Диссертация (1141401), страница 22
Текст из файла (страница 22)
При температуре +2 +8ºС, в защищенном от света месте17,687,707,707,687,797,667,5027,687,687,707,667,667,627,4737,667,647,647,647,607,607,4747,757,747,747,667,667,627,5257,707,667,697,667,707,687,58хср7,697,687,697,667,687,647,51В результате исследования установлено, что аналитические растворытрех серий устойчивы не менее чем 24 ч, поскольку значение концентрации151борхлорина в аналите остается практически неизменным в течение данногопериода времени. При дальнейшем хранении образцов в зависимости отусловий отмечается постепенное снижение концентрации борхлорина.
Через28 дней концентрация препарата в образцах 1-ой серии снизилась на 34%, а вобразцах 2-ой серии – на 7%. Аналиты, хранящиеся в холодильнике, посодержанию действующего вещества практически не изменялись.Таким образом, разработанная методика количественного определенияборхлорина позволяет получать надежные результаты анализа даже приизменении внешних условий работы.ЗАКЛЮЧЕНИЕВ результате проведенных исследований разработаны методикикачественного ТСХ-анализа и количественного спектрофотометрическогоопределения борхлорина в ЛЛФ и ЛЛФ-лио.Определеныоптимальныеусловияхроматографированияипредложены системы растворителей, обеспечивающие наилучшее разделениекомпонентов ЛФ.
Для идентификации борхлорина и холестерина выбранасистема бутанол/ледяная уксусная кислота/вода (6:3:2) (Rf=0,50 и Rf=0,67соответственно),ФХ–хлороформ/этанол/ледянаяуксуснаякислота/ацетон/вода (6:2:2:1:1) (Rf=0,48), сахарозы – ацетон/ледяная уксуснаякислота/вода (15:3:2) (Rf=0,55). Проведена оценка пригодности указанныххроматографических систем.При изучении абсорбционных характеристик борхлорина выявлено,что спектр поглощения липосомального борхлорина идентичен спектрупоглощения субстанции борхлорина по положению максимумов и формекривой. Установлено, что вспомогательные вещества, входящие в состав ЛФ,и спирт 95%, используемый в качестве раствора сравнения, практически не152поглощают излучение в области максимумов поглощения борхлорина.
Вкачестве рабочей длины волны для анализа борхлорина в ЛЛФ и ЛЛФ-лиовыбрана полоса поглощения средней интенсивности с максимумом 662 нм.Поглощение спиртового раствора борхлорина подчиняется закону БугераЛамберта-Бера: линейная зависимость значения оптической плотности отконцентрации борхлорина показана в интервале концентраций от 2 до 20мкг/мл. Относительная ошибка спектрофотометрического определенияконцентрации борхлорина в липосомальной дисперсии до и послелиофилизации составила менее 2%.
При помощи валидационной оценкиустановлено,чторазработаннаяметодикаколичественногоанализаборхлорина является специфичной, линейной, правильной, прецизионной иробастной.153Глава 5. Стандартизация и изучение стабильности в процессе храненияЛЛФ-лио борхлорина5.1. Показатели для стандартизации ЛЛФ-лио борхлоринаДляразработкипроектаНДна«Борхлоринлипосомальный,лиофилизат для приготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг» требовалосьопределить показатели, по которым следует контролировать качестводанногопрепаратапослеполученияив процессехранения. Длястандартизации данной ЛФ выбраны следующие показатели качества:описание, регидратируемость, подлинность, количественное определение,однородность дозирования, размер везикул, значение рН, средняя массасодержимого флакона, потеря в массе при высушивании.
Приведенныепоказатели качества приняты на основании результатов, полученных в ходеисследования образцов разработанной ЛФ, с учетом требований НД.Описание.Повнешнемувидувсенаработанныесериипрепаратапредставляли собой сухую пористую массу зеленого цвета.Регидратируемость. При добавлении к содержимому флакона 3,7 мл воды иперемешивании в течение 10 мин образовывалась дисперсия зеленого цвета.Подлинность.Спектрофотометрический анализ (методика представлена в разделе4.2.5.Б.). В области от 300 до 800 нм электронные спектры поглощениярастворов, приготовленных для количественного определения борхлорина вЛФ, имели максимумы поглощения при длинах волн: (400±2), (499±2) и(662±2) нм.ТСХ-анализ(методикапредставленавразделе4.1.1,4.1.4).Прииспользовании системы бутанол/ледяная уксусная кислота/вода (6:3:2) нахроматограмме наблюдали пятно зеленого цвета на уровне СОВС-1борхлорина (Rf=0,50).
После помещения хроматограммы в йодную камерунаблюдали желтое пятно ФХ на уровне соответствующего СОВС-2 (Rf=0,09).После обработки пластинки разведенной серной кислотой и нагревания в154сушильном шкафу проявлялось характерное розово-фиолетовое пятнохолестеринанаиспользованииуровнесоответствующегосистемыСОВС-3(Rf=0,67).хлороформ/этанол/ледянаяПриуксуснаякислота/ацетон/вода (6:2:2:1:1) на хроматограмме наблюдали пятно зеленогоцвета на уровне СОВС-1 борхлорина (Rf=1,00).
После детектирования парамийода на хроматограмме наблюдали образование пятна желтого цвета ФХ науровне СОВС-2 (Rf=0,48), а после обработки пластинки разбавленной сернойкислотой и нагревания в сушильном шкафу проявлялось розово-фиолетовоепятно холестерина на уровне СОВС-3 (Rf=1,00). На хроматограмме прииспользовании системы ацетон/ледяная уксусная кислота/вода (15:3:2) послеобработки раствором α-нафтола в смеси спирта 95% и концентрированнойсерной кислоты обнаруживали темно-фиолетовое пятно сахарозы на уровнеСОВС-4 (Rf=0,55).Количественное определение борхлорина в ЛФ осуществляли методомспектрофотометрии с использованием раствора СО (методика представлена вразделе 4.2.5.Б.)Однородность дозирования. Испытание на «однородность дозирования»проводили способом количественного определения содержания борхлоринапо отдельности в каждом отобранном образце препарата.
С этой цельюотбирали случайным образом по 10 флаконов от испытуемой серии. Каждыйиз полученных результатов выражали в процентах от номинальногосодержания действующего вещества в одном флаконе – 1,0 мг (100%).СогласноОФС.1.4.2.0008.15«Однородностьдозирования»,для10отобранных единиц анализа отклонение от номинала не должно превышать15% [29].Из результатов, представленных в Таблице 27, видно, что содержаниеборхлорина во флаконе для четырех наработанных серий препаратанаходилось в пределах 95-109% от номинала, что укладывается вдопустимые нормы отклонения.155Таблица 27Стандартизация ЛЛФ-лио борхлорина по критериям «Количественноеопределение» и «Однородность дозирования»Серия011012151012200313240413Содержание№Оптическаяборхлорина,образца плотностьмг/флакон10,4301,0220,4251,0130,4291,0240,4231,0050,4341,0360,4381,0470,4231,0080,4261,0190,4241,00100,4331,0310,4421,0520,4451,0630,4331,0340,4461,0650,4581,0960,4551,0870,4211,0080,4271,0290,4501,07100,4451,0610,4120,9820,4191,0030,4281,0240,4100,9850,4110,9860,4241,0170,4221,0080,4331,0090,4411,02100,3990,9510,4351,0420,4491,0730,4411,0540,4271,0250,4451,0660,4501,0770,4371,0480,4511,0790,4421,05100,4271,02Содержаниеборхлорина в% от номинала10210110210010310410010110010310510610310610910810010210710698100102989810110010010295104107105102106107104107105102Метрологическиехарактеристикиn=10; f=9; хср=1,02;S2=2,22×10-4;S=1,49×10-2;Sхср.=4,72×10-3;t (95%,9)=2,26;∆х=0,01; ε=0,98%n=10; f=9; хср=1,05;S2=7,78×10-4;S=2,79×10-2;Sхср.=8,83×10-3;t (95%,9)=2,26;∆х=0,02; ε=1,90%n=10; f=9; хср=0,99;S2=4,89×10-4;S=2,21×10-2;Sхср.=7,0×10-3;t (95%,9)=2,26;∆х=0,016; ε=1,62%n=10; f=9; хср=1,05;S2=3,67×10-4;S=1,92×10-2;Sхср.=6,1×10-3;t (95%,9)=2,26;∆х=0,014; ε=1,33%156Средняя масса содержимого флакона.
Определение средней массыпроводили на 20 флаконах каждой серии. Согласно требованию нормативнойдокументациидопускаетсяотклонениеотсреднеймассы±10%(ОФС.1.4.2.0009.15 «Однородность массы дозированных лекарственныхформ») [29].Средняя масса содержимого флаконов указанных серий колебалась впределах от 0,595 до 0,631 г (Таблица 28). При этом номинальная массасодержимого флакона 0,621 г.Таблица 28Стандартизация ЛЛФ-лио борхлорина по критерию «Средняя массасодержимого флакона»№флакона1234567891011121314151617181920Серия011012М, гО, %0,630-0,20,630-0,20,635+0,60,632+0,20,626-0,80,627-0,60,622-1,40,634+0,50,641+1,60,626-0,80,629-0,30,639+1,30,632+0,20,627-0,60,623-1,30,637+1,00,634+0,50,629-0,30,637+1,00,630-0,2Мср=0,631 г151012М, гО, %0,589-1,40,599+0,20,597-0,20,603+0,90,608+1,70,605+1,20,604+1,00,591-1,00,601+0,50,599+0,20,592-0,90,591-1,00,59800,602+0,700,600+0,30,604+1,00,590-1,20,59800,596-0,30,597-0,2Мср=0,598 гПримечание: М – масса содержимого флакона,Мср -средняя масса содержимого,О – отклонение от средней массы.200313М, гО, %0,606-1,10,607-1,00,602-1,80,610-0,50,608-0,80,620+1,10,625+2,00,612-0,20,620+1,10,607-1,00,605-1,30,610-0,50,621+1,30,609-0,70,615+0,30,620+1,10,619+1,00,610-0,50,612-0,20,621+1,3Мср=0,613 г240413М, гО, %0,597+0,30,588-1,20,591-0,70,600+0,70,586-1,60,598+0,50,607+2,10,603+1,40,599+0,70,593-0,30,599+0,70,597+0,30,592-0,50,591-0,70,587-1,40,586-1,60,589-1,00,598+0,50,594-0,20,604+1,6Мср=0,595 г157Размер везикул.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
