Диссертация (1141392), страница 24

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 24)

Прецизионность оценивалась в двух вариантах:a)повторяемость (внутренняя прецизионность, сходимость) оценивают по независимымрезультатам, полученным в одинаковых регламентированных условиях в одной лаборатории(один и тот же исполнитель, одно и то же оборудование, один и тот же набор реактивов) впределах короткого промежутка времени.Сходимость должна показать, что методика анализа образца при проведении в одинаковыхусловиях обеспечивает получение сравнимых результатов.Оценка и расчет результатов проводится путем вычисления среднего значения, стандартногоотклонения, стандартного отклонения от среднего значения и доверительного интервала,приведенным в таблице 27, 28 и рисункам 36, 37, 38.114Таблица 27 – Результаты десяти определений содержания гераниола в извлечении иззубной пасты «SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы»ОбозначениеСодержание гераниола в зубной пасте «SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbsанализа/ Лечебные травы», мг/100 г пасты14,8124,7234,7444,7554,6364,6074,8584,9194,80104,78Таблица 28 – Результаты статистической обработки данных внутренней прецизионностиСтатистические характеристикиРезультатыНаибольшее значение, мг4,91Наименьшее значение, мг4,60Среднее значение, мг4,759Стандартное отклонение (S)0,0941Стандартное отклонение среднего результата ( )0,0298Доверительный интервал (р=95%)4,759±0,0672Относительное стандартное отклонение среднего результата 1,41%(,% ) (коэффициент вариации)Примечание.

Среднее значение определения вычисляется:Рисунок 36Стандартное отклонение среднего результата вычисляют:Рисунок 37115Доверительный интервал рассчитывают по формуле:Рисунок 38Величина стандартного отклонения обычно не должна превышать 10%. Исходя из имеющихсяданных, можно предположить, что результаты, полученные в ходе валидации методики,сходимы.внутрилабораторная (промежуточная) прецизионность оценивается в условияхb)работы одной лаборатории (разные дни, разные исполнители, разное оборудование).

Результатырасчетов приведены в таблице 29, 30.Таблица 29 – десяти определений содержания гераниола в извлечении из зубной пасты«SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы» в разные дниОбозначениеСодержание гераниола в зубной пасте «Сплат Лечебные травы», мг/100 ганализапастыДень 1День 214,724,9224,744,8934,754,8044,634,7854,604,7564,854,6474,914,9384,804,8194,784,76104,814,72Таблица 30 – Результаты статистической обработки данных внутрилабораторнойпрецизионностиСтатистические характеристикиРезультатыДень 1День 2Наименьшее значение4,604,64Наибольшее значение4,914,93Среднее значение4,7594,80Стандартное отклонение0,09410,0919Стандартное отклонение среднего результата0,02980,0291116Доверительный интервалОтносительное4,759±0,0672стандартноеотклонение 1,41%4,80±0,06571,37%среднего результатаF (5%; 9;9) = 1,023Контрольное значение: 3,14t (5%;10) = 0,30Контрольное значение: 2,26Для оценки промежуточной прецизионности используются данные сходимости вместе с наборомданных, полученных при выполнении методики в другой день в одной и той же лаборатории.Оценка проводится путем расчета средних значений, стандартных отклонений,отклонений от среднего значения и доверительных интервалов для среднего значения (n≥10,Р=95%, соответствует α = 0,05 или 5%).3.Аналитическая область методикиАналитическая область методики – это интервал между верхним и нижним значениеманалитических характеристик определяемого компонента в объекте анализа (его количества,концентрации, активности и т.п.).Согласно данным внутренней прецизионности доверительный интервал (р=95%) составил4,759±0,0672 мг.Согласно данным внутрилабораторной (промежуточной) прецизионности доверительныйинтервал (р=95%) составил в 1 день 4,759±0,0672 мг, а во 2 день – 4,80±0,0657 мг.4.ПравильностьПравильность методики характеризуется отклонением среднего результата определений,выполненных с ее использованием, от значения, принимаемого за истинное.Правильность аналитической методики количественного определения доказывается на всемдиапазоне применения, то есть методика должна давать отсутствие систематической ошибки иблизость результатов.

Проверка правильности исполнения методики заключается в отсутствиисистематической ошибки измерений при добавке к испытуемому раствору известного количествастандартизованного по гераниолу ЭМ герани. Результаты анализа правильности приведены втаблице 31 и рисунках 39, 40, 41, 42.Таблица 31 – Результаты статистической обработки данных правильностиВзято в ДобавленоДолжнообразце,масла в пересчете на быть, мгмггераниол, мг4,8120,7725,584,8143,314,8165,60Найдено,ОшибкамгАбсолютная, Относительная,мг%25,13– 0,45– 1,7648,1250,06+ 1,94+ 4,0370,4168,17– 2,24– 3,181174,8187,7092,5194,08+ 1,57+ 1,70Рисунок 39 – Хроматограмма раствора сравнения №1 (20,77 мг гераниола в 100 мклэфирного масла герани, стандартизованного по гераниолу)Рисунок 40 – Хроматограмма раствора сравнения №2 (43,31 мг гераниола в 200 мклэфирного масла герани, стандартизованного по гераниолу)118Рисунок 41 – Хроматограмма раствора сравнения №3 (65,60 мг гераниола в 300 мклэфирного масла герани, стандартизованного по гераниолу)Рисунок 42 – Хроматограмма раствора сравнения №4 (87,70 мг гераниола в 400 мклэфирного масла герани, стандартизованного по гераниолу)Таким образом, относительная ошибка результатов опытов с добавками не превышаетотносительную ошибку единичного определения и имеет отклонения в сторону какположительных, так и отрицательных значений, что свидетельствуют об отсутствиисистематической ошибки в предлагаемой методике анализа.119Линейность5.Линейность методики – это наличие линейной зависимости аналитического сигнала отконцентрации или количества определяемого вещества в анализируемой пробе в пределаханалитической области методики.Линейность аналитической методики доказана, если в выбранном диапазоне применения можнопоказать прямо пропорциональное соотношение между концентрацией исследуемого вещества врастворе и сигналом детектора (площадью пика гераниола в серии испытуемых растворов).Линейность методики подтверждается в диапазоне концентраций от 80% до 120% действующеговещества в испытуемом образце.Характеристики линейности методики выражаются в виде коэффициента корреляции, наклонапрямой, а также величины отрезка на оси ординат.Линейность описывается уравнением регрессии, приведенном на рисунке 43:y  ax  b , гдеРисунок 43y – площадь пика определяемого вещества;а – тангенс угла наклона прямой;b – сдвиг прямой от нулевой точки;х – концентрация определяемого вещества, массовые доли.Результаты статистической обработки данных линейности приведены в таблице 32 и рисунке 44.Площадь пика гераниолаy = 28,16x + 0,0324R² = 0,9999Концентрация гераниола, мг/100 г пастыРисунок 44 – Линейная зависимость содержания гераниола от площадей его пиков нахроматограмме120Таблица 32– Результаты статистической обработки данных линейностиСтатистические характеристикиРезультатыНаклон (а) (тангенс угла наклона)28,16Отрезок на оси ординат (b)0,0324Доверительный интервал значений4,759±0,0672 мг/100 г пасты6.УстойчивостьУстойчивость методики – это способность сохранять найденные для нее в оптимальных(номинальных) условиях характеристики, приведенные в таблице, при вероятных небольшихотклонениях от этих условий проведения анализа.

Оценку устойчивости проводят с помощьюпроверки пригодности аналитической системы, под которой понимают проверку выполненияосновных требований, предъявляемых к ней. Требования к такой системе обычноконкретизированы в общей фармакопейной статье (ОФС) на соответствующий аналитическийметод. Оценка пригодности хроматографической системы проводили согласно обновленнойОФС.1.2.1.2.0001.15 «Хроматография» ГФ XIII издания.Пригодностьметодадостигаетсяприэффективностихроматографическойколонки,рассчитанной по пику гераниола на хроматограмме стандартного раствора; метод считаетсяпригодным, если число теоретических тарелок не менее 45000 (рисунок 45).N  16  (t R / Wb ) 2  5.545  (t R / Wh )Рисунок 45В случае анализа раствора стандартного образца гераниола число теоретических тарелоксоставляет более 55000, таким образом, хроматографическая система является пригодной дляколичественного определения гераниола в зубной пасте «Сплат Лечебные травы».Проверка пригодности хроматографической системыХроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику гераниола, более55000 теоретических тарелок;фактор ассиметрии (As) не выше 1,5;относительное стандартное отклонение (RSD) 1,41%.время удерживания гераниола 5,98 мин.121Таблица 33 – Критерии приемлемости валидируемой методикиПараметр валидацииКритерии приемлемостиСпецифичностьСтепень разделения пика гераниола на хроматограмме испытуемогораствора более 1,5ПригодностьЭффективность колонки выше 50000 тт.СходимостьОшибка среднего единичного определения не превышает 2%ВнутрилабораторнаяОшибка среднего единичного определения при сравнении 2-хпрецизионностьповторностей не превышает 1,41%ЛинейностьПодтверждается в диапазоне концентраций от 80% до 120%ПравильностьОтносительная ошибка измерений в опытах с добавками непревышает 5%Согласно проведенным расчетам, методика специфична (ни растворитель, ни примеси немешают разделению пика гераниола от других компонентов эфирного масла на хроматограмме);пригодность, сходимостьи воспроизводимостьдоказывают, чтоошибкиединичныхопределений находятся в пределах адекватных значений; линейность показывает, что методикадостоверна в пределах от 80% до 120% от концентрации гераниола; правильность доказана путемиспользования добавок к испытуемому раствору известного количества стандартизованного погераниолу ЭМ герани – относительные ошибки измерений не являются систематическими, аносят случайный характер.Таким образом, доказано, что методики валидирована согласно таблице 33.ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 71.На хроматограмме растворителя (спирта этилового) отсутствуют пики, по времениудерживания совпадающие с гераниолом, что подтверждает специфичность методики.2.Валидируемая методика является правильной, так как содержание гераниола визвлечении из зубной пасты «SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы» серии 04/10/19(4,81 мг) лежит внутри доверительного интервала соответствующих средних значений4,759±0,0672 мг/100г, полученных экспериментально методом стандартных добавок, аотносительные ошибки измерений не являются систематическими, а носят случайный характер.3.Линейность методики подтверждается в диапазоне концентраций от 80% до 120%гераниола в извлечении из зубной пасты SPLAT «Лечебные травы» серии 04/10/19 путемпостроения калибровочной кривой (коэффициент корреляции r=0,9999 отвечает линейнойзависимости).1224.Прецизионность методики подтверждена путем анализа 10 образцов одной серии04/10/19 зубной пасты SPLAT «Лечебные травы».

Характеристики

Список файлов диссертации