Автореферат (1140410), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Н.Н. Приорова» Минздрава России. Полутонкие срезы, окрашенные10трехцветным методом с помощью метиленового синего, азура II и основного фуксина(МАFТ). Ультратонкие срезы просматривали и фотографировали в электронноммикроскопе TICMA-12 (Голландия).Для СЭМ использовали неокрашенные и не заключенные в синтетическую средусрезы толщиной 20 мкм, которые после нанесения их на адгезивные полилизиновыестекла и напыления золота изучали и фотографировали на микроскопе Zeiss Supra 40VP(Carl Zeiss Group (Германия)) с ускорением электронов 10 кВ и рабочей дистанцией 4,3мм.АСМ была выполнена на базе Института регенеративной медицины ФГАОУ ВОПервый МГМУ им.
И.М. Сеченова (Сеченовский университет) Минздрава России нанеокрашенных и не заключенных в синтетическую среду срезах толщиной 5 мкм,нанесенных на адгезивные полилизиновые стекла. Срезы изучали с использованиемтехники PeakForce Quantitative Nanomechanical Mapping mode (PeakForce QNM) намикроскопе MultiMode 8 atomic force microscope with a Nanoscope V controller and Escanner (Bruker) с помощью зондов RTESPA-150 (Bruker) с номинальным модулемупругости 5 Н/м, номинальной частотой 150 кГц и номинальным радиусом кончика 8нм. Нативные АСМ-изображения были обработаны и проанализированы программойNanoScope Analysis v.1.10 software (Bruker).Статистическая обработка полученных данных морфометрии была проведена сиспользованием лицензионного стандартного пакета программ IBM SPSS Statistics 20.Результаты собственных исследований и их обсуждениеВ группе контроля реберные хрящи были представлены гиалиновой хрящевойтканью, покрытой снаружи надхрящницей и формирующей хрящевые каналы,достигающиеглубокихотделов.хондрогенныеслои,содержащие,Внадхрящницесоответственно,определялиськоллагеновыефиброзныйиволокнасфибробластами, а также – хондробласты.
Хрящевые каналы содержали кровеносные илимфатические сосуды, окруженные рыхлой волокнистой соединительной тканью.Топографически в хрящевой ткани определялись субперихондрий, расположенныйнепосредственно под надхрящницей, и центральная зона, расположенная в глубокихотделах. Основными клетками гиалиновой хрящевой ткани были хондроциты,находящиеся внутри хрящевых лакун. В экстрацеллюлярном матриксе (ЭЦМ) реберныххрящей хрящевые лакуны располагались неравномерно, нередко формируя гипер- или11гиполакунарные зоны.
При этом в части лакун сохранные хондроциты отсутствовали(пустые лакуны). При световой микроскопии, как в группе контроля, так и у детей с ВДи КД грудной клетки, ЭЦМ реберных хрящей имел гомогенное (нативный матрикс)либофибриллярноестроение(фокусыфибриллизации).Всоставефокусовфибриллизации определялись многочисленные волокна разной толщины и с разнойархитектоникой. Так, один из типов фокусов фибриллизации матрикса представлялсобой скопления относительно толстых, параллельных волокон, среди которых нередковстречались хрящевые лакуны.
Часть таких лакун достигала гигантских размеров за счетмногочисленных хондроцитов. В отдельных лакунах были видны резко выраженныедистрофические изменения клеток с их последующим разрушением и формированиемгомогенного содержимого. Этот тип фибриллизации матрикса был обозначен нами какпервый тип (Ф1 тип). Второй тип фибриллизации матрикса (Ф2 тип) отличался от типа 1лишь выраженным переплетением волокон, иногда формирующим фигуры в видезвезды.
В очагах Ф1 и Ф2 типов фибриллизации, в отличие от нативного матрикса,хондронная структура матрикса, для которой характерно наличие территориального иинтертерриториального матрикса, отсутствовала. Также в очагах Ф1 и Ф2 типовотмечалисьфокусы«коллагенолиза»волокон,находящихсявихсоставе,собразованием гомогенных масс («луж»). Третий тип фибриллизации матрикса (Ф3 тип)был расположен внутри пустых хрящевых лакун вблизи или внутри очагов Ф1 и Ф2типов. При разрушении стенки лакун их содержимое попадало в окружающий матрикс,при этом волокна Ф3 типа встраивались в состав волокон Ф1 и Ф2 типовфибриллизации матрикса. Четвертый тип фибриллизации матрикса (Ф4 тип) имелсходное с нативным матриксом строение: в нем сохранялась хондронная структура,отсутствовали признаки коллагенолиза.
В то же время, при световой микроскопии наувеличениях ×400 и ×1000 в матриксе Ф4 типа была видна нежная сеточка, состоящая изтонких волоконец, без четких границ переходящая в нативный матрикс.Тинкториальные свойства волокон в составе Ф1-Ф4 типов очагов фибриллизацииЭЦМ реберных хрящей в группе контроля были близки: все они давали красноеокрашивание при окраске пикросириусом красным, темно-синее – при окраске поМаллори (за исключением Ф4 типа), не окрашивались толуидиновым синим. Приокраске гематоксилином и эозином волокна всех типов очагов фибриллизации давалирозовое окрашивание, при этом в отдельных препаратах Ф1 и Ф2 типы проявляли12умеренную базофилию. При окраске толуидиновым синим ЭЦМ в области очагов Ф1Ф4 отличался от нативного более неравномерной метахромазией.При ИГХ-исследовании и нативный матрикс, и волокна Ф1-Ф4 типов давалиположительное окрашивание с антителами к коллагену II типа и негативное – кколлагенам I и III типов.
При НЛОМ и нативный матрикс, и волокна Ф1-Ф4 типовдавали выраженный сигнал генерации второй гармоники, что подтверждало ихколлагеновую природу. При этом интенсивность сигнала от очагов фибриллизации былазначительно выше, чем в нативном матриксе. При ТЭМ и АСМ и нативный матрикс, иволокна Ф1-Ф4 типов состояли из фибрилл с периодом поперечной исчеренности 56-65нм, что также подтверждало их коллагеновую природу.При ТЭМ, СЭМ и АСМ и в нативном матриксе, и в очагах Ф1-Ф4 типов быливыявленыпризнакилатеральнойагрегациитонкихколлагеновыхфибриллсформированием более толстых. Однако, диаметр фибрилл нативного матриксасоставлял менее 120 нм. В то же время, диаметр фибрилл в очагах фибриллизации всехтипов был значительно выше, чем в нативном матриксе (более 120 нм вплоть до 5000 нму крупных агрегатов фибрилл).При ТЭМ, СЭМ и АСМ трехмерная структура нативного матрикса и Ф4 типабыли близки: матрикс в их составе формировал сеть из разнонаправленных фибрилл.Однако, в нативном матриксе диаметр фибрилл был значительно меньше (менее 120 нм)и отсутствовали их крупные агрегаты.
Трехмерная структура Ф1-Ф3 типов былаидентична их гистологическому строению.У детей с ВД грудной клетки реберные хрящи имели аналогичное строение, нохрящевые каналы встречались несколько реже и занимали меньшую площадь, чем вконтроле. Однако, полученные различия между группами оказались недостоверны.Кроме того, в реберных хрящах у детей с ВД грудной клетки общее количествохрящевых лакун, а также – гиперлакунарных зон было достоверно меньше, чем в группеконтроля, в то время, как количество гиполакунарных зон оказалось достоверно больше.Доля пустых лакун в реберных хрящах при ВД грудной клетки была несколько выше,чем в остальных группах, однако полученные различия не достигли уровнястатистической значимости.У детей с ВД грудной клетки также, как и у детей с нормальной грудной клеткой,в матриксе реберных хрящей были выявлены фокусы фибриллизации Ф1-Ф4 типов.13Гистологическое, гистохимическое и ИГХ-исследования, а также НЛОМ, ТЭМ, СЭМ иАСМ показали сходство этих фокусов с фокусами фибриллизации в группе контроля.Однако, у детей с ВД грудной клетки общая площадь очагов фибриллизации, а такжечастота встречаемости и площадь очагов Ф2 типа были достоверно больше, чем вгруппе контроля.
При этом частота встречаемости фокусов Ф2 типа достигаламаксимальных значений среди всех исследуемых групп. Кроме того, у детей с ВДгрудной клетки очаги Ф1 типа встречались достоверно чаще, а очаги Ф4 типа занималидостоверно большую площадь, чем у детей с нормальной грудной клеткой.Корреляционный анализ показал, что при ВД грудной клетки отсутствовалиотрицательные корреляции между средней относительной площадью хрящевых каналови долей пустых лакун, а также – отрицательные корреляции между средним числомлакун и площадью Ф1 типа, в то время, как они были выявлены в группе контроля.Кроме того, при ВД грудной клетки отсутствовали положительные корреляции междусуммарной площадью всех типов АТ и возрастом обследованных детей, а также – междуплощадью Ф1 типа и возрастом, характерные для группы контроля.
В то же время, вотличие от реберных хрящей, взятых у детей с нормальной грудной клеткой, для хрящейпри ее ВД характерно отсутствие положительных корреляций между площадью фокусовФ1, Ф2 и Ф3 типов при наличии отрицательных корреляции между площадью Ф4 и Ф1типов, а также – Ф2 и Ф4 типов. Необходимо отметить, что у детей из этой группыстепень тяжести внешних и внутренних признаков ДСТ коррелировала с площадьюфокусов Ф2 и Ф3 типов.Строение реберных хрящей у детей с КД грудной клетки также было близко кстроению хрящей у детей из остальных исследованных групп. Однако, при КД груднойклетки хрящевые каналы в реберных хрящах встречались наиболее редко среди всехисследованных групп, при этом обнаруженные статистически достоверные различиябыли отмечены только с группой контроля.
Хрящевые каналы у детей с КД груднойклетки также занимали наименьшую площадь среди всех исследуемых групп, однакополученные различия между группами были недостоверны.По сравнению с остальными группами, в реберных хрящах у детей с КД груднойклетки отмечалось наименьшее количество хрящевых лакун, а также – гиперлакунарныхзон, в то время, как количество гиполакунарных зон оказалось наибольшим. При этомполученные различия достигали уровня статистической значимости только с группой14контроля.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
