Автореферат (1140410), страница 2
Текст из файла (страница 2)
При этомв ходе АТ матрикса не образуется коллагены I и III типов.4. Впервые в мире показана взаимосвязь развития ВД и КД грудной клетки сколичественными изменениями фокусов АТ разных типов и взаимосвязь этойтрансформации со степенью клинических проявлений ДСТ.5.
Впервые в мире систематизированы морфологические изменения реберныххрящей у детей с ВД и КД грудной клетки, позволяющие отнести эти деформации кДСТ.Теоретическая и практическая значимость работыПредложена обоснованная схема патогенеза ВД и КД грудной клетки,разработанная на основе выявленных морфологических изменений реберных хрящей,6которые являются проявлениями их ДСТ. Эта схема может способствовать разработке вклинической практике новых методов коррекции деформаций грудной клетки иусовершенствованию уже существующих.Предложен алгоритм комплексной морфологической оценки строения гиалиновойхрящевойткани, включающийв себяоценку ееклеточногокомпонентаиэкстрацеллюлярного матрикса.
Это позволит детально изучать морфологическиеизменения гиалиновых хрящей при других их патологиях, связанных с ДСТ (например,трахеобронхомаляция).Методология и методы исследованияДля доказательства связи ВД и КД грудной клетки с ДСТ реберных хрящей удетей были изучены структурные компоненты хрящей, как с помощью традиционныхморфологических методов, так и с помощью нелинейно-оптической (НЛОМ), атомносиловой (АСМ), трансмиссионной (ТЭМ) и сканирующей (СЭМ) электронноймикроскопии, позволяющих выявить и оценить изменения структурных компонентовреберного хряща и найти особенности этих изменений при различных вариантахдеформации грудной клетки у детей.
При этом объективность полученных данных былаподтверждена статистической обработкой результатов морфометрии.Положения, выносимые на защиту1. Фокусы фибриллизации являются компонентом матрикса реберных хрящей удетей, как с нормальной грудной клеткой, так и с ее ВД и КД и представляют собойразличные типы АТ: «тонковолокнистый», «переплетенный», «канонический» и«внутрилакунарный».
Каждый из них обладает определенными морфологическимихарактеристиками и формируется из нативного матрикса.2. В основе развития ВД и КД грудной клетки у детей лежат морфологическиеизменения реберных хрящей, характеризующиеся уменьшением количества хрящевыхканалов и хрящевых лакун с хондроцитами, ремоделированием экстрацеллюлярногоматрикса в виде увеличения частоты встречаемости и площади фокусов АТ, а также –изменения корреляций между этими структурными перестройками реберных хрящей ивозрастом обследованных, что можно рассматривать как проявления ДСТ реберныххрящей при ВД и КД грудной клетки у детей.73.
Наличие одинаковых морфологических изменений в реберных хрящах у детей сВД и КД грудной клетки при незначительных различиях позволяют рассматривать обавида деформаций как разные варианты течения одного заболевания – ДСТ.Степень достоверности и апробация результатовДостоверностьполученныхрезультатовподтверждаетсядостаточнымколичеством исследуемых образцов, взятых от 34 детей, а также применением широкогоспектраморфологическихметодов(гистологические,гистохимические,иммуногистохимические (ИГХ), НЛОМ, ТЭМ, СЭМ, АСМ, морфометрия) с учетомклинических и анамнестических данных и использованием методов математическойстатистики.Апробация диссертации состоялась на конференции кафедры патологическойанатомии имени академика А.И.
Струкова ФГАОУ ВО Первый московскийгосударственныймедицинскийуниверситетим.И.М.Сеченова(Сеченовскийуниверситет) Минздрава России 12 декабря 2018 года.Результаты исследования были доложены на V Съезде Российского обществапатологоанатомов (Челябинск, июнь 2017) и наВсероссийскойконференции«современные проблемы гистологии и патологии скелетных тканей» (Рязань, октябрь2018).Внедрение результатов исследованияРезультаты исследования используются в клинической практике и при обучениистудентов, ординаторов и аспирантов кафедры патологической анатомии имениакадемика А.И.
Струкова, а также – в лаборатории экспериментальной морфологииИнститута регенеративной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова(Сеченовский университет) Минздрава России.Личный вклад автора в выполнении работыЛично автором выполнены обзор и анализ литературы, сбор операционного иаутопсийного материала, гистологическое, морфометрическое и гистохимическоеисследования, статистическая обработка, а также – анализ и систематизацияполученных результатов. Автор принимал непосредственное участие в сборе и изученииклинических данных, ИГХ-исследовании, НЛОМ, ТЭМ, СЭМ и АСМ.8Соответствие диссертации паспорту научной специальностиОсновные научные положения соответствуют паспорту специальности 14.03.02 патологическаяанатомия,аименно–областиисследований:«Исследованиепатогенетических механизмов развития заболеваний в целом и отдельных ихпроявлений (симптомы, синдромы), создание основ патогенетической терапии».ПубликацииОсновноесодержаниедиссертационногоисследованиядостаточнополноотражено в 7 научных работах аспиранта, в том числе в 3 статьях в журнале,рекомендованном ВАК Минобрнауки России (2 оригинальных исследования, 1 обзорлитературы).Объем и структура работыДиссертационная работа изложена на 181 странице машинописного текса исостоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования,изложения результатов исследования и их обсуждения, выводов, списка сокращений исписка литературы.
В работе использовано 7 таблиц, 94 рисунка. Список литературыпредставлен на 13 страницах и включает 117 источников литературы, в том числе 26отечественных и 91 зарубежный.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованияИсследуемые реберные хрящи, взятые от 34 детей в возрасте от 8 до 17 лет, былиразделены на три группы. В группе контроля (1-ая группа) материал был получен приаутопсиях, проведенных в ГБУЗ «Бюро судебно-медицинской экспертизы ДЗМ» у 10детей 8-17 лет без деформаций грудной клетки. Во 2-ой группе материал был получен входе торакопластики, выполненной в ГБУЗ города Москвы НИИ Неотложной детскойхирургии и травматологии ДЗМ у 12 детей 8-17 лет с ВД грудной клетки, в 3-ей – у 12детей 9-17 лет с КД грудной клетки. У всех пациентов были получено добровольноесогласиенаморфологическоеисследованиеоперационногоматериала.Впредоперационном периоде при клиническом исследовании изучали степень ДСТ спомощью полуколичественных методов (Кадурина Т.И.
и др., 2014 г), также выяснялинаследственный анамнез. В исследование не были включены пациенты или умершие стравмами грудной клетки, патологией органов грудной клетки и с системными9заболеваниямиопорно-двигательногоаппарата(рахит,злокачественныеновообразования и др.).Гистологическое исследование проводили на базе кафедры патологическойанатомии имени академика А.И. Струкова и лаборатории экспериментальнойморфологии Института регенеративной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова (Сеченовский университет) Минздрава России. Гистологические препаратыокрашивали гематоксилином и эозином, пикросириусом красным, а также – по методуМаллори в модификации Gallego на коллагеновые волокна, толуидиновым синим накислые гликозаминогликаны (ГАГ).
Готовые препараты изучали при помощи световой,фазово-контрастной, темнопольной и поляризационной микроскопий.Исследование,анализифотографированиегистологическихииммуногистохимических препаратов, а также – полутонких срезов проводили сиспользованием микроскопа «LEICA DM4000 B LED», оснащенного цифровойвидеокамерой «LEICA DFC7000 T» и программного обеспечения «LAS V4.8» (LeicaMicrosystems, Швейцария).Для ИГХ-исследования, НЛОМ, СЭМ и АСМ использовали серийные срезы (по 4среза на каждый метод) с полученных в ходе гистологического исследованияпарафиновых блоков.ИГХ-исследование проводили на базе ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова»МинздраваРоссии.Висследованиииспользовалипервичныемышиныемоноклональные антитела к коллагенам человека I типа (клон COL-1, разведение 1:4000,GeneTex, США) и III типа (клон FH-7A, разведение 1:8000, GeneTex), кроличьиполиклональные антитела к коллагену человека II типа (разведение 1:20, ИМТЕК,Россия), а также – вторичные антитела и диаминобензидин для визуализации мест ихсвязывания (Dako REAL EnVision).НЛОМ-исследованиебыловыполненонабазеФГАОУВО«МФТИ(государственный университет)» на неокрашенных срезах толщиной 10-20 мкм,заключенных в синтетическую среду, с помощью системы микроскопии LSM 510 META(Carl Zeiss, Германия).ТЭМ и СЭМ были выполнены на базе ФГБОУ ВПО «МГУ имени М.В.Ломоносова» и лаборатории соединительной ткани и клеточных технологий ФГБУ«НМИЦ ТО им.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
