Диссертация (1140935), страница 25
Текст из файла (страница 25)
Так, убольных ХПН, находящихся на гемодиализе, в плазме увеличивается содержаниенеорганического фосфора и ПТГ, при экспериментальной ХПН – возрастаетконцентрация неорганического фосфора, общего кальция и ПТГ.Выявлено, что у больных ХПН, находящихся на гемодиализе, снижениеколичества лимфоцитов и их субпопуляций CD3+, CD8+, CD11b+, CD16+,CD25+,усилениекислород-зависимогометаболизманейтрофиловвпериферической крови происходит по мере увеличения концентрации ПТГ вкрови. При экспериментальной ХПН по мере увеличения концентрации ПТГ вкрови снижается общее количество лимфоцитов, в том числе CD3+ и CD45RA+клеток,повышаетсяНСТ-редуцирующаяспособностьюнейтрофилов,увеличивается количество лимфоцитов с поздними признаками апоптоза инекроза.Для изучения роли ПТГ в формировании иммунного статуса при ХПНпроведено исследование показателей иммунного статуса при экспериментальномдиета-индуцированномгиперпаратиреозе.Развитиегиперпаратиреозавэкспериментальных условиях подтверждено увеличением концентрации ПТГ инеорганического фосфора в крови.Приэкспериментальномгиперпаратиреозеобнаруженаактивацияврожденного иммунитета, выражающаяся в увеличении НСТ-редуцирующейспособностинейтрофилов,возрастаетинтенсивностьспонтанногоииндуцированного НСТ-теста.
Наряду с этим, наблюдаются признаки угнетенияадаптивного иммунитета: в периферической крови снижается общее количестволимфоцитов, а также количество CD3+,CD45RA+ клеток, уменьшается161интенсивность реакции ГЗТ и количество АОК в селезенке, свидетельствующиесоответсвенно о подавлении Th1- и Th2-зависимого иммунного ответа.Установлено,чтоприэкспериментальномгиперпаратиреозевплазместатистически значимо увеличивается концентрация ИЛ-1β и уменьшаетсяконцентрация ИЛ-4 и ИФН-γ. Как видно, вектор изменений иммунного статусапри экспериментальном гиперпаратиреозе соответствует изменениям иммунногостатуса при ХПН.В патогенезе изменений иммунного статуса при экспериментальномгиперпаратиреозе имеют значение изменение цитокинового профиля в крови,изменение активности процессов свободно-радикального окисления в плазме и влимфоцитах, активация гибели лимфоцитов в периферической крови, увеличениеконцентрации ПТГ в крови.Порезультатамипроведенногокорелляционногоанализаприэкспериментальном гиперпаратиреозе установлено, что по мере увеличенияконцентрации ИЛ-1β в плазме усиливается НСТ-редуцирующая способностьнейтрофилов; по мере снижения концентрации ИЛ-4 в крови уменьшается общееколичество лимфоцитов в крови, количество CD3+, CD45RA+ клеток, а такжеподавляется Th1- и Th2-зависимый иммунный ответ.
Уменьшение количестваCD3+, и CD45RA+ клеток и снижение реакции ГЗТ происходят по мереуменьшения концентрации ИФН-γ в плазме.Результаты исследования интенсивности процессов свободно-радикальногоокисленияприэкспериментальномгиперпаратиреозепродемонстрировалиповышение концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ в гептановойфракции липидного экстракта плазмы, а также первичных, вторичных и конечныхпродуктов ПОЛ в изопропанольной фракции липидного экстракта плазмы.
Наэтом фоне в сыворотке снижается активность ферментов антиокислительнойзащиты – СОД и каталазы. Установлена прямая ассоциация между содержаниемпродуктов ПОЛ в плазме и активностью СОД и каталазы. В лимфоцитахпериферической крови увеличивается концентрация первичных, вторичных и162конечных продуктов ПОЛ в гептановой фракции липидного экстракта а такжепервичных продуктов ПОЛ в изопропанольной фракции.Обнаружено, что концентрация вторичных продуктов ПОЛ в гептановой и визопропанольной фракциях плазмы нарастает по мере увеличения НСТредуцирующейспособностинейтрофиловпериферическойкрови,чтосвидетельствует об участии АФК, генерируемых фагоцитами в развитииоксидативного стресса и повреждении клеток крови.При экспериментальном гиперпаратиреозе установлено увеличение гибелилимфоцитов в периферической крови путем апоптоза и некроза: увеличиваетсяколичество лимфоцитов с признаками поздней стадии апоптоза и некроза(фенотип Annexin-5-FITC+/7-AAD+).
Установлена обратная связь между общимколичеством лимфоцитов, количеством CD3+ клеток в крови, выраженностьюреакции ГЗТ, количеством АОК в селезенке и количеством лимфоцитов спризнаками позднего апоптоза и некроза. Прямая связь наблюдается междуколичествомлимфоцитовспризнакамипозднегоапоптоза,некрозаиконцентрацией первичных и конечных продуктов ПОЛ в изопропанольнойфракции липидного экстракта лимфоцитов периферической крови.Наиболее вероятно, что ПТГ приводит к активации нейтрофилов и другихпродуцентов АФК в крови, что имеет значение в формировании окислительногостресса, приводит к повреждению лимфоцитов, накоплению в них продуктовПОЛ.
Количество лимфоцитов в периферической крови снижается из-заактивации их гибели путем некроза и апоптоза, что приводит к депрессии Th1- иTh2-зависимого иммунного ответа. Кроме того, нельзя исключить прямоевоздействие ПТГ на лимфоциты с последующим изменением концентрации в нихкальция, активности других внутриклеточных мессенджеров, приводящих кизменению пролиферативного потенциала, секреторной активности и др.процессов.Для проверки гипотезы о прямых иммунотропных эффектах ПТГ инепосредственного участия ПТГ в формировании иммунного статуса пригиперпаратиреозе и ХПН проведена серия экспериментов в условиях in vitro.163Проведено исследование влияния различных концентраций ПТГ на клетки,выделенные из цельной крови здоровых людей: функциональную активностьнейтрофилов, секреторную активность мононуклеаров и показатели гибелилимфоцитов.Обнаружено,чтоПТГактивируетпоглотительнуюспособностьнейтрофилов и дозо-зависимо повышает НСТ-редуцирующую способностьнейтрофилов.
ПТГ независимо от дозы повышает секрецию ИЛ-8, снижаетсекрецию ИЛ-2 и ИЛ-10 мононуклеарами. Полагаем, что увеличение подвлиянием ПТГ продукции мононуклеарами ИЛ-8 какодного из ключевыхпровоспалительных цитокинов способствует активации эффекторов врожденногоиммунитета. Уменьшение продукции ИЛ-2 мононуклеарами может бытьпричинойснижения дифференцировки и представительства в кровотоке Т-лимфоцитов. Подавление под влиянием ПТГ выработки ИЛ-10, одного изключевых противовоспалительных цитокинов, может пролонгировать усилениефункциональной активности эффекторов врожденного иммунного ответа.Добавление различных концентраций ПТГ к культуре мононуклеарных клетокпериферической крови приводит к увеличению количества клеток с признакамираннего апоптоза, клеток с признаками позднего апоптоза и некроза и какследствие к уменьшению количества клеток без признаков некроза и апоптоза.Некоторые авторы отмечают роль изменениий фосфорно-кальциевогогомеостаза в условиях вторичного гиперпаратиреоза в формировании иммунногостатуса при ХПН, в частности, отмечают, что повышение концентрации кальция вцитоплазме лимфоцитов имеет значение в патогенезе лимфоцитопении [320].Другие исследователи демонстрируют, что усиление функциональной активностифагоцитов периферической крови при ХПН связано с повышением активностиCa2+-зависимых внутриклеточных мессенджеров и увеличением в фагоцитахинтенсивности углеводного обмена и кислородного метаболизма.
[145]. Рядисследователей отмечает, что при двухмесячном применении верапамила,нифедипина, амлодипина и др. блокаторов кальциевых каналов у больных стерминальной ХПН происходит нормализация концентрации кальция и АТФ в164цитоплазмеичастичноевосстанавливлениефункциифагоцитоввпериферической крови [104, 109, 167, 272]. Нами для подтвержения гипотезы ороли изменениий фосфорно-кальциевого гомеостаза в условиях вторичногогиперпаратиреоза в формировании иммунного статуса при ХПН, а такжеуточнения механизма иммунотропного действия амлодипина исследовановлияние блокатора L-кальциевых каналов амлодипина на показатели иммунногостатуса при экспериментальном гиперпаратиреозе и экспериментальной ХПН.Приэкспериментальномамлодипинапроисходитгиперпаратиреозеактивациявусловияхпоглотительнойпримененияспособностиидополнительное увеличение НСТ-редуцирующей способности нейтрофиловпериферической крови. Амлодипин приводит к увеличению количества в кровилимфоцитов, в том числе CD3+ и CD45RA+, увеличению интенсивности реакцииГЗТиколичестваАОКвселезенке.Применениеамлодипинапригиперпаратиреозе приводит к изменению цитокинового профиля, статистическизначимо снижается концентрация в крови ИЛ-1β и повышается концентрация ИЛ4 и ИФН-γ.
Примечательно, что после применения амлодипина такие показателииммунного статуса как общее количество лимфоцитов в крови, количество CD3+,интенсивность реакции ГЗТ и количество АОК в селезенке, концентрация вплазме ИЛ-4 и ИФН-γ не отличаются от соответстующих показателей в группеинтактных животных.Полагаем, что повышение активности нейтрофилов периферической кровив определенной мере обусловлено увеличением концентрации ИФН-γ в крови, аувеличение концентрации в крови ИЛ-4 и ИФН-γ может иметь значение ввосстановлении общего количества лимфоцитов в крови, количества CD3+ иCD45RA+ лимфоцитов, Th1- и Th2-зависимого иммунного ответа.При экспериментальном гиперапаратиреозе под влиянием амлодипинаустановлено уменьшение содержания первичных и вторичных продуктов ПОЛ вгептановой фракции липидного экстракта плазмы, вторичных и конечныхпродуктов ПОЛ в изопропанольной фракции липидного экстракта плазмы.