Диссертация (1141415), страница 15
Текст из файла (страница 15)
22. Время созревания окраски комплекса флавоноидов с растворомхлорида алюминияТакимобразом,былиподобраныоптимальныеусловиядляколичественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в травегорца почечуйного:Экстрагент – спирт этиловый 70%Степень измельченности сырья - проходящие сквозь сито с диаметром отверстий1 ммСоотношение сырье : экстрагент - 1:50Время экстракции – 60 минВремя созревания окраски комплекса флавоноидов с 2% раствором алюминияхлорида – 40 мин102Стабильность комплекса флавоноидов с 2% раствором алюминия хлорида – 10мин.На основании полученных данных была разработана следующая методика.6.2.1.
Методика количественного определения суммы флавоноидов впересчете на рутин в траве горца почечуйногоИспытуемый раствор: траву горца почечуйного измельчали до размерачастиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм. 1,0 г (точнаянавеска) помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 50,0 мл70% спирта этилового. Колбу взвешивали с погрешностью ±0,01 г и кипятили втечение 1 часа на водяной бане с обратным холодильником.
Охладив, колбувзвешивали и доводили до изначальной массы 70% спиртом этиловым.Полученное извлечение фильтровали, отбрасывали первые 20 мл фильтрата. Вмерную колбу объемом 25,0 мл помещали 1,0 мл извлечения, 1,0 мл 2% раствораалюминия хлорида в 95% спирте этиловом и доводили объем раствора 95%спиртом этиловым до метки.В качестве раствора сравнения использовали раствор того же состава бездобавления алюминия хлорида.
Измерение оптической плотности проводиличерез 40 минут после добавления реактива в кювете с толщиной слоя 10 мм.Параллельно измеряли оптическую плотность раствора ГСО рутина. Для этого вмерную колбу вместимостью 25 мл помещали 1,0 мл 0,05% раствора рутина, 1,0мл 2% раствора алюминия хлорида в 95% спирте этиловом и доводят объемраствора 95% спиртом до метки.
В качестве раствора сравнения использовалираствор того же состава без добавления алюминия хлорида. Измерениеоптической плотности проводили через 40 минут в кювете с толщиной слоя 10мм.Приготовление раствора ГСО рутина: 0,05 г (точная навеска) ГСО рутина,предварительно высушенного при температуре 130–135оС в течение 3 часов,103растворяли в 85мл 95% спирта этилового в мерной колбе вместимостью 100 млпри нагревании на водяной бане, охлаждали, количественно переносили в мернуюколбу вместимостью 100 мл, доводили объем раствора тем же спиртом до метки иперемешивали.Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин (Х) в процентах вабсолютно сухом сырье вычисляли по формуле:,где D – оптическая плотность испытуемого раствора;Dо – оптическая плотность раствора ГСО стандарта;m – масса сырья, г;mо – масса ГСО рутина, г;W – потеря в массе при высушивании, %Разработанная методика была использована в анализе 6 образцов травы горцапочечуйного.
Содержание суммы флавоноидов в сырье колебалось от 1,85 до1,90%Метрологические характеристики методики представлены в табл. 38.Таблица 38. Метрологические характеристики УФ – СФ методики определенияфлавоноидов в траве горца (n=6; р =0,95)ОбъектисследованийТрава горцаf5x1,87ПараметрыSSSχ0,0025 0,05 0,022t(p,f) ±ΔX2,57 0,021ε, %1,126.2.2. Валидация разработанной методикиС целью подтверждения обоснованности выбора методики количественногоопределения были проведены валидационные исследования в соответствии сОФС «Валидация аналитических методик» [27,28]. Для методик определенияколичественного содержания действующих веществ в ЛРС в качестве основных104валидационныххарактеристиквыступают:подлинность,прецизионность(сходимость, воспроизводимость), специфичность, линейность, аналитическаяобласть методики [4,12,24,25,98].Эти характеристики были определены и рассчитаны для разработаннойметодики количественного определения флавоноидов в траве горца почечуйного.Определение специфичности методикиСпецифичность (селективность) – способность измерять точно и селективноопределяемоевеществовприсутствиидругихкомпонентов(примеси,ингредиенты плацебо и др).
Специфичность определяется исходя из анализаспектров извлечения из травы горца почечуйного на фоне раствора сравнения –экстрагента и комплекса флавоноидов с алюминия хлоридом на фоне растворасравнения, содержащего те же компоненты и в тех же количествах, что и ванализируемом растворе, но без алюминия хлорида (рис. 20.). Спирт этиловыйпри анализуемых длинах волн не поглощает электромагнитное излучение,соответственно не влияет на точность анализа (рис. 23.).Рис. 23.
Спектры поглощения, полученные при определении специфичностиУФ-СФ методики количественного определения флавоноидов в траве горцапочечуйного105Определение правильности методикиПравильность аналитического метода характеризует близость результатовиспытаний, полученных данным методом, к истинному значению. Показателемправильности метода является значение систематической погрешности, котораявыражается как разность между математическим ожиданием результатовизмерений и истинным (или в его отсутствии - принятым опорным) значением.При оценке правильности методики проводили по 9 определений в трехуровнях концентраций рутина в пределах аналитической области методики (табл.39.).Таблица 39. Результаты определения правильности метода количественногоопределения флавоноидов в траве горца почечуйногоВнесено, г0,010,010,010,030,030,030,050,050,05Определено, г0,0110,0150,0180,0310,0290,0340,0500,0520,054% восстановления методики+1,1+1,5+1,8+1,03-0,96+1,130+1,04+1,08Полученные данные показали, что процент восстановления методики вовсех определяемых уровнях концентраций находился в пределах 1-2% исоответствовал требованиям к характеристике «правильность».Определение прецинзионности методики (сходимости и воспроизводимости)Прецизионность аналитического метода характеризует степень близостинезависимых результатов индивидуальных испытаний, полученных в конкретныхустановленных условиях.
Прецизионность зависит только от случайных факторови требует знания истинного значения измеряемой величины. Она выражаетсявеличиной относительного стандартного отклонения (коэффициентом вариации),106доверительныминтерваломилиотносительнойошибкойопределения.Экспериментальными показателями прецизионности являются повторяемость(сходимость) и воспроизводимость.Для определения сходимости выполняли 6 параллельных определений водних условиях на одном и том же оборудовании. Полученные данные для УФСФМ методики представлены в табл.
40.Таблица 40. Результаты определения сходимости метода количественногоопределения флавоноидов в траве горца почечуйного№ ппСодержание суммыфлавоноидов, %Относительное стандартноеотклонение, %11,90-1,44234561,851,901,901,851,84+1,23-1,44-1,44+1,23+1,76При определении показателя «воспроизводимость» для анализируемойспектрофотометрической методики исследования проводили на разных приборах– СФ 2000-01 и Hitachi Spectrophometer, проводя 6 параллельных определений.Результаты представлены в таблице 41.Таблица 41.
Определение воспроизводимости методики количественногоопределения флавоноидов в траве горца почечуйного№ п/п1234СФ 2000-01Hitachi U-1900СодержаниеСодержаниеОтносительноеОтносительноесуммысуммыстандартноестандартноефлавоноидовфлавоноидовотклонение,%отклонение,%в пробе, %в пробе, %1,90-1,441,92-1,331,85+1,231,91-1,001,90-1,441,89+1,001,90-1,441,92-1,33107561,851,84Согласно+1,23+1,76полученнымвоспроизводимости1,911,89даннымрезультатовпри-1,00+1,00определениивеличинасходимостиотносительногоистандартногоотклонения не превышает допустимые значения: 2 и 3 % соответственно, чтоуказывает на прецинзионность анализируемой методики.Определение линейности методикиЛинейность аналитического метода - способность его давать результаты,которые прямо (или после математического преобразования) пропорциональныконцентрациианалитическаяопределяемогометодикавещества.должнаДлябытьподтвержденияохарактеризованалинейностиследующимипараметрами: коэффициентом регрессии, углом наклона линии регрессии.
Дляустановления линейной зависимости использовали определение величиныоптической плотности в 5 вариантах навесок травы горца почечуйного в пределахразброса значений массы навески ±25%.Для подтверждения линейности методик и определения аналитическихобластей были получены градуировочные зависимости, представленные на рис.24. Согласно полученным данным - методика линейна.оптическая плотность0,80,70,60,5y = 0,1163x + 0,1167R² = 0,96460,40,30,20,100,75071,00021,0351,1002масса навески сырья, г1,217Рис. 24.
Градуировочная зависимость величины оптической плотности отвеличины навески108Таким образом, полученные результаты (табл. 42) показывают, чторазработанная спектрофотометрическая методика количественного определения втраве горца почечуйного суммы флавоноидов в пересчете на рутин валидна.Таблица 42. Валидационные характеристики методики количественногоопределения в траве горца почечуйного суммы флавоноидов в пересчете на рутинХарактеристикаСпецифичностьЗначениеОтсутствие максимума поглощения вУФ-спектре плацебо% восстановления методики от -0,96%до +1,8%Коэффициент вариации -1,44% до+1,76%СФ 2000-01 коэффициент вариации от –1,44% до 1,76%Hitachi h-1900 коэффициент вариацииот – 1,33% до 1,00%ПравильностьСходимостьВоспроизводимостьЛинейностьy=0,1163x+0,1167; R2=0,9646Выводы к главе 61. Изучено влияние полярности экстрагентов (вода, спирт этиловый вконцентрациях 30, 50, 70, 90 %, этилацетат, хлороформ, гептан) на выход изЛРС экстрактивных веществ.2.
Максимальное количество как экстрактивных веществ, так и флавоноидовнаблюдается в извлечениях, полученных водой, водно – спиртовымисмесями, максимальное при применении спирта этилового 50%. При этомнаибольшее количество флавоноидов экстрагировалось 70% спиртомэтиловым.3. Подобраны оптимальные условия и разработана спектрофотометрическаяметодика количественного определения суммы флавоноидов в пересчетерутин. Относительная ошибка определения ± 1,12%.4.
Проведенные исследования показали валидность разработанной методики.109Глава 7. Получение лекарственных форм из травы горца почечуйногоТрава горца почечуйного, содержащая большую группу гидрофильных БАВ(флавоноиды, дубильные вещества, полисахариды, органические кислоты и др.)применяется в медицине в форме настоев.7.1. Установление коэффициента водопоглощенияСогласно общим правилам изготовления водных извлечений из ЛРС, приотсутствии особых указаний в НД, изготовление производят либо в соответствиис морфологической группой сырья (из травы готовят настой), либо в соответствиис химическим составом.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
