Диссертация (1141415), страница 11
Текст из файла (страница 11)
14.). Поэтому для определения содержания дубильных веществбыл использован еще и спектрофотометрический метод [108]. В качествестандартного образца использовали раствор медицинского танина вконцентрации 0,005%. Определение проводили на приборе СФ 2000 – 01, вкюветах с толщиной слоя 10 мм.Около 0,8 г (точная навеска) измельченного до размера частиц 2 ммсырья заливали 100 мл воды и нагревали на кипящей водяной бане в течении30 мин с последующим 30-минутным остваиванием при комнатнойтемпературе.Полученноеизвлечениефильтроваличерезскладчатый70бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили водой дометки. 5млполученногоизвлечения помещалив мерную колбувместимостью 50 мл, доводили до метки спиртом этиловым 70%, 2,5 млполученного разведения помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили дометки спиртом этиловым 70%. Измеряли оптическую плотность при длиневолны от 274,5 до 277,5 нм [33,52].
При этом было определено, что танинысоставляют 0,65±0,03%, в пересчете на абсолютно сухое сырье.Где, Мст – масса танина, г; Мх – масса сырья, г; Dст – оптическая плотностьраствора стандартного образца танина; Dx – оптическая плотностьисследуемого раствора.Рис. 14. Спектры поглощения спиртового извлечения из травы горцапочечуйного (1) и раствора танина (2)4.5.4. Количественное определение органических и оксикоричныхкислот в траве горца почечуйногоСогласно данным литературных источников, содержание органическихи оксикоричных кислот в растительных объектах зависит от различныхонтогенетических и климатических факторов [65].
При этом различие будет71наблюдаться как в качественном, так и количественном соотношении [81]. Втравегорцапочечуйногобылоопределеносодержаниесвободныхорганических кислот в пересчете на яблочную, а также содержаниеаскорбиновой кислоты. Исследование проводили титриметрически пометодикам ГФ XI часть 2 ст. 58 [30] (табл. 20.).Аналитическую пробу сырья 25,0 измельченную до размера частиц,проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, помещали в колбуобъемом 250 мл, заливали 200 мл воды и выдерживали в течение 2 ч накипящей водяной бане, после охлождения, количественно переносили вмерную колбу объемом 250 мл, доводили объем извлечения водой до метки иперемешивали.
Отбирали 10 мл извлечения, помещали в колбу объемом 500мл, прибавляли 200-300 мл свежепрокипяченной воды, 1 мл 1% спиртовогораствора фенолфталеина, 2 мл 0,1% раствора метиленового синего ититровали раствором натра едкого (0,1 моль/л) до появления в пене лилово красной окраски [30].где 0,0067 - количество яблочной кислоты, соответствующее 1 мл растворанатра едкого (0,1 моль/л), в граммах; V - объем раствора натра едкого (0,1моль/л), пошедшего на титрование, в миллилитрах; m - масса сырья вграммах; W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.Так же изучен состав органических кислот методом разделение припомощи электрофореза на приборе Капель 105/105М (таб.
21).Система капиллярного электрофореза «Капель». Буфер: бензойнаякислота 10 мМ, ДЭА 9 мМ, ЦТАБ 0,5 мМ, ЭДТА 0,1 мМ. Капилляр:Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм. Ввод пробы: 150 мбархс. Напряжение: –20 кВ. Детектирование: 254 нм, косвенное. Стандартная смесь органическихкислот (по 10 мг/л каждой) [55].Методика определения содержания аскорбиновой кислоты.
Из грубоизмельченной аналитической пробы брали навеску массой 20 г, помещали в72фарфоровую ступку, где тщательно растирали со стеклянным порошком(около 5 г), постепенно добавляя 300 мл воды, и настаивали 10 мин. Затемсмесь размешивали и извлечение фильтровали. В коническую колбувместимостью 100 мл вносили 1 мл полученного фильтрата, 1 мл 2%раствора хлористоводородной кислоты, 13 мл воды, перемешивали ититровалиизмикробюреткираствором2,6-дихлорфенолиндофенолятанатрия (0,001 моль/л) до появления розовой окраски, не исчезающей втечение 30-60 с [30].где 0,000088 - количество аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 млраствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия (0,001 моль/л), в граммах; V объемраствора2,6-дихлорфенолиндофенолятанатрия (0,001 моль/л),пошедшего на титрование, в миллилитрах; m - масса сырья в граммах; W потеря в массе при высушивании сырья в процентах.Количественное определение суммы оксикоричных кислот в травегорца проводили методом УФ-спектрофотометрии [59,65,117].
В качествераствора сравнения использовали раствор кислоты соляной 0,1 М.Регистрацию УФ-спектров проводили с помощью спектрофотометра СФ2000-01. Содержание оксикоричных кислот в траве горца почечуйногоопределяливпересчетенацикориевуюкислоту,согласноранееразработанной нами методике.Методика: 1 г (точная навеска) сырья помещают в колбу со шлифом,прибавляли 0,1 г кислоты щавелевой и 10 мл 95% спирта этилового,взвешивали и присоединяли к обратному холодильнику, и нагревали 45 мин.Охлаждали.
Извлечение фильтровали. На линию старта фильтровальнойбумаги наносили по 0,02 мл извлечения и хроматографировали вхлороформе, высушивали. Отмечанные участки стартовых линий вырезали ипомещали в колбу на 25 мл и добавляли 10 мл 0,1 М кислоты73хлороводородной и перемешивали в течении 30 мин. Измеряли оптическуюплотность при блине волны 328 ± 2 нм, в качестве раствора сравненияиспольхзовали0,1МкислотухлороводороднуюРезультаты[138].представлены в табл.
20.Где, D – оптическая плотность испытуемого раствора; m – масса сырья взятаяна анализ, г; W –потеря в массе при высушивании сырья, %.Таблица 20. Количественное содержание органических и оксикоричныхкислот в траве горца почечуйного (n = 5; р = 0,95)Объект исследованияСумма органических кислот впересчете на яблочную, %Содержание оксикоричных кислот впересчете на цикориевую,%Содержание аскорбиновой кислоты, %Содержание БАВ, %0,630±0,0041,200±0,0140,034± 4,6*10-4Таблица 21. Содержание органических кислот в траве горца почечуйногометодом капиллярного электрофорезаОрганические кислотыСодержание, %Яблочная кислота1,8Янтарная кислотаМенее 0,05*Масляная кислотаМенее 0,05*Молочная кислотаМенее 0,12**- нижний придел измерения прибораНД на метод испытанияМ 04-74-2012Таким образом, в составе травы горца почечуйного определеносодержание органических кислот, в частности аскорбиновой кислоты, иоксикоричный кислот.
Установлено, что среди свободных органическихкислот преобладает яблочная кислота (1,8%).Данныепопроанализированнымпочечуйного представлены в табл. 22. [135]группамБАВтравыгорца74Таблица 22. Содержание некоторых групп БАВ в траве горца почечуйногоОбъектГруппа БАВФлавоноиды (спектрофотометрия)Полисахариды (гравиметрия)Свободные аминокислоты(спектрофотометрия)Сумма свободных и связанныхаминокислот (капиллярныйэлектрофорез)Сумма дубильных веществ(пермангонатометрическое титрование)Танин (спектрофотометрия)Органические кислоты(алкалиметрическое титрование)Аскорбиновая кислота (титриметрия)Оксикоричные кислоты(спектрофотометрия)СапониныАнтраценпроизводныеАлкалоидыЭфирное маслоНаличиеБАВ++Содержание БАВ,%1,26±0,014%16,95±0,85%+0,61±0,03%+9,02±0,01%+14,60±0,80%+0,65±0,03%+0,63±0,004%+0,034±4,6*10-4%+1,200±0,014%++Присутствует в незначительномколичествеВыводы к главе 41.
С помощью качественных фитохимических реакций подтвержденоналичие флавоноидов, а также показано присутствие сапонинов,дубильныхвеществ,кумаринов,простыхфенолов,кислотыаскорбиновой, аминокислот, полисахаридов, следов эфирного масла.2. В результате ТСХ-анализа идентификацированы основные группысоединений, присутствующие в траве горца почечуйного: веществфенольного характера - дубильных веществ (галловая кислота, танин),углеводные компоненты (фруктоза, ксилоза), оксикоричные кислоты(коричная, кофейная), органические кислоты (янтарная, лимонная иаскорбиновая кислоты, щавелевая), а также вещества тритерпеновойприроды и антраценпроизводные.
Характерные зоны БАВ наблюдались75как в водных, так и водно-спиртовых извлечениях из травы горцапочечуйного. Определены количественные характеристики основныхгрупп БАВ.3. Проведен ГХ-МС анализ состава БАВ травы горца почечуйного.Получены массспектры 62 веществ органической природы, из нихидентифицировано 17: эритритол, глицерин, ксилит, D-фруктоза, Dфруктопироноза, галактопироноза, сахароза, 2 вещества антоциановойприроды, галловая кислота, изофлавон, пальметиновая, стеариноваякислоты, риботимидин и фитостерол, а так же различные органическиекислоты (пирослизевая кислота).4.
Изучены УФ – спектры извлечений, полученных из травы горцапочечуйного с помощью растворителей разной полярности. Визвлечениях были обнаружены максимумы поглощения групп БАВ,присутствие которых было показано с помощью качественных реакцийи ТСХ.5. Показана нецелесообразность использования полученных максимумовпоглощения в качестве аналитических, так как на их интенсивность иобщий вид спектра влияют все группы БАВ, присутствующие врастительном сырье.6.
Получены УФ – спектры извлечений из травы горца почечуйного.Показана возможность их использовани для качественного анализаприсутствия тех или иных групп БАВ только в качестве «отпечатковпальцев».76Глава 5. Изучение показателей безопасности и минерального состава травыгорца почечуйногоВРоссиидикорастущихзаготовкарастенийтравынагорцапочечуйноготерриториях,удаленныхпредусмотренаототисточниковпромышленного загрязнения. В инструкциях по сбору и сушке ЛРС отмечается,что его не следует заготавливать в городах, вблизи от автодорог и промышленныхпредприятий, но конкретные предельные расстояния от источников загрязненияне указывается. Из-за неопределенности этих рекомендаций ЛРС может оказатьсязаготовленным в зоне техногенного воздействия предприятий [75].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
