Диссертация (1141415), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Проведён углубленный микроскопический анализ цельной травы горцапочечуйного. Установлены и уточнены анатомо-диагностические признакистебля,листа,раструба,цветкаиплодагорцапочечуйного,визуализированы и даны их метрологические характеристики.2. Усовершенствованамикроскопическойвключений:пробоподготовкаидентификациисырьетравыстроенияобрабатывается10%горцатрихомпочечуйногоидлясекреторныхрастворомкислотыхлороводородной с последующим кипячением в 5% растворе натриягидроксида (для удаления друз оксалата кальция, мешающих анализу).3.
Проведен микроскопический анализ измельченного сырья и крупногопорошка травы горца почечуйного. Установлены анатомо-диагностическиепризнаки сырья.444. Проведено изучение вариабильности анатомо-диагностических признаковпри измельчении сырья. Показано, что наиболее вариабильными являютсяструктуры стебля, раструба, фрагменты цветка и плода. Практически внеизменном виде остаются диагностические элементы листа горцапочечуйного.5. Проведено сравнительное анатомо-диагностическое изучение травы горцапочечуйного и возможных примесей (горцы малый, щавелелистный ищетинистый).
Выявлены основные отличительные признаки.45Глава 4. Изучение состава БАВ травы горца почечуйногоФармакологическое действие травы горца почечуйного определяетсявсем комплексом БАВ сырья, поэтому было проведено углубленноеисследование и систематизация данных об отдельных группах БАВ висследуемом сырье.4.1. Исследование химического состава травы горца с помощьюосновных качественных реакцийНа первом этапе был проведен качественный анализ травы горцапочечуйного с идентификацией основных групп веществ, с использованиемобщеизвестных фармакопейных реакций, и реакций описываемых в научнойлитературе [57].В результате в исследуемом сырье было подтверждено наличиефлавоноидов, а также показано присутствие сапонинов, дубильных веществ,кумаринов,простыхфенолов,кислотыаскорбиновой,аминокислот,полисахаридов, следов эфирного масла (табл.
7.).Таблица 7. Результаты исследования качественного состава БАВ травыгорца почечуйногоИспользуемый реактивРезультат реакцииФлавоноиды(Цианидиновая реакция)металлический магний, кислотахлороводородная конц.Красное окрашивание5% спиртовый растворхлоридаалюминияЛимонно-желтоеокрашивание1% раствор хлорида железа (III)1% раствор желатинаРеактив Фолина-ДенисаНаличие вещества+Темно-коричневоеокрашиваниеДубильные веществаПомутнение раствораСине-фиолетовоеналичие флавоноидов,имеющих 2 оксигруппы вC3 и С5 положенияхналичие флавонов,халконов, ауронов+гидролизуемая группа46(фосфорновольфрамовая ифосфорномолибденовая кислоты)окрашивание околодубильных веществкристаллов натрияацетата1% раствор хинина сульфатаВыпадение осадка+Выпадение красно-кирпичного осадкаконденсированных дубильных веществ иРеакция Стиаснифиолетовое окрашивание гидролизуемыхдубильных веществФенолыПоявляется+красноватоКристаллик железа сульфатфиолетовое, затемзакисный (водное извлечение)темно-фиолетовоеокрашивание и темнофиолетовый осадокПолисахариды, свободные сахарахлопьевидные+Осаждение слизи этанолом изсгустки, выпадающиеводного извлеченияв осадокС ацетатом свинца (водное+Объемный осадокизвлечение)СапониныПроба на пенообразование (водноеНеобильноеСапонины (небольшоеизвлечение)пенообразованиеколичество)Беловатый осадок+Ацетат свинца (водное извлечение)Холестерин (спиртов извлечение)(Проба Лафона) Серная кислотаконц., 10% раствор сульфата железа(спиртов извлечение)Реакциция Сальковского(хлороформ, кислота серная) (водноеизвлечение)Беловатый осадокПоявлениезеленоватой окраски+присутствие сапониновОрганический слойокрашен в оранжевокоричневый цвет.Алкалоиды+Реактив Драгендорфа (нитратвисмута, вода, кислота уксусная,калия йодид)Кирпично – красныйосадок+Реактив Вагнера (йод, калия йодид)Темно коричневыйосадок+Пикриновая кислотаЖелтый осадок10% раствор танинаБеловатый осадокКумарины и хромоныПомутнение раствораЛактонная проба: (спиртовоеи появление желтогоизвлечение).
10% р-р спиртовогоокрашивания прикалия гидроксида, 10% р-р кислотыдобавлении щелочи,хлороводороднойисчезающие приподкисленииМикросублимацияКапли желтого цвета сАлкалоиды в виде солей иоснованийАлкалоиды в виде солей иоснований+-+47желтойфлуоресценциейКрасно – буроеДиазореактивокрашиваниеАминокислотыФиолетовое2% спиртовой раствор нингидринаокрашивание++4.2.
Хроматографический анализ БАВ травы горца почечуйногоПри изучении БАВ в различных растительных объектах широкоиспользуется метод ТСХ, сочетающий высокую чувствительность ипростоту, позволяющий разделить сумму БАВ, провести их идентификациюи определить количественное содержание [128].Анализпроводилихроматографированиемнакамерупластинкахнасыщали«Sorbfil»(Россия).соответствующейПередсистемойрастворителей 30-40 мин [21,50,140]. На линию старта хроматографическойпластинки наносили по 10 мкл водного (1:10) и 70% спиртового (1:50)извлечения травы горца почечуйного и 0,1% растворов стандартныхобразцов.4.2.1.
ТСХ анализ органических кислот в траве горца почечуйногоЗоны органических кислот на хроматограммах бесцветны, поэтому,учитывая их способность вступать в окислительно – восстановительныереакции, хроматограммы необходимо обрабатывать индикаторными смесями(табл. 8.).Полученные результаты показали, что оптимальным детектирующимреагентом является бромкрезоловый зеленый в концентрации 0,2%.В качестве подвижной фазы была выбрана элюирующая системаэтилацетат : уксусная кислота : муравьиная кислота : вода (100:11:11:25) [81],вкоторойнаблюдаласьклассическаякартинахроматографическогоразделения, в других системах разделения не наблюдалось.48Таблица 8.
Характеристика детектирующих реагентов для определенияорганических кислот методом ТСХ№п/пДетектирующий реагент1Без проявителя20,5 % растворбромкрезолового зеленого30,2 % растворбромкрезолового зеленого40,05 % растворбромфеноловый синий5Смесь бромкрезоловогосинего и метиленовогокрасногоПределобнаружения, гРезультатВидимых пятен ненаблюдаетсяВидимых пятен ненаблюдается. Фондетектирующегореагента насыщенногосинего цветаНа синем фоненаблюдается наличиежелтых пятенорганических кислотНа фиолетовом фонежелтые пятнаорганических кислотПятна имеют слабо –желтую окраску.Окраскадетектирующегореагента насыщенногосине – фиолетовогоцвета.--110-6110-4110-4В качестве стандартных образцов использовали РСО аскорбиновой,щавелевой,янтарной,лимоннойкислот.Пластинкивысушиваливсушильном шкафу до исчезновения запаха растворителя.
В качестведетектирующегореагентабылбромкрезоловогозеленого0,2%.использованПриэтомспиртовойрастворорганическиекислотыпроявлялись в виде пятен желтого цвета на синем фоне пластинки (рис. 4.,табл. 9)49Рис. 4. Схема ТСХ - хроматограммы органических кислот в траве горцапочечуйного:1- РСО Аскорбиновая кислота 0,1% раствор2- РСО Янтарная кислота 0,1% раствор3- РСО Лимонная кислота 0,1% раствор4- РСО Щавелевая кислота 0,1% раствор5- Водное извлечение из травы горца почечуйного6- Водно-спиртовое извлечение из травы горца почечуйногоТаблица 9.
Результаты хроматографического определения органическихкислот в траве горца почечуйного№п/пRf ±0,02Соответствующее веществоВодное извлечение1234560,87Янтарная кислота0,48Аскорбиновая кислота0,26Лимонная кислота0,12Щавелевая кислотаВодно-спиртовое извлечение0,85Янтарная кислота0,50Аскорбиновая кислота50Таким образом, в извлечениях из травы горца почечуйного былиидентифицированыследующиеорганическиекислоты:аскорбиновая,янтарная, лимонная и щавелевая кислоты.4.2.2. ТСХ анализ дубильных веществ травы горца почечуйногоПри исследовании дубильных веществ травы горца в качествеподвижной фазы была использована система н - бутанол : уксусная кислота :вода (10:3:7) [52].
Высота подъема растворителя 8 см. В качествестандартного образца использовали спиртовой РСО танина и РСО галловойкислоты. Пластинки высушивали в сушильном шкафу до исчезновениязапаха растворителя. В качестве детектирующего реагента использовали 1%раствор железоаммонийных квасцов. При этом дубильные веществапроявлялись в виде пятен черно – синего цвета на желтоватом фонепластинки (рис. 5., табл. 10.).Рис. 5.
Схема ТСХ - хроматограммы дубильных веществ травы горцапочечуйного: 1 – Водное извлечение из травы горца почечуйного2 – Водно-спиртовое извлечение из травы горца почечуйного3 – РСО танина 0,1% раствор4 – РСО галловой кислоты 0,1% раствор51Таблица 10. Результаты хроматографического определения танинов в травегорца почечуйногоСоответствующеевещество№Окраска пятна123Водное извлечение0,71Галловая кислотаЧерно – синяя0,37Танин0,23Не идентифицированноВодно-спиртовое извлечениечерная0,70Галловая кислота4Rf ±0,02После обработки пластинки детектирующим агентом было обнаруженоналичие3зон(вводномизвлечении),изкоторыхдвебылиидентифицированы как галловая кислота (Rf=0,71) и танин (Rf=0,37), а также 1 зона в водно-спиртовом извлечении – галловая кислота (Rf=0,70).4.2.3.
ТСХ анализ аминокислот травы горца почечуйногоДля идентификации аминокислот в качестве подвижной фазыиспользовали систему бутанол:уксусная кислота : вода (4:1:2), проявитель0,2% раствор нингидрина в спирте, другие системы не давали хорошегоразделения [111]. В качестве стандарта использовали РСО глутаминовойкислоты. Аминокислоты проявлялись в виде розово-фиолетовых пятен набелом фоне (рис. 6а, табл. 11.) [43].В водном извлечении из сырья обнаружилось 9 зон абсорбции, в водно– спиртовом - 3.Таблица 11. Результаты ТСХ определения аминокислот в траве горцапочечуйного№п/п123Rf ±0,020,110,140,20Соответствующее веществоВодное извлечениеНе идентифицированоНе идентифицированоНе идентифицировано52456791011120,26Глутаминовая кислота0,32Не идентифицировано0,42Не идентифицировано0,54Не идентифицировано0,63Не идентифицированоВодно-спиртовое извлечение0,13Не идентифицировано0,49Не идентифицировано0,73Не идентифицированоТак же проводили идентификацию аминокислот методом бумажнойхроматографии, в тех же условиях, объем наносимой пробы составлял 3 мкл[113] (рис.6б, табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
