Диссертация (1141415), страница 10
Текст из файла (страница 10)
В случаеиспользования 30 и 50% этанола обнаруживаются максимумы при 410 нм, сприменением 70 и 90% спирта наблюдаются максимумы при 600, 650 нм.63При использовании в качестве экстрагента воды, на спектрахприсутствует два максимума поглощения при 280 и 330 нм.Спектры поглощения были также определены для извлечений из травыгорца почечуйного, полученных с помощью средне – и малополярныхорганических растворителей. На всех полученных с помощью органическихрастворителей спектрах, наблюдаются максимумы при 330±20 нм (чтохарактерно для соединений фенольной природы, а также агликоновразличных соединений) и при 660 ±10 нм (разновидности хлорофиллов).Максимумы с наибольшей интенсивностью наблюдались на спектрепоглощения (рис.
12.) ацетонового извлечения. Связано это с тем, что ацетонотносится к среднеполярным органическим растворителям, извлекающимбольшее количество органических соединений, в том числе и растительныхпигментов.Наименьшееколичествомаксимумовнаблюдалосьприиспользовании малополярных растворителей, таких как хлороформ и гептан,что объясняется их способностью растворять в себе ограниченный кругвеществ.Однако, по совокупности результатов, полученных на данном этапеэксперимента, исследуемые максимумы поглощения нельзя признатьаналитическим, ввиду того, что при изучении конкретных групп БАВрастительных объектов, на величину оптической плотности и общуюкартину спектра имеет место влияние других, сопутствующих соединений.В связи с этим, картины спектров поглощений извлечений из травыгорца почечуйного, полученных с помощью различных растворителей,можно использовать для качественного анализа присутствия тех или иныхгрупп БАВ только в качестве «отпечатков пальцев».644.5.Количественное определение некоторых БАВ в траве горцапочечуйногоНа следующем этапе исследования было определено количественноесодержание отдельных групп БАВ, присутствующих в траве горцапочечуйного – полисахаридов, дубильных веществ, органических иоксикоричных кислот, аминокислот.4.5.1.
Количественное определение полисахаридов в траве горцапочечуйногоСодержание полисахаридов определяли гравиметрическим методом,описанном в ст. 20 ГФ ХI «Листья подорожника большого». Методикаоснована на способности полисахаридов осаждаться спиртом этиловым 95%из водных извлечений [16,30,53,68].Для анализа использовали сырье с размером частиц, проходящихсквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 10,0 (точная навеска)сырья помещали в колбу со шлифом объемом 250 мл, прибавляли 200 млдистиллированной воды, и нагревали с обратным холодильником приперемешивании на электрической плитке в течение 30 мин. Экстракциюпроводили еще 2 раза, используя первый раз 200 мл, второй раз 100 мл воды.Извлечения объединяли и центрифугировали с частотой вращения 5000об/мин в течение 10 мин и декантировали в мерную колбу объемом 500 млчерез 5 слоев марли.
Фильтр промывали водой и доводили объем раствораводой до метки (раствор А). 25 мл раствора А помещали в пробирку дляцентрифугирования,прибавляли75мл95%спиртаэтилового,перемешивали, нагревали на водяной бане до 300С в течение 5 мин. Через чассодержимое центрифугировали с той же частотой вращения в течение 30мин. Надосадочную жидкость фильтровали под вакуумом при остаточномдавлении 13-16 кПа через высушенный до постоянной массы притемпературе 100-1050 стеклянный фильтр ПОР 16 диаметром 40 мм. Осадок65количественно переносили на фильтр и последовательно промывали 15 млраствора 95% спирта этилового в воде (3:1), 10 мл ацетона, 10 млэтилацетата.
Фильтр с осадком высушивали сначала на воздухе, затем притемпературе 100-1050. С до постоянной массы.Содержание полисахаридов в траве горца почечуйного составило16,95±0,85% (n = 5; p = 0,95) в пересчете на абсолютно сухое сырье.где, m1- масса фильтра в граммах; m2 – масса фильтра с осадка в граммах; mмасса сырья в граммах; W – потеря в массе при высушивании сырья впроцентах.4.5.2. Количественное определение аминокислот в траве горцапочечуйногоКоличественное определение суммы свободных аминокислот в травегорца почечуйного определяли спектрофотометрическим методом, по ихреакции с нингидрином в анализируемом максимуме 568 нм [80,101].Для анализа использовали сырье измельченное до размера частиц,проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм.
Около 1,0 (точнаянавеска) сырья помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл,прибавляли 25 мл воды. Колбу присоединяли к обратному холодильнику инагревали на кипящей водяной бане в течении 30 мин, периодическивстряхивая. Горячее извлечение фильтровали через бумажный фильтр вмерную колбу объемом 100 мл, фильтр помещали обратно в колбу дляэкстрагирования. Экстракцию повторяли еще раз, фильтрование проводили вту же мерную колбу. После охлаждения объем извлечения доводили дометки и перемешивали (раствор А).66В мерную колбу объемом 100 мл помещали 2 мл раствора А,прибавляли 4 мл фосфатного буфера с рН 6,4; а также 2 мл 1% растворанингидрина в 95% спирте этиловом и 2 мл 0,05% водного растворааскорбиновой кислоты.
Реакционную смесь нагревали на кипящей водянойбане в течении 30 мин; быстро охлаждали, доводили объем раствора дометки и перемешивали.Параллельно проводили аналогичные опыты с 2 мл раствора В РСОглутаминовой кислоты и 2 мл воды (контрольный опыт).Измеряли оптическую плотность на спектрофотометре при длиневолны 568 нм, используя в качестве раствора сравнения контрольный опыт[80].Где, D – оптическая плотность испытуемого раствора; D0 – оптическаяплотность РСО глутаминовой кислоты; m – масса сырья, г; m0 – навеска РСОглутаминовой кислоты, г; W – потеря в массе при высушивании сырья, %.Содержание свободных аминокислот в пересчете на глутаминовуюкислоту в траве горца почечуйного составляет 0,61±0,03% (n=6, p 0,95).Полный состав аминокислот (свободные и связанные аминокислот)исследуемого ЛРС изучали методом капиллярного электрофореза («Капель105/105М»,«Люмэкс»,СПб,Россия),дляэтогонавескиобразцовгидролизовали 6 М кислоты хлороводородной при температуре 110±5 °С втечение 16-18 часов [108].
Метод основан на получении из свободных формаминокислот фенилизотиокарбамильных производных, дальнейшем ихразделении и количественном определении (рис. 13.). Условия разделения:буфер 30 мМ фосфатный, 4 мМ β-циклодекстрин (рН 7,4); капилляр(Lэфф/Lобщ =65/75 см, ID=50 мкм); ввод пробы 150 мбар×с; напряжение +25кВ; УФ-детектирование 254 нм; температура 30°С [22,48,100]. Результатыпредставлены в табл. 19.332валин 10.551пролин 10.371треонин 12.292серин 9.766аланин 9.1424гистидин 6.6515тирозин 9.405фенилаланин 11.329аргинин 23.000лизин 9.3286метионин 2.916изолейцин 7.723лейцин 12.742mAUглицин 10.002677Capel5678минРис.
13. Электрофореграмма аминокислот, полученная на системе длякапиллярного электрофореза «Капель-105/105М»Определено 17 аминокислот, из них незаменимых 7 (3,3%). Суммарноесодержание составляет 9,02%.Таким образом, показано достаточно высокое содержание аминокислотв траве горца почечуйного. Благодаря этому, траву горца почечуйного можноиспользовать в перспективе в качестве источника аминокислот.Таблица 19. Содержание аминокислот в траве горца почечуйного№п/п123456789101112Наименование аминокислотArgLysTyrPheHisLeuIleMetValProThrSerСодержание, %1,130,460,450,560,330,630,380,140,520,510,610,48681314151617AlaGlyCysGluAspСумма0,450,490,081,110,699,024.5.3. Количественное содержание дубильных веществ в травегорца почечуйногоОсновнымфармакопейнымметодом,используемымдляколичественной оценки содержания танинов в растительном сырье, являетсяперманганатометрическое титрование [26,30].
Методика приведена в ОФСГФ XIII «Определение дубильных веществ в лекарственном растительномсырье и лекарственных растительных препаратах» [26].Около 2,0 (точная навеска) измельченного ЛРС просеянного сквозьсито с отверстиями размером 3 мм, помещали в колбу объемом 500 мл,заливали 250 мл нагретой до 100° С воды и кипятят с обратнымхолодильником на электрической плитке с закрытой спиралью в течение 30мин при периодическом перемешивании. Полученное извлечение охлаждалидо комнатной температуры и фильтровали через вату в мерную колбуобъемом 250 мл, далее доводили объем раствора водой до метки иперемешивали. 25,0 мл полученного водного извлечения помещали вконическую колбу объемом 1000 мл, прибавляли 500 мл воды, 25 млраствора индигосульфокислоты и титровали при постоянном перемешиваниираствором калия перманганата 0,02 М до золотисто-желтого окрашивания.Параллельно проводят контрольный опыт: в коническую колбуобъемом1000млиндигосульфокислотыпомещалии525титровалимлприводы,25постоянноммлраствораперемешиваниираствором калия перманганата 0,02 М до золотисто-желтого окрашивания.1 мл калия перманганата раствора 0,02 М соответствует 0,004157 гдубильных веществ в пересчете на танин.69Содержание суммы дубильных веществ в пересчете на танин вабсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:(V – V1)*0,004157*250*100*100X = ——————————————— ,A*25*(100 – W)гдеV – объем калия перманганата раствора 0,02 М, израсходованного натитрование водного извлечения, мл;V1 объем калия перманганата раствора 0,02 М, израсходованного натитрование в контрольном опыте, мл;0,004157 – количество дубильных веществ, соответствующее 1 млкалия перманганата раствора 0,02 М (в пересчете на танин), г;a – навеска сырья или лекарственного растительного препарата, г;W – влажность лекарственного растительноголекарственного растительного препарата, %;сырьяили250 – общий объем водного извлечения, мл;25 – объем водного извлечения, взятого для титрования, мл.В результате установлено, что в траве горца почечуйного содержится14,60±0,80% (n=6, p 0,95) суммы дубильных веществ в пересчете на танин.При исследовании спектральных характеристик 70 % водно-спиртовогоизвлечения из травы горца почечуйного было установлено присутствиемаксимума поглощения при длине волны 275 нм, характерного для танина[100] (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
