭтанол 30%Этанол 50%Этанол 70%Этанол 90%ЭтилацетатХлороформГептан10,208,407,256,074,894,404,100,20Содержаниеэкстрактивныхвеществ, %16,78±0,0418,05±0,0219,38±0,0516,35±0,0310,62±0,020,74±0,0092,22±0,011,97±0,02Содержаниефлавоноидов,%1,18±0,011,36±0,011,42±0,021,73±0,021,18±0,020,078±0,0010,44±0,010,086±0,002Полученные результаты (табл. 35.), показали, что максимальное количествокак экстрактивных веществ, так и флавоноидов наблюдалось в извлечениях,полученных водно – спиртовыми смесями.
Наибольшее количество флавоноидовэкстрагировалось 70% спиртом этиловым.6.2.Отработка условий количественного определения флавоноидов втраве горца почечуйногоБыли проведены исследования по выявлению оптимального соотношенияколичества анализируемого сырья и экстрагента, определение оптимальнойстепени измельчения сырья, времени экстрагирования; времени, необходимогодля созревания окраски продуктов взаимодействия флавоноидов с растворомхлорида алюминия, а также стабильность полученного комплекса во времени.Отработку условий эксперимента проводили с использованием стандартного99образца рутина, в качестве растворителя использовали спирт этиловый вконцентрации 95% [54].Вначале были получены и изучены спектры поглощения продуктоввзаимодействия стандартного образца рутина с хлоридом алюминия, а такжепродуктов взаимодействия флавоноидов горца почечуйного с раствором хлоридаалюминия в интервале длин волн 200 – 500 нм.Анализ полученных УФ-спектров (рис.
20.) показал, что они имеют четковыраженный максимум поглощения при 412±2 нм, совпадающий со спектрамирутина с алюминия хлоридом [160].Приизучениивлияниясоотношениямассынавескитравыгорцапочечуйного и экстрагента готовили спирто-водные извлечения из изучаемогосырья в соотношении сырье – экстрагент 1:20, 1:30, 1:50, 1:70, 1:90, 1:100. Приэтом максимальный выход флавоноидов наблюдался при соотношении 1:50.Результаты исследования приведены в табл. 36.Рис. 20. Спектры поглощения извлечений из травы горца почечуйного до и полевзаимодействия с алюминия хлоридомПриизучениивлиянияизмельченностинавыходфлавоноидовиспользовали траву горца почечуйного [14], измельченную до размера частиц,100проходящих сквозь сито с диаметрами отверстий 3,2,1 мм и размером отверстий0,5 и 0,2 мм.
Наибольший выход флавоноидов из сырья наблюдался при размеречастиц проходящих сквозь сито с диаметром 1 мм (табл.37).Таблица 36. Выход флавоноидов из травы горца почечуйного в зависимости отсоотношения сырье : экстрагент (n=6, р=0,95)Сырье:экстрагентВыходфлавоноидов, %1:201:301:501:701:901:1000,670,841,851,150,860,73Таблица 37. Влияние степени измельчения на выход флавоноидовв траве горца почечуйного (n=6, р=0,95)Размер частиц, ммВыход флавоноидов, %30,8221,4211,870,51,280,20,97При определении оптимального времени экстрагирования измерениеоптической плотности осуществляли в течении 1,5 часов с момента закипаниярастворителя с интервалом 15 минут в течение 1,5 часов.
Максимальный выходфлавоноидов наблюдался через 60 минут экстрагирования (рис. 21.).Рис. 21. Влияние времени экстрагирования на выход флавоноидов из травыгорца почечуйного101Для определения оптимального времени созревания окраски комплексафлавоноидовсалюминияхлоридомизмерениеоптическойплотностиосуществляли с момента добавления к извлечению из травы горца почечуйногоспиртового раствора хлорида алюминия 2%, с интервалом 15 минут в течениечаса (рис. 22.). Оптимальное время созревания окраски составило 40 минут. Приэтом стабильность комплекса наблюдается в течение последующих 10 минут.Затем оптическая плотность резко снижается в связи с разрушением комплексафлавоноидов с алюминия хлоридом.Рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
