Диссертация (1141415), страница 9
Текст из файла (страница 9)
12.)АБРис. 6. Схема хроматограмм аминокислот травы горца почечуйногометодами ТСХ (А) и БХ (Б):1- РСО глутаминовой кислоты 0,1% раствор2,4 – Водное извлечение из травы горца почечуйного3,5- Водно-спиртовое извлечение их травы горца почечуйного53Таблица 12. Результаты исследования травы горца почечуйного методомбумажной хроматографииRf ±0,02Соответствующее веществоВодное извлечениеГлицин*Не идентифицированоВодно-спиртовое извлечение0,25Глицин**- литературные данные120,250,391В водном извлечении идентифицирована глутаминовая кислота (Rf026).
В связи с отсутствием стандартных образцов остальные зоны неидентифицированы. Методом БХ показано наличие в как водном, так иводно- спиртовом извлечении присутствие глицина.4.2.4. ТСХ анализ антраценпроизводных травы горца почечуйногоХроматографический анализ антраценпроизводных проводили в двухподвижных фазах: 1. бутанол: ледяная уксусная кислота : вода (4:1:2), 2.этилацетат : метиловый спирт : вода (100:17:13), проявитель - 5% растворедкогонатра,вУф-светенаблюдалиголубоесвечениезон[36]антраценпроизводных, в видимом свете зоны приобретали вишнево-красноеокрашивание (табл. 13.,рис. 7.).Таблица 13.
Результаты хроматографического определенияантраценпроизводных в траве горца почечуйного№ пп123Rf зон ±0,02Водно-спиртовое извлечение0,210,510,69Водное извлечение0,260,560,7954АБРис. 7. Схема ТСХ - хроматограммы антраценпроизводных травы горцапочечуйного. А - в системе бутанол: ледяная уксусная кислота : вода(4:1:2); Б - в системе этилацетат : метиловый спирт : вода (100:17:13)1 – водно-спиртовое извлечение из травы горца почечуйного2 - водное извлечение из травы горца почечуйногоНа хроматограммах каждого извлечения установлено наличие по трехзон адсорбции с различными значениями Rf (табл. 13).
По характерусвечения зон в УФ – свете и окраске после обработки раствором натриягидроксида идентифицировать соединения не было возможности.В системе этилацетат: метиловый спирт : вода (100:17:13) нахроматограмме присутствовало 4 зоны в водно-спиртовом и 3 зоны в водномизвлечениях.Средиполученныхзонбылидентифицирован франгулин (Rf = 0,84) (рис. 7, табл. 14).предположительно55Таблица 14. Результаты хроматографического определенияантраценпроизводных в траве горца почечуйного в системе этилацетат :метиловый спирт : вода№ ппRf ±0,02СоответствующеевеществоВодное извлечение10,14Не идентифицировано20,52Не идентифицировано30,84Франгулин*Водно-спиртовое извлечение10,13Не идентифицировано20,52Не идентифицировано30,80Не идентифицировано40,86Франгулин**- литературные данные [137]4.2.5.
ТСХ анализ оксикоричных кислот травы горца почечуйногоДля идентификации оксикоричных кислот в траве горца использовалисистему 15% уксусная кислота [37], зоны наблюдали в Уф-свете в виде пятенс желтой флюоресценцией. В качестве стандартов использовали РСОхлорогеновой (Rf=0,87), РСО кофейной (Rf=0,96) и РСО кoричной (Rf=0,85)кислот в концентрации 0,1% , объем наносимой пробы стандартов составил5 мкл (рис. 8., табл.15.).Таблица 15.
Результаты хроматографического определения оксикоричныхкислот в траве горца почечуйного№ пп12341Rf ± 0,02Соответствующее веществоВодное извлечение0,56Не идентифицировано0,71Не идентифицировано0,84Коричная кислота0,94Кофейная кислотаВодно-спиртовое извлечение0,83Коричная кислота56Рис. 8.Схема ТСХ - хроматограммы определения оксикоричныхкислот в траве горца почечуйного1- РСО Кофейная кислота 0,1% раствор2- РСО Хлорогеновая кислота 0,1% раствор3- РСО Коричная кислота 0,1% раствор4- Водно-спиртовое извлечение из травы горца почечуйного5- Водное извлечение из травы горца почечуйногоВ результате хроматографического определения в траве горцапочечуйного было обнаружено 4 зоны оксикоричных кислот в водномизвлечении, 2 из которых относится кофейной (Rf=0,94) и коричной(Rf=0,84) кислотам.
В водно-спиртовом извлечении - идентифицированакоричная кислота (Rf=0,83).4.2.6. ТСХ анализ сапонинов травы горца почечуйногоОпределение сапонинов проводили в системе бутанол:этанол:аммиак(7:2:5). В качестве детектирующего реагента был использован 25%-ныйраствор фосфорно-вольфрамовой кислоты [67] (рис. 9., табл. 16.). В57спиртовом извлечении обнаружено 5 зон, в водном – 2 зоны веществсапониннойприроды(розовая-фиолетоваяокраскапятеннахроматограммах).Таблица 16. Результаты хроматографического определения сапонинов визвлечении из травы горца почечуйного№ пп12345Rf зон ± 0,02Водное извлечение0,220,52-Водно-спиртовое извлечение0,560,620,670,720,96Рис.
9. Схема ТСХ - хроматограммы определения сапонинов в травегорца почечуйного1- Водно- спиртовое извлечение из травы горца почечуйного2- Водное извлечение из травы горца почечуйного584.2.7. ТСХ анализ флавоноидов травы горца почечуйногоДля проведения исследования флавоноидов из измельченного ЛРС,экстрагировали разнополярными растворителями (вода, спирт этиловый вконцентрациях 30, 50, 70, 90 %, этилацетат, хлороформ, гептан) всоотношении 1: 50на водяной бане с обратным холодильником, затемфильтровали.Хроматографирование было проведено, в системе этилацетат –муравьиная кислота – вода (10:2:3) [67,125,129], другие системы не далихорошего разделения. Проявляющим реагентов являлся 5% раствор хлоридаалюминия с последующим детектированием в УФ – свете.
В качествестандартных растворов являлись РСО рутина и кверцетина в концентрации0,1% (табл.17.).Таблица 17. Rf зон флавоноидов травы горца почечуйного, полученныхразличными экстрагентамиRf ± 0,020,110,25; 0,270,53; 0,550,600,68; 0,70; 0,720,770,840,870,900,99ЭкстрагентЭтанол 30%Этанол 50%, 70%Этанол 30%, 50%, 70% (рутин)ХлороформЭтанол 90%, 50%, 70% (авикулярин)Вода, этилацетатЭтанол 50%, 70% (гиперозид)Вода (гиперозид)Этанол 70% (кверцетин)ЭтилацетатВ результате хроматографического исследования в траве горцапочечуйного установлено присутствие 10 веществ флавоноидной природы.Идентифицированы рутин, авикулярин, гиперозид, кверцетин, остальные небыли идентифицированы из-за отсутствия стандартных веществ и данных в59литературе.
При использовании в качестве экстрагента гептана, зон,соответствующих флавоноидам, обнаружено не было.Такимобразом,былпроведенкачественныйТСХ-анализсидентификацией основных групп соединений: веществ фенольного характера- дубильных веществ (галловая кислота, танин), углеводные компоненты(фруктоза,ксилоза),оксикоричныекислоты(коричная,кофейная),органические кислоты (янтарная, лимонная и аскорбиновая кислоты,щавелевая),атакжевеществатритерпеновойприродыиантраценпроизводные. Характерные зоны БАВ наблюдались как в водных,так и водно-спиртовых извлечениях.4.3.ГХМС исследование химического состава травы горцапочечуйногоТехнологияГХ/МСпризнана«золотымстандартом»всфереидентификации химических веществ в простых и сложных смесях.
Крометого, технология способна распознавать вещества на следовом уровне,который недостижим при помощи других технологий.Пробоподготовка: Взвешивали 1-10 мг образца в 2 мл реакционнойвиале (пузырьке), далее прибавляли 1,0 мл абсолютного пиридина (AcrosOrganics, CAS 11086-1) и 200 мкл силилирующего реагента - BSTFA +1%TMCS(илиN,O-бис(триметилсилил)трифторацетамид+1,0%триметилхлорсилана) Supelco, Cat. No. 360244-U, выдерживаем смесь при 70градусах в термостате, в течении 30-40 мин. Затем, 50 мкл образца,подготовленного, как описано выше, растворяем в 1,0 мл хлористогометилена.
Полученный раствор - анализировали.Для анализа применяли хроматограф газовый Agilent 7890B с МСинтерфейсом Agilent 5977A MSD. Ионизация - электронный удар, энергияионизации70эВ,сканирование30-550а.е.м.(Да).60Газ-носитель - гелий (1,0 мл/мин); термостат 50°С - 3 минуты, 50-190°С10°/мин, 190-25020°/мин,300°С10мин.Инжекция - 1 мкл, деление потока 80:1. Колонка неполярная HP-5MS UI 30мx 0.25мм, 0.25мкм.В ходе эксперимента были получены масс спектры 62 веществорганической природы, из них идентифицировано 17, по данным таблицывидно, что состав обнаруженных соединений очень разнообразен: 3 веществаспиртовой природы (эритритол, глицерин, ксилит), 4 сахара (D-фруктоза, Dфруктопироноза, галактопироноза,сахароза), 2 вещества антоциановойприроды, галловая кислота, изофлавон, 2 жирных кислоты (пальмитиновая,стеариновая), риботимидин и фитостерол, а так же различные органическиекислоты (пирослизевая кислота).
(табл.1., приложения 6).В качествепримера был выбран масс спектр галловой кислоты (время удерживания22,729) (рис.10).Рис.10. Массспектр галловой кислоты4.4.Исследование спектральных характеристик извлечений,полученных разными растворителямиВ последние годы и зарубежные и отечественная фармакопеииспользуют как один из показателей качества УФ-спектры. В связи с этим,были изучены спектры поглощений водно – спиртовых извлечений61полученные при анализе экстрактивных веществ травы горца почечуйного.Определение проводили в диапазоне длин волн от 200 до 700 нм.
В качествераствора сравнения использовали чистый экстрагент (рис. 11, 12., табл. 18.).Рис. 11. Спектры поглощения водных и водно – спиртовых извлечений (1:50)из травы горца почечуйногоРис. 12. Спектры поглощения извлечений полученных органическимирастворителями (1:50) из травы горца почечуйногоВ полученных спектрах (рис. 11,12.) отчетливо выделяются максимумыпоглощений.62Таблица 18.
Спектральные характеристики извлечений из травы горцапочечуйного, полученных разными растворителями [94,134,141]Экстрагент используемыйдля получения извлеченияВода30% спирт этиловый50% спирт этиловый70% спирт этиловыйМаксимумыпоглощения, нм28033022027041021027041023035060065021090% спирт этиловый330АцетонЭтилацетатХлороформГептан660205250280350610270320370410500560350410470670Группа соединений, для которыххарактерны максимумы поглощенияСоединения тритерпеновой природы,флавоноиды, фенолокислотыТритерпеновые сапонины, фенольныесоединения (флавоноиды, ауроны,фенолокислоты, дубильные вещества)Тритерпеновые сапонины, фенольныесоединения (флавоноиды, ауроны,фенолокислоты, дубильные вещества)Соединения фенольной природы(фенолокислоты, фенолоспирты,дубильные вещества, флавоноиды),хлорофиллСоединения тритерпеновой природыФенолокислоты, фенолоспирты,агликоны флавоноидовхлорофиллСоединения фенольной природы(фенолокислоты, фенолоспирты,дубильные вещества, флавоноиды),ХлорофиллФенольные соединения (эфирыгалловой, коричной кислот,метоксикумаровая кислота,флавоноиды, дубильные вещества)Антоциановые соединенияАгликоны фенольных соединенийАгликоны фенольных соединений,стероидные компонентыПри использовании в качестве экстрагента спирто – водных смесейнаблюдаютсяпримерноодинаковаякартинаспектров:максимумыпоглощения в диапазоне 220±10 нм, 270±10 нм, 350 нм.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
