Диссертация (1141368), страница 21
Текст из файла (страница 21)
Объемвыборки 10. Первый показатель приемлемостиAV ≤ 15%, Δx≤±0,42%Количественное ВЭЖХ0,950 – 1,050 гопределениеОФС1.2.1.0005.15«Высокоэффективнаяжидкостнаяхроматография»Для идентификации субстанции в ЛФ использовали методы спектрального ихроматографическогоспектроскопиианализа.КачественноеопределениеметодомИК-проводили путем сравнения спектров ППГ со спектрамистандартного образца, согласно методикам, описанным в 2.2.2.12.ИК-спектры ППГ нимесулида и субстанции нимесулида представлены нарис.3.50.Рисунок.
3.50. ИК-спектр субстанции нимесулида (1) и ППГ нимесулида (2)Таблица 3.53 Описание ИК-спектра ППГ нимесулидаПоложениемаксимумовОтнесение колебаний-1характеристических полос, смНимесулидППГсубстанциянимесулида32893286Валентные –N–H– свободной вторичнойароматической аминогруппы (транс)134—31263084,301029303066,30872927—28511599, 1587,1598,1489, 14461487, 144871521*1521*1341*21339*1317131812471218124912181153,10829761127,Валентные –N–H– связанной вторичнойароматической аминогруппы (транс)Валентные –С–H– бензольного кольцаАсимметрические валентные –С–Н–метильнойгруппыСимметрические валентные –С–Н–метильнойгруппы1588, –С=С– ароматического ядра1153975805805754, 740755,743699699Асимметрические валентные ароматическойнитрогруппыСимметрические валентные ароматическойнитрогруппыАсимметрические валентные сульфамиднойгруппы–С–О–С– в ароматических аминахАсимметрическиевалентные–S=OсульфокислотПлоскостные деформационные –С–Н– умонозамещенных производных бензолаПлоскостные деформационные –С–Н– у 1,2,4тризамещенных производных бензолаВнеплоскостные деформационные –С–Н– у1,2,4-тризамещенных производных бензолаВнеплоскостные деформационные –С–Н– умонозамещенных производных бензолаСимметрическиевалентные–S=OсульфокислотИз данных таблицы 3.53 видно, что основные характерные пики субстанциинимесулида и ППГ нимесулида, соответствующие таким функциональнымгруппам, как ароматическая нитрогруппа, сульфамидная группа и сульфогруппа,совпадают: при длинах волн 3289, 2930, 1521, 1341, 1317, 699 см -1 и др.
Однако вППГ часть пиков отсутствуют (при длине волны 3126, 2851, 3066, 3010, 1127,1082см-1). Возможно, это связано со вступлением нимесулида во взаимодействие сполимерными молекулами Kollicoat® и ГПМЦ за счет образования водородныхили ван-дер-ваальсовых связей.
Полученные результаты свидетельствуют о7- характеристические колебания нимесулида [28]135возможностипримененияметодаИК-спектроскопиидляидентификациинимесулида в составе ППГ.Также для идентификации нимесулида в составе ППГ использовали метод ВЭЖХс УФ-детектированием при длине волны 210 нм, УФ-детектор: Agilent 1220 InfinityLC Variable Wavelength Detector 113 (Agilent Technologies, США)8. Идентификациюнимесулидапроводилипоабсолютному(tR)инескоррекиторованномуотносительному (RRT) временам удерживания растворов ППГ и стандартногообразца нимесулида. Хроматограммы испытуемых растворов приведены нарис.3.52 и 3.54.
Времена удерживания нимесулида в стандартном растворе сконцентрацией 0,1 мкг/мл и в испытуемом растворе идентичны и составляют 3,449.Нескорректированное относительное время удерживания (RRT) испытуемогораствора относительно стандарта равняется 1,0.Для количественного определения содержания нимесулида в ППГ предложенметод ВЭЖХ, который характеризуется точностью, специфичностью, высокойстепенью автоматизации, быстротой и удобством в проведении серийного анализаЛФ. Данные о количестве вещества интерпретировали с помощью методакалибровочной кривой, являющегося частным случаем метода внешнего стандарта.Выбор данной методики обусловлен очень малым содержанием определяемоговеществавпробе,из-замалойрастворимостинимесулида.Методикаприготовления растворов и параметры хроматографирования описаны в 2.2.2.9.При площади пика 637 концентрация в исследуемом растворе составляет 1,0511мкг/мл.
На рис. 3.53-3.54 приведены хроматограммы плацебо, а такжехроматограммы плацебо с прибавлением стандартного раствора нимесулида.Неидентифицированных пиков со временами удерживания более 2 минут ненаблюдается.Автор выражает большую признательность к.ф.н. Смирнову В.В., заведующему лабораторией №73 Клиническойфармакологии ФГБУ ГНЦ Института Иммунологии ФМБА России за помощь в проведении эксперимента иобсуждении результатов8136Рисунок 3.51. Калибровочныйграфик зависимости площадипика нимесулида от концентрацииРис. 3.53 Хроматограмма плацебоРис. 3.52 Хроматограмма испытуемогораствора ППГ нимесулида сконцентрацией 1,0 мкг/млРис. 3.54 Хроматограмма плацебо сприбавлением стандартного растворанимесулида до концентрации 0,1 мкг/млВалидацию аналитической методики проводили согласно СОП «Валидацияметодики определения ЛВ», подготовленной на основе Руководств FDA [84] иEMA[85]поправильность,следующимхарактеристикам:прецизионность,предел137селективность,количественноголинейность,определения,стабильность растворов.
Результаты, полученные в ходе валидации приведены втаблице 3.54.Таблица 3.54 Результаты валидации методики количественного определениянимесулида в ППГ методом ВЭЖХВалидационнаяхарактеристикаПригодностьхроматографической системыКонцентрация образца0,1 мкг/мл,1 мкг/мл,5 мкг/мл.Селективность1 – плацебо2–0,1мкг/млЛинейность0,05 мкг/мл,0,1мкг/мл,0,2мкг/мл,0,5 мкг/мл, 1мкг/мл,2мкг/мл5мкг/мл.РезультатЧисло теоретическихтарелок(N)составляет6189;8604; 10533 дляконцентраций0,1мкг/мл, 1 мкг/мл, 5мкг/мл.соответственно;фактор удерживания(k’) составляет 3,5;коэффициентасимметриипиканимесулида1,21;коэффициентвариацииотносительноговремениудерживанияпиканимесулида 1,1%.На хроматограммеплацебоненаблюдается пика, современемудерживаниянимесулида.Коэффициенткорреляцииr2>0.9998273,0,9999684и0,9999588,относительнаяпогрешность10%длянижнегодиапазоналинейности и неболее6,5%дляостальных точек.138КритерийВыводоприемлемостисоответстииЧислоСоответствуеттеоретическихтарелок (N) должнобыть не менее 2000;факторудерживания (k’)должен превышать2,0; коэффициентасимметрии пиканимесулиданедолжен превышать2,5; коэффициентвариацииотносительноговремениудерживания пиканимесулида долженбыть не более 5,0%.На хроматограмме Соответствуетплацебодолженотсутствовать пиксовременемудерживаниянимесулида.КоэффициентСоответствует2корреляции r >0.99,относительнаяпогрешностьдолжна составлятьне более 20% длянижнего диапазоналинейности и неболее 15% дляостальных точек.ВалидационнаяхарактеристикаПравильность(intra day)Концентрация образца0,1мкг/мл,1мкг/мл,5мкг/мл.РезультатПравильность(inter day)0,1 мкг/мл,Относительная1мкг/мл, погрешностьдля5мкг/мл.пиканимесулида8,33%, 0,633% и0,473%.Прецизионность(intra day)0,1мкг/мл,Относительная1мкг/мл, погрешностьдля5мкг/мл.пиканимесулида9,58%;2,15%и1,31%.Прецизионность(inter day)0,1мкг/мл,Относительная1мкг/мл, погрешностьдля5мкг/мл.пиканимесулида6,18%,2,87%и1,28%.Пределколичественногоопределения0,1мкг/млПеренос пробы5мкг/мл, На хроматограммеплацебоплацебо отсутствуетпик со временемудерживаниянимесулида.Относительнаяпогрешностьдляпика нимесулида 8%;1,56% и 0,6%.Максимальноеотносительноестандартноеотклонение 10 %.139КритерийприемлемостиОтносительнаяпогрешностьдолжна составлятьне более 20% длянижнего диапазоналинейности и неболее 15% дляостальных точек.Относительнаяпогрешностьдолжна составлятьне более 20% длянижнего диапазоналинейности и неболее 15% дляостальных точек.Относительнаяпогрешностьдолжна составлятьне более 20% длянижнего диапазоналинейности и неболее 15% дляостальных точек.Относительнаяпогрешностьдолжна составлятьне более 20% длянижнего диапазоналинейности и неболее 15% дляостальных точек.Относительноестандартноеотклонениенедолжно превышать20%.На хроматограммеплацебодолженотсутствовать пиксовременемудерживаниянимесулида.ВыводосоответстииСоответствуетСоответствуетСоответствуетСоответствуетСоответствуетСоответствуетВалидационнаяхарактеристикаСтабильностьТестразведениеКонцентрация образца0,1 мкг/мл;1 мкг/мл, 5мкг/м.на 100 мкг/млРезультатМодульразностизначений,полученныхдляисследуемыхисвежеприготовленныхобразцовнепревысил 15%.Среднеезначениеконцентрацииразбавляемогообразца составляет3,32%оттеоретическойвеличины.Коэффициентвариации значенийконцентрацииразбавляемогообразца составляет1,8%.КритерийприемлемостиМодуль разностизначений,полученныхдляисследуемыхисвежеприготовленных образцов недолжен превышать15%.Среднее значениеконцентрацииразбавляемогообразца не должнопревышать 15% оттеоретическойвеличины.Коэффициентвариации значенийконцентрацииразбавляемогообразца не долженпревышать 15%.ВыводосоответстииСоответствуетСоответствуетТаким образом, показана возможность применения ВЭЖХ в качестве методаколичественного определения нимесулида в ЛФ.140Выводы к главе III:1.Разработаны состав и технология ППГ нимесулида на основе производныхакриловойиметакриловойвысвобождением,кислот.предполагается,Составчтообладаетпослепролонгированнымпроведениядоклиническихисследований будет установлен 1-или 2-ух кратный способ применения ЛФ.2.Разработанные составы оценены по показателям качества, предусмотреннымпроектом НД.
Метод количественного определения нимесулида в пробах припроведении теста «Растворение» валидирован по показателям линейности,селективности, прецизионности.3.Спомощьюматематическихмоделейнулевогоипервогопорядковпроанализирована кинетика высвобождения нимесулида из оптимального составаЛФ.4.Проведена оценка органолептических свойств готовой ЛФ и коррекция вкуса.5.Разработаныметодикиидентификациииколичественногоопределениянимесулида в ППГ методами ИК-спектрофотометрии, УФ-спектрофотометрии иВЭЖХ с УФ-детектированием. Проведена валидация методики ВЭЖХ попараметрам линейности, селективности, правильности (intra day/inter day),прецизионности (intra day/inter day), предела количественного определения,стабильности, переноса пробы, теста на разведение.6.Методом ускоренного старения установлен прогнозируемый срок годности ППГнимесулида 1,0%, который составил один год.7.Разработана нормативная документация: нормативный документ «Пероральныйпролонгированный гель нимесулида, 1,0%» (приложение 4) и лабораторныйрегламент (приложение 5).141Глава IVРазработка состава и технологии ППГ ибупрофена на основе производныхакриловой кислотыОсновываясь на полученных в эксперименте по разработке состава и технологииППГ нимесулида данных, в качестве матрицеобразователей в технологии ППГибупрофена использовали Kollicoat MAE 100 P и КПН, в качестве модификатороввязкости–гидроксиэтилпропилцеллюлозумаркиBenecel®инатрий-карбоксиметилцеллюлозу марки Blanose®.
Использовавшиеся в разработке составаи технологии ППГ нимесулида Carbopol 974 P и Carbopol 971 P не показалипролонгированного эффекта, стабильности и рН-зависимой растворимости.Использование производных целлюлозы марок Bonucel® и Natrosol® не далозначимых различий в биофармацевтических характеристиках образцов, и непозволяло получать стабильные гели.В связи с этим для проведения эксперимента по разработке состава и технологииППГ ибупрофена был выбран следующий дизайн исследования (рис.4.1): изучалифизико-химические свойства ФС ибупрофена – размер и форму частиц,растворимость, а также спектральные характеристики; проводили разработкусоставов ППГ ибупрофена на основе комплексной полимерной матрицы КПН, вдиапазоне концентраций матрицеобразователя 2,0-7,5%, с использованием двухразличных загустителей, производных целлюлозы марок Benecel® и Blanose®,определяли органолептические свойства экспериментальных образцов, рН водногоизвлечения,оцениваликинетическойвысвобожденияагрегативнуюустойчивости,ибупрофенастабильностьреологическиеизППГ–припокоэффициентамхарактеристики,необходимостипараметрыпроводилимодификацию составов и коррекцию технологии, для достижения оптимальныхтехнологических и биофармацевтических характеристик; проводили разработкусоставов ППГ ибупрофена на основе комбинированной матрицы Kollicoat MAE 100P с использованием Benecel® и Blanose® в качестве загустителей, определяя те жехарактеристики ЛФ, что и в исследовании экспериментальных образцов на основекомбинированной матрицы КПН.142Рисунок 4.1.
Дизайн эксперимента по разработке состава и технологии ППГибупрофенаИзучение физико-химических свойств ибупрофенаПолучение образцов ППГ наоснове КПНПолучение образцов ППГ наоснове Kollicoat® MAE 100 PИзучение рН и агрегативнойстабильности образцовИзучение рН и агрегативнойстабильности образцовМодификация составов в соответстсвии с полученнымирезультатамиИзучение реологическиххарактеристикСкрининг образцов по параметрамвысвобождения ибупрофена из ППГ.Математическое моделированиепрофилей высвобожденияИзучение реологическиххарактеристикСкрининг образцов по параметрамвысвобождения ибупрофена из ППГ.Математическое моделированиепрофилей высвобожденияКоррекция органолептических свойствИзучение показателей качества ППГ ибупрофена143Дляэкспериментальныхобладающихсоставов,оптимальнымивходепроведенныхтехнологическимииисследованийбиофармацевтическимихарактеристиками, проводили подбор корригентов органолептических свойств,разработку методик определения показателей качества ГЛФ, а также определениесроков хранения методом «ускоренного старения».Органолептические свойства.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
