Диссертация (1141392), страница 23
Текст из файла (страница 23)
До 2012 года компания-производитель SPLAT использовала эфирноемасло одной компании-поставщика, а после 2012 года поставщик был заменен, что моглоповлиять на состав конкретного эфирного масла, так как заготовка такого ЛРС как травыпеларгонии ароматной осуществляется от различных промышленных сортов производящегорастения в разных районах или даже в разных странах. Как известно, накопление действующихвеществ напрямую зависит от условий произрастания растения и от момента сбора ЛРС.
Такимобразом, можно сделать вывод о необходимости подробного изучения сортов ЭМ герани,используемых предприятиями-изготовителями, и разработки рекомендаций компаниямпроизводителямпорациональномувыборуЭМгераниконкретногопроизводителя,характеризующегося максимальным содержанием гераниола и цитронеллола. Это позволитизбежать значительного разброса в показаниях количественного содержания данныхкомпонентов, как в эфирных маслах, так и в зубных пастах на основе этих масел.108ГЛАВА 7.
ВАЛИДАЦИЯ ГХ-МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГООПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕРАНИОЛА В ЗУБНОЙ ПАСТЕ «SPLAT (СПЛАТ)MEDICAL HERBS / ЛЕЧЕБНЫЕ ТРАВЫ»7.1.Количественное определение гераниола в зубной пасте «SPLAT (СПЛАТ) MedicalHerbs / Лечебные травы» серии 04/10/19Для уменьшения риска выпуска профилактических зубных паст ненадлежащего качестванеобходима их стандартизация за счет введения новых показателей качества, разработки новыхи совершенствование существующих методик определения, которые должны пройти процедурувалидации и соответствовать ее требованиям. Эта процедура необходима для избеганияпоявления ошибок в аналитической нормативной документации и препятствий дляпроизводителей и контролирующих органов при проведении лабораторного контроля и оценкикачества выпускаемой продукции. Улучшение процесса стандартизации профилактическихзубных паст, содержащих эфирные масла, возможно за счет введения нового показателя качества«Массовая доля характерного компонента» и совершенствование ГХ-методики определенияэфирных масел.Согласно впервые введенной ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитических методик» ГФXIII издания методики количественного определения основного действующего веществаподлежат валидации для контроля качества лекарственных средств: фармацевтическихсубстанций и лекарственных препаратов, по следующим характеристикам:1.
специфичность (specificity);2. аналитическая область (range);3. линейность (linearity);4. правильность (trueness);5. прецизионность (precision);1) повторяемость (сходимость);2) промежуточная (внутрилабораторная) прецизионность;6. устойчивость (robustness) может определяться при необходимости.ГХ-методика количественного определения гераниола в зубной пасте серии 04/10/19,содержащей эфирное масло герани, была валидирована по всем основным характеристикамметодики количественного определения основного действующего вещества.Расчет содержания гераниола в зубной пасте серии Professional «SPLAT (СПЛАТ) MedicalHerbs/Лечебные травы» осуществляли согласно методу стандартных добавок.
Методстандартных добавок основан на введении в анализируемую зубную пасту серии Professional«SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs/Лечебные травы» известного количества гераниола в составе109эфирного масла герани и сравнения сигналов, полученных для испытуемого раствора состандартной добавкой гераниола и без добавки. Концентрация гераниола определялась путемсравнения сигнала (площади пика), соответствующего гераниолу, на хроматограммеиспытуемого раствора и сигнала (площади пика) гераниола на хроматограмме испытуемогораствора с известной добавкой гераниола. С учетом того, что гераниол вводят в состав зубнойпасты в виде эфирного масла герани, а не индивидуального БАВ, то перед проведением егоколичественного определения необходимо стандартизовать эфирное масло герани по гераниолу.После проведения испытания сравнивали полученные значения интенсивности и рассчитываликоличественное содержание гераниола Cx по формуле на рисунке 31: = стд ∙Sx,стд+ − Рисунок 31где – концентрация стандартной добавки; – интенсивность сигнал определяемого вещества (площадь пика) для испытуемогораствора без стандартной добавки;стд+ − интенсивность сигнал определяемого вещества (площадь пика) для испытуемогораствора со стандартной добавкой;Методика определения содержания гераниола в зубной пасте, содержащей эфирноемасло герани методом стандартных добавок.Раствор стандартного образца гераниолаОколо 0,17 г (точная навеска) стандартного образца гераниола (Sigma-Aldrich кат.№48798)помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяли в 10 мл спирта этилового 95%,доводили объем раствора спиртом этиловым 95% до метки и перемешивали.
Раствориспользовали свежеприготовленным (рисунок 33).Раствор эфирного масла герани, стандартизованного по гераниолу10 мл спирта этилового 95% помещали в мерную колбу с притертой пробкойвместимостью 25мл, отвешивали навеску 0,16 г (точная навеска) эфирного масла герани,полученного от компании-производителя SPLAT, помещали в УЗ-баню на 5-10 мин, доводилиобъем раствора спиртом этиловым 95% до метки (рисунок 32).Испытуемый раствор без стандартной добавкиОколо 20 г (точная навеска) зубной пасты «SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs/Лечебныетравы» помещали в плоскодонную колбу с притертой пробкой вместимостью 50 мл, прибавляли25 мл спирта этилового 95% и проводили экстракцию на ультразвуковой бане в течение 45 мин.Полученный раствор фильтровали через бумажный фильтр, после чего фильтрат помещали в110мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем фильтрата растворителем до метки.(рисунок 35).Раствор сравнения №1 представляет собой испытуемый раствор со стандартнойдобавкой гераниола в составе эфирного масла герани в размере 100мклОколо 20 г (точная навеска) зубной пасты «SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs/Лечебныетравы» помещали в плоскодонную колбу с притертой пробкой вместимостью 50 мл, добавляли100 мкл эфирного масла герани, перемешивали шпателем до получения однородной массы,прибавляли 25 мл спирта этилового 95% и проводили экстракцию на ультразвуковой бане втечение 45 мин.
Полученный раствор фильтровали через бумажный фильтр, после чего фильтратпомещали в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем фильтрата растворителем дометки (рисунок 39).Раствор сравнения №2 представляет собой испытуемый раствор со стандартнойдобавкой гераниола в составе эфирного масла герани в размере 200мкл: см. аналогичнуюметодику приготовления раствора №1 с учетом добавки гераниола в составе эфирного маслагерани в размере 200мкл (рисунок 40).Раствор сравнения №3 представляет собой испытуемый раствор №3 со стандартнойдобавкой гераниола в составе эфирного масла герани в размере 300мкл: см.
аналогичнуюметодику приготовления раствора №1 с учетом добавки гераниола в составе эфирного маслагерани в размере 300мкл (рисунок 41).Раствор сравнения №4 представляет собой испытуемый раствор №4 со стандартнойдобавкой гераниола в составе эфирного масла герани в размере 400мкл: см. аналогичнуюметодику приготовления раствора №1 с учетом добавки гераниола в составе эфирного маслагерани в размере 400мкл (рисунок 42).Примечание: 100 мкл составляет 0,1650 г эфирного масла герани.Методика проведения анализаПоследовательно хроматографировали 1 мкл раствора стандартного образца гераниола и1 мкл раствора эфирного масла герани, стандартизованного по гераниолу.
Равные объемы (около20 г (точная навеска)) зубной пасты SPLAT «Лечебные травы» помещали не менее, чем в пятьплоскодонных колб вместимостью 50 мл. Во все колбы, кроме одной, прибавлялипропорционально увеличивающиеся объемы эфирного масла герани (100 мкл, 200 мкл, 300 мкл,400 мкл) с известной концентрацией гераниола (стандартной добавки), перемешивали шпателемдо получения однородной массы, прибавляли 25 мл спирта этилового 95% и проводилиэкстракцию на ультразвуковой бане в течение 45 мин.
Полученные растворы фильтровали черезбумажный фильтр, после чего фильтраты помещали в мерные колбы вместимостью 25 мл идоводили объемы фильтратов растворителем до метки. После чего последовательно111хроматографировали аликвоты (1 мкл) полученных испытуемого раствора без стандартнойдобавки и растворы сравнения №1,2,3,4.Содержание гераниола в испытуемом растворе без стандартной добавки (в извлечении иззубной пасты SPLAT «Лечебные травы» серии 04/10/19), при проведении ГХ-анализа на ПИДсоставило 4,759±0,0672 мг/100г (0,005%).7.2.1.Валидация методики количественного определения гераниолаСпецифичность.Специфичность – это способность аналитической методики однозначно оценивать определяемоевещество в присутствии сопутствующих компонентов.
Специфичность аналитической методикисчитается доказанной, если ни используемый растворитель, ни определенные примеси неискажают полученный результат в пределах требуемой точности.Специфичность методики доказывается при помощи получения хроматограммы растворителя(спирт этиловый), хроматограммы стандартного образца гераниола и хроматограммыиспытуемого образца (согласно рисункам 32, 33, 35).Рисунок 32 – Хроматограмма растворителя (спирт этиловый 95%)112Рисунок 33 – Хроматограмма раствора стандартного образца гераниолаРисунок34–Хроматограммастандартизованного по гераниолуспиртовогораствораэфирногомаслагерани,113Рисунок 35 – Хроматограмма испытуемого раствора без стандартной добавки (извлеченияиз испытуемого образца зубной пасты)Коэффициент асимметрии пика должен быть не выше 1,5; фактор разрешения пиков не менее 15;согласно условиям методики, можно сделать предварительный вывод, что методика специфичнавотношениигераниола,таккакприсутствиесопутствующихвеществневлияетнепредусмотренным образом на пик гераниола.2.ПрецизионностьПрецизионность–рассеяниерезультатов,получаемыхсиспользованиемметодики,относительно величины среднего результата.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
