Диссертация (1141415), страница 17
Текст из файла (страница 17)
Далее титровали спомощью микробюретки (ценой деления 0,01 мл) извлечением из ЛРС доисчезновения розовой окраски.Расчет показателя АОА (мг/г), которому соответствует концентрация БАВвосстанавливающего характера в пересчете на рутин, проводили по формуле:где Х – концентрация БАВ восстанавливающего характера исследуемого объекта,израсходованного на титрование 1 мл 0,05 М (f=1/5) раствора калия перманганата,мг/мл;Ср – концентрация рутина, израсходованного на титрование 1 мл 0,05 М раствораКМnO4, мг/мл;Vр – объем раствора рутина, израсходованный на титрование 1 мл 0,05 Мраствора KMnO4, мг/мл;V0 – объем исследуемого образца, мл;Vx - объем исследуемого образца, израсходованный на титрование 1 мл 0,05 Мраствора KMnO4, мг/мл;m – масса навески исследуемого образца, г.Так как БАВ, отвечающие за проявление антиоксидантной активности,имеют различное химическое строение, и, следовательно, различную способностьрастворяться в водных и спиртовых смесях, на первом этапе исследования былопроведено изучение влияния растворителя на выделение веществ-антиоксидантов.Для этого готовили водные (1:10) и спиртоводные (70% спирт этиловый, 1:50)извлечения, нагревая исследуемые объекты с соответствующим экстрагентом наводяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа.
В полученныхизвлечениях определяли содержание БАВ-антиоксидантов, в соответствии сметодикой.Установлено (табл.46), что наибольшее количество веществ, обладающихантиоксидантной активностью, экстрагируется спиртом этиловым 70%, что,118вероятно, связано с тем, что основной вклад в наличие данного эффекта вносятфенольные соединения (флавоноиды и др.), хорошо растворимые в спирте.Таблица 46. Антиоксидантная активность растительного сырьяАнализируемый объектНастой травы горца почечуйного (1:10)Спиртовое извлечение травы горцапочечуйного (1:50)Спиртовое извлечение травы горцаперечного (1:50)Настой травы душицы*Отвар корней алтея *Антиоксидантная активностьизвлеченийв пересчете на рутин, мг/г1,654,6810,23,81,1*- литературные данные [67]8.2.
Изучение мембраностабилизирующего действия препаратов травы горцапочечуйногоПри изучении мембраностабилизирующего действия препаратов горцапочечуйного необходимо было выявить характер действия препаратов травыгорца почечуйного на механизмы адаптации и резистентности клетки навоздействие на нее разрешающего внешнего неблагоприятного фактора.Для этого применяли методику В.С. Бузламы «Метод разрешающеговоздействия с использованием культуры инфузорий Paramecium caudatum» [1,67,142].
По способности повышать толерантность парамеций к клеточным ядампод воздействием исследуемых веществ можно опосредованно судить об ихадаптогенной активности [46].Объектами исследования явились настой и жидкий экстракт (1:1) травыгорца почечуйного. Так как спирт этиловый в концентрации 70% вызывает гибелькультуры инфузорий, его предварительно отгоняли под вакуумом и полученный119сухой остаток растворяли в дистиллированной воде при слабом нагревании наводяной бане [1].В 25 пробирок помещали 4,5 мл культуры инфузорий в стационарной фазероста. В первую пробирку добавляли 0,5 мл воды, дистиллированной иперемешивали. Во вторую пробирку добавляли 0,5 мл исследуемого образца,перемешивали.
Далее переносили по 0,5 мл жидкости из второй пробирки втретью, из третей в четвертую и т.д. Штатив с пробирками термостатировалисутки при 25˚С [1]. Для установления объема приводящего к 100%-ной гибеликлеток в течении 5 минут из контрольной пробирки отбирали по 1,0 мл культурыинфузорий, добавляли 10%-ный раствор натрия хлорида, каплю полученногораствора наносили на покровное стекло и наблюдали за временем гибели клетокпод микроскопом [1].Оптимальный объем натрия хлорида при добавлении которого наблюдаетсягибель клеток в течение 3,5 минут составил 0,15 мл (рис. 27.).Рис.
27. Зависимость времени жизни культуры инфузорий от добавленногообъема повреждающего фактора.Далее отбирали по 1,0 мл жидкости из опытных пробирок, в качественеблагоприятного фактор добавляли 0,15 мл натрия хлорида, и измерялипродолжительность жизни клеток до 100%-ной гибели [67,142].120Далее рассчитывали индекс биологической активности IБА как отношениепродолжительности жизни (минут) под действием разрешающего фактора клеток,проживших 24 часа в среде с испытуемой концентрацией заданного объекта кпродолжительности жизни (минут) под действием раздражающего фактораклеток, проживших 24 часа в контрольной среде.При значении индекса биологической активности от 1,000 + 0,100 объектсчитается биологически не активным, при значении ›1,000 + 0,1000 - объектповышает жизнеспособность клеток, при значении ‹1,000 + 0,1000 - объектснижает жизнеспособность клеток.Оценкумембранстабилизирующегодействияисследуемыхобъектовпроводили в сравнении с литературными данными по действию в аналогичныхусловиях настоя травы синюхи голубой, настойки аралии и сухого экстрактаэлеутерококка [67,84].
Результаты представлены в табл. 47 и на рис. 28.В ходе эксперимента установлено, что настой травы горца почечуйногопроявляет высокую активность в концентрации 1.10-2–1.10-3, жизнеспособностьклеток сохранялась в концентрациях 1.10-6 -1.10-7, 1.10-9 – 1.10-15, 1.10-20 – 1.10-21,1.10-23, в остальных концентрациях наблюдалась снижение активности. Жидкийэкстракт проявлял активность в концентрациях 1.10-3 и 1.10-4, жизнеспособностьсохранялась в 1.10-5, 1.10-9 и 1.10-19, в остальных активность снижалась, а вконцентрации 1.10-2 наблюдалась гибель клеток. Полученные результаты могутобъясняться высокой концентрацией комплекса БАВ в жидком экстракте горцапочечуйного, близкой к нативной в растении, что и приводило к гибели клеток.121Таблица 47.
IБА препаратов травы горца почечуйногона модели повреждения культуры инфузорий1,551,451,010,720,660,991,000,950,660,680,600,710,630,650,710,661,060,590,950,980,680,670,621,271,020,950,840,830,830,931,051,021,050,85-1,631,821,821,481,18-РазведениеЖидкий экстрактэлеутерококка**1,871,521,30,970,780,990,791,070,731,060,731,130,731,021,161,070,721,030,831,030,821,01,091,011,110,960,990,981,051,110,971,021,101,14-** - литературные данные [67].Настойкааралии**Жидкий экстракттравы горцапочечуйногоНастой травысинюхи**Настой травыгорцапочечуйногоIБА в растворах с концентрациями С, %1·10-21·10-31·10-41·10-51·10-61·10-71·10-81·10-91·10-101·10-111·10-121·10-131·10-141·10-151·10-161·10-171·10-181·10-191·10-201·10-211·10-221·10-231·10-241·10-25122Рис.28.
Зависимость индекса биологической активности исследуемых объектов отих концентрации в растворе.бавРис. 29. Внешний вид Paramecium caudatum. А – до добавления к культуре клетокпрепаратов горца почечуйного, Б – после добавления препаратов к культуреклеток, В – гибель клетки123Выводы к главе 81. Определены показатели антиокислительной активности настоя и жидкогоэкстракта травы горца почечуйного, характеризующие антиоксидантуюактивность препаратов.
Наибольшая активность отмечена у жидкого экстракта.2. Мембранстабилизирующая активность, проявляемая настоем и жидкимэкстрактом травы горца почечуйного, не уступает ведущим растительнымадаптогенам.124ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1. Усовершенствованамикроскопическойпробоподготовкатравыидентификацииигорцапочечуйногопроведёндляуглубленныймикроскопический анализ цельной травы горца почечуйного, измельченной икрупного порошка. Установлены и уточнены анатомо-диагностическиепризнаки стебля, листа, раструба, цветка и плода горца почечуйного,визуализированы и даны их метрологические характеристики. Выявленынаиболее вариабельные при измельчении сырья признаки (структуры стебля,раструба, цветка, плода).
Диагностические элементы листа горца почечуйногоостаются практически в неизменном виде.2. Проведено сравнительное анатомо-диагностическое изучение травы горцапочечуйного и возможных примесей (горцев малого, щавелелистного ищетинистого). Выявлены основные отличительные признаки.3. Изучение химического состава травы и лекарственных форм (настоя ижидкого экстракта) горца почечуйного показало наличие флавоноидов,сапонинов, дубильных веществ, кумаринов, простых фенолов, кислотыаскорбиновой, аминокислот, полисахаридов, следов эфирного масла.
Спомощью ТСХ идентифицированы галловая кислота, танин, коричная,кофейная, янтарная, лимонная, щавелевая и аскорбиновая кислоты.4. Методом ГХ-МС анализа получены масс-спектры 62 веществ органическойприроды, содержащиеся в траве горца почечуйного. Идентифицировано 17соединений: эритритол, глицерин, ксилит, D-фруктоза, D-фруктопираноза,галактопираноза, сахароза, 2 вещества антоциановой природы, галловаякислота, изофлавон, пальметиновая, стеариновая кислоты, риботимидин ифитостерол, а так же различные органические кислоты (пирослизевая кислотаи др.).5. Разработанаивалидированаспектрофотометрическаяметодикаколичественного определения суммы флавоноидов в пересчете рутин в траве125горца почечуйного, а также методика комплексонометрического определениякальция и магния после озоления растительного сырья.6.
В траве и лекарственных формах (настой, жидкий экстракт) горцапочечуйного определено количественное содержание основных групп БАВ:флавоноидов1,260±0,014%,полисахаридов16,950±0,850%,свободныхаминокислот 0,610±0,030%, суммы дубильных веществ 14,600±0,800%,органических кислот 0,603±0,004%, аскорбиновой кислоты 0,034±4,6*10-4%,оксикоричных кислот 1,200±0,014%.7.В траве горца почечуйного изучен полный элементный состав и определеносодержаниетяжелыхметаллов(свинца(0,62±0,130мкг/г),кадмия(0,017±0,0060 мкг/г), ртути (0,004±0,001 мкг/г) и мышьяка (0,032±0,008 мкг/г))пестицидов и радионуклидов. Показано, что трава горца почечуйного неконцентрирует полютанты.8. Установлено наличие антиоксидантного, мембранстабилизируещего действиянастояижидкогоэкстрактатравыгорцапочечуйного.Мембранстабилизирующая активность, проявляемая жидким экстрактомгорцапочечуйного,неуступаетактивностиведущихрастительныхадаптагенов.9.
Материалы исследований были использованы при разработке проектов ФС«Горца почечуйного трава» и «Жидкий экстракт травы горца почечуйного»для Государственной Фармакопеи РФ XIII издания.126СПИСОК СОКРАЩЕНИЙБАВ – биологически активные веществаВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматографияГФ – Государственная ФармакопеяНД – нормативный документОФС – общая фармакопейная статьяТСХ – тонкослойная хроматографияФС – фармакопейная статьяААС – атомно-адсорбционная спектроскопияДДТ - дихлордифенилтрихлорметилметанГХЦГ - γ-изомер гексахлорциклогексанаГХ-МС - Газовая хроматография с масс - детекторомЛРС – лекарственное растительное сырьяЛФ – лекарственная форма127СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.А. с. 9901189.
Способ отбора веществ – адаптогенов / В. С. Бузлама. –Заявл. 21.09.82.2.Абдыкаликова К. А. Фитохимическая оценка различных видовPolygonum (Горца) / К. А. Абдыкаликова, А. Т. Ислямбекова //Биологическое разнообразие азиатских степей: материалы II международнойконференции, 5-6 июня 2012 г. – Костанай, 2012. – С.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
